- Законы
- Кодексы
- Форум
Инструкция по борьбе с вредителями хлебных запасов
Натрий гидроокись, концентрированный раствор.
Кислота серная 2-процентная (11,4 мл серной кислоты плотностью 1,84 г/куб. см разбавить водой до 100 мл. Серную кислоту вливают в воду).
Перед проведением анализа готовят поглотительную смесь: в отдельную колбу наливают 100 мл 3-процентного йодноватокислого калия и 10 мл 5-процентного йодистого калия, смесь перемешивают.
П.13.3. Приборы и посуда.
Водяная баня для зерновых сосудов.
Электроплитка.
Поглотители.
Пипетки на 1, 5, 25 мл.
Бюретки на 10 и 25 мл.
Конические колбы плоскодонные на 300 - 500 мл.
Сосуды Бабо.
Мерные колбы на 200 и 1000 мл.
Сосуды для зерна.
П.13.4. Описание определения.
При определении содержания фосфина прибор собирают по следующей схеме: сосуд Бабо - зерновой сосуд с анализируемой пробой продукта, помещенный в водяную баню, - поглотитель - аспиратор.
Водяную баню для зернового сосуда заполняют водой и ставят на электроплитку для нагрева.
На технических весах взвешивают пустой сосуд для зерна, насыпают в него анализируемую пробу продукта и взвешивают с точностью до 1 г (сосуд должен быть заполнен полностью).
При анализе зерна в сосуд с зерном добавляют 30 мл 2-процентной серной кислоты.
Заполняют поглотитель на 1/3 поглотительной смесью (поглотитель заполняют при помощи пипетки через колено с капилляром).
Резиновыми трубками соединяют короткое отводное колено поглотителя с аспиратором.
Зерновой сосуд с анализируемой пробой погружают в кипящую водяную баню и соединяют короткое отводное колено зернового сосуда с поглотителем, длинное - с сосудом Бабо.
Включают аспиратор. Медленно открывают кран сначала на коротком отводном колене, затем на длинном отводном колене зернового сосуда.
Скорость протягивания воздуха через систему регулируют зажимами. Время анализа - 10 мин.
После этого закрывают кран на длинном отводном колене сосуда, выключают аспиратор, отсоединяют поглотитель. Зерновой сосуд вынимают из бани, высыпают его содержимое.
Содержимое поглотителя количественно переносят в коническую колбу на 300 мл, поглотитель тщательно промывают дистиллированной водой (жидкость из поглотителя выливают через отводное колено без капилляра - короткое отводное колено).
Выделившийся йод оттитровывают 0,001 Н стандартным раствором гипосульфита натрия в присутствии крахмала (если окраска раствора слабо-желтая, то до начала титрования следует добавлять крахмал; если раствор имеет коричневую или темно-желтую окраску, то сначала надо оттитровать его гипосульфитом натрия до слабо-желтой окраски, а затем добавить крахмал).
Расчет остаточного содержания фосфина в зерне и зернопродуктах проводят по формуле:
А x 0,04
Х = --------,
Р
где:
Х - содержание фосфина, мг/кг;
А - количество гипосульфита натрия 0,001 Н, пошедшего на титрование, мл;
0,04 - количество фосфина, соответствующее точно 1 мл 0,001 Н раствора гипосульфита натрия, мг;
Р - масса пробы продукта, кг.
Приложение 14
МЕТОДИКА КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБОФОСА, МЕТАТИОНА, ВОЛАТОНА, ДДВФ И АКТЕЛЛИКА В ЗЕРНЕ, МУКЕ И НА МЕШКОВИНЕ
П.14.1. Принцип метода.
Метод основан на экстракции пестицидов из зерна и продукции четыреххлористым углеродом, окислении препаратов до ортофосфата персульфатом аммония с последующим колориметрированием по синему фосфорномолибденовому гетерокомплексу. Оптическая плотность раствора измеряется на фотоколориметре с красным светофильтром с длиной волны 597 ммк.
Чувствительность метода 0,5 мкг в пробе.
П.14.2. Реактивы и растворы.
Аскорбиновая кислота - 2-процентный раствор (2 г аскорбиновой кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной свежеприготовленной воды).
Аммоний молибденовокислый - 2,5-процентный раствор в 10 Н серной кислоты (10 Н серная кислота - 140 мл серной кислоты удельной массой 1,84 развести в 500 мл воды; 2,5 г аммония молибденовокислого растворить в 100 мл 10 Н серной кислоты).
Мочевина - 0,2 М раствор (1,2 г мочевины растворить в 100 мл воды).
Аммоний надсернокислый (персульфат аммония) - 0,25 М раствор (5,7 г персульфата аммония растворить в 10 мл воды).
Изобутиловый спирт.
Четыреххлористый углерод.
Калий фосфорнокислый однозамещенный.
П.14.3. Приборы и посуда.
Фотоэлектроколориметр ФЭК-М или другой марки.
Встряхиватель.
Водяная баня для пробирок.
Штатив для пробирок металлический.
Колбы конические на 50 и 100 мл.
Пробирки.
Пипетки на 1, 2, 5, 10 мл с делениями.
Колбы мерные на 50, 100, 250 мл.
Воронки стеклянные диаметром 50 и 75 мм.
Бюксы стеклянные на 5 и 10 мл.
Бумажные фильтры или фильтровальная бумага.
Колбы конические с притертыми пробками на 300 - 500 мл.
Шприцы на 2, 5, 10 мл или резиновая груша.
П.14.4. Построение калибровочного графика.
Калибровочный график для определения фосфорорганических инсектицидов строят в стационарных условиях в лаборатории.
На аналитических весах взвешивают 0,2742 г однозамещенного фосфорнокислого калия. Количественно навеску переносят в мерную колбу на 250 мл, растворяют в дистиллированной воде, подкисленной несколькими каплями серной кислоты. Это стандартный раствор N 1. Раствор годен в течение 2 - 3 нед.
Стандартный раствор N 2 - 10 мл стандартного раствора N 1 пипеткой вводят в мерную колбу на 250 мл и доливают водой до метки. 1 мл стандартного раствора N 2 содержит 10 мкг фосфора.
В ряд пробирок вносят 0, 0,05, 0,1, 0,2... 1 мл стандартного раствора N 2, что соответствует 0, 0,5, 1, 2... 10 мкг фосфора.
Затем в пробирку приливают 2 мл 0,25 М раствора персульфата аммония и нагревают 10 мин. на кипящей водяной бане. Затем быстро охлаждают. Прибавляют 3 мл 0,2 М раствора мочевины, тщательно перемешивают, помещают в кипящую баню на 5 мин. Быстро охлаждают в водяной бане. Приливают 1 мл 2,5-процентного аммония молибденовокислого, перемешивают, приливают 1 мл 2-процентной аскорбиновой кислоты, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 2 мин., после чего снова охлаждают. Раствор окрашивается в синий цвет. Добавляют в пробирки по 3 мл изобутилового спирта. Пробирки встряхивают. Окраска раствора переходит в верхний слой (изобутиловый спирт), оптическую плотность которого измеряют на ФЭК при фильтре N 8 (длина волны 597 нм) в кювете толщиной 5 мм. В качестве контрольных (не менее двух) используют растворы, где не добавляли стандартного раствора. По полученным данным на миллиметровой бумаге строят калибровочный график.
На миллиметровой бумаге наносят оси абсцисс (горизонтальную) и ординат (вертикальную). На оси абсцисс откладывают мкг фосфора, на оси ординат - показания ФЭК. На график наносят полученные при определении точки и строят график.
П.14.5. Проведение анализа.
Для определения содержания инсектицидов в зерне, муке и на мешковине в качестве экстрагента используют четыреххлористый углерод. Величина образца и объем экстрагента следующие:
-------------+----------------+------------------+---------------- ¦ Образец ¦ Масса, площадь ¦ Объем CCl ¦Объем экстракта¦ ¦ ¦ образца ¦ 4 ¦для анализа, мл¦ ¦ ¦ ¦для экстракции, мл¦ ¦ +------------+----------------+------------------+---------------+ ¦Зерно ¦50 г ¦30 ¦20 ¦ ¦Мука ¦50 г ¦75 ¦20 ¦ ¦Мешковина ¦10 - 25 кв. см ¦15 ¦10 ¦ -------------+----------------+------------------+----------------
Анализируемый образец помещают в коническую колбу с притертой пробкой
на 300 - 500 мл для зерна и муки и на 100 мл для мешковины. Экстрагируют
препараты в течение 20 мин. на встряхивателе или вручную. Затем
четыреххлористый углерод отфильтровывают через бумажный фильтр в конические
колбы. Из фильтра отбирают 20 мл при анализе зерна и муки и 10 мл при
анализе мешковины в стаканчики на 50 мл и выпаривают до 1 - 2 мл на водяной
бане. Затем раствор количественно переносят в пробирки. Стаканчики 2 - 3
раза промывают CCl так, чтобы общий объем в пробирке был равен 5 мл.
4
Пробирки с раствором инсектицида помещают в водяную баню с температурой
около 70 °C, которую постепенно нагревают, доводя до кипения. В пробирках
четыреххлористый углерод выпаривают досуха.
Далее ведут определение, как и при построении калибровочного графика.
При экстракции фосфорорганических инсектицидов из муки и зерна четыреххлористым углеродом экстрагируют и жиры, которые после выпаривания экстрагента остаются в пробирке в виде нерастворимого осадка. Чтобы этот осадок не мешал при колориметрировании, перед добавлением в пробирки молибдата аммония осадок быстро отфильтровывают через бумажный фильтр (диаметром 50 мм) в сухие пробирки.
В качестве растворов для сравнения используют не менее двух контрольных растворов, где экстракт взят из образцов без препарата.
Расчет производят по формуле:
А x Б x К
Х = ----------, мкг/г, мг/кг,
В x Г x К
1
где:
А - количество фосфора, найденное по калибровочному графику, мкг;
Б - количество экстракта, взятое для экстракции, мл;
Г - масса образца (г) или площадь мешковины, кв. см;
В - количество экстракта, взятое для анализа, мл;
К - коэффициент пересчета фосфора на соответствующий инсектицид:
карбофос - 10,66, ДДВФ - 7,13, метатион - 8,93, волатон - 9,17, актеллик -
9,85;
К - коэффициент экстракции препарата из продукции.
1
КОЭФФИЦИЕНТЫ ЭКСТРАКЦИИ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ИНСЕКТИЦИДОВ ИЗ ЗЕРНА, МУКИ И МЕШКОВИНЫ
--------------+----------------+----------------+----------------- ¦ Препарат ¦ Зерно ¦ Мука ¦ Мешковина ¦ +-------------+----------------+----------------+----------------+ ¦Карбофос ¦0,67 +/- 0,04 ¦0,95 +/- 0,06 ¦0,83 +/- 0,05 ¦ ¦ДДВФ ¦0,54 +/- 0,03 ¦0,80 +/- 0,05 ¦0,85 +/- 0,04 ¦ ¦Метатион ¦0,56 +/- 0,04 ¦0,98 +/- 0,07 ¦0,90 +/- 0,06 ¦ ¦Волатон ¦0,58 +/- 0,03 ¦0,83 +/- 0,05 ¦0,93 +/- 0,06 ¦ ¦Актеллик ¦0,78 +/- 0,06 ¦0,97 +/- 0,08 ¦- ¦ --------------+----------------+----------------+-----------------
Приложение 15
МЕТОДИКА КАЧЕСТВЕННО-КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБОФОСА, ДДВФ, МЕТАТИОНА, ВОЛАТОНА, АКТЕЛЛИКА В ЗЕРНЕ
П.15.1. Принцип метода.
Метод основан на разложении фосфорорганических инсектицидов под действием серной кислоты с последующим обнаружением фосфатионов в минерализате с помощью молибдата натрия и гидразингидрата.
П.15.2. Метрологическая характеристика метода.
Метрологическая характеристика метода приведена в табл. П.15.1.
Таблица П.15.1
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
-----------------------------+--------------------------------------------- ¦ Параметры ¦ Фосфорорганические инсектициды ¦ ¦ +--------+--------+--------+--------+--------+ ¦ ¦карбофос¦метатион¦ ДДВФ ¦волатон ¦актеллик¦ +----------------------------+--------+--------+--------+--------+--------+ ¦Минимальное определяемое ¦0,1 ¦0,1 ¦0,1 ¦0,2 ¦0,5 ¦ ¦количество, мкг ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Нижний предел обнаружения, ¦0,12 ¦0,12 ¦0,12 ¦0,24 ¦0,60 ¦ ¦мг/кг ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Число параллельных ¦9 ¦9 ¦9 ¦9 ¦9 ¦ ¦определений ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Среднее значение ¦68 ¦59 ¦57 ¦60 ¦78 ¦ ¦определения, % ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Стандартное отклонение, % ¦4,3 ¦5,1 ¦3,2 ¦5,2 ¦4,4 ¦ ¦Доверительный интервал ¦68 +/- 3¦59 +/- 5¦57 +/- 3¦60 +/- 5¦78 +/- 4¦ ¦среднего, %, при p = 0,95 и ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦n = 9 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ -----------------------------+--------+--------+--------+--------+---------
П.15.3. Избирательность.
Обнаружению мешают соединения мышьяка, а также в большом количестве органические вещества.
П.15.4. Реактивы и растворы.
Четыреххлористый углерод.
Серная кислота, х.ч., удельная масса 1,84.
Уксусная кислота ледяная, х.ч.
Натрий углекислый безводный.
Гидразингидрат.
Натрий молибденовокислый.
Натрий фосфорнокислый однозамещенный.
Водный раствор смеси углекислого натрия, гидразингидрата и уксусной кислоты (свежеприготовленный в день анализа): в мерную колбу на 100 мл помещают 17 г безводного углекислого натрия, наливают 1/3 колбы дистиллированной воды, размешивают до полного растворения соли. Добавляют 0,85 мл гидразингидрата, раствор перемешивают, затем добавляют 2,3 мл уксусной кислоты, перемешивают и доводят объем раствора дистиллированной водой до метки.
3-процентный водный раствор молибдата натрия. К 3 г молибдата натрия добавляют 97 мл дистиллированной воды.
Стандартные растворы инсектицидов в четыреххлористом углероде с содержанием от 0,1 до 10 мкг/мл.
На аналитических весах в предварительно взвешенный бюкс отвешивают от 0,05 до 0,10 г инсектицида с известным содержанием активнодействующего вещества. Количественно переносят в мерную колбу на 50 - 100 мл, растворяя его в четыреххлористом углероде (стандартный раствор "А").
Стандартный раствор для приготовления искусственной шкалы. На аналитических весах отвешивают 0,2742 г однозамещенного фосфорнокислого калия, количественно переносят его в мерную колбу на 250 мл, растворяют в дистиллированной воде, подкисленной 2 - 5 каплями серной кислоты, доводят объем жидкости в колбе до метки и тщательно перемешивают (стандартный раствор N 1). Раствор годен в течение 2 - 3 нед. После этого пипеткой отбирают 1 мл стандартного раствора N 1, вводят его в мерную колбу на 250 мл, доливают дистиллированной водой до метки и перемешивают (стандартный раствор N 2).
П.15.5. Приборы, аппаратура и посуда.
Весы технические.
Весы лабораторные.
Фотоэлектроколориметр ФЭК-56м-УК2.
Аппарат для встряхивания.
Колбы мерные на 25, 50, 100, 250 мл.
Цилиндры мерные на 10, 20, 50, 100 мл.
Колбы конические со шлифом на 50, 250 и 500 мл.
Воронки лабораторные.
Пробирки (дл. 7 - 15 см).
Пипетки на 0,1; 0,2; 1; 5; 10 мл.
Микрошприцы на 1, 10 мкл МШ-1 и МШ-10.
Бумажные фильтры.
П.15.6. Отбор проб.
Отбор проб зерна для определения содержания в них фосфорорганических инсектицидов проводится в соответствии с ГОСТ 13586.3-83 и настоящей Инструкцией.
П.15.7. Проведение определения.
П.15.7.1. Экстракция.
Пробу зерна (50 г) помещают в коническую колбу на 250 - 500 мл, заливают 30 мл четыреххлористого углерода и экстрагируют в течение 20 мин. при помощи механического встряхивания.
Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр в конические колбы на 50 мл.
П.15.7.2. Проведение реакции и измерение оптической плотности окрашенного комплекса.
В пробирку вносят 0,02 мл концентрированной серной кислоты и 0,03 - 0,5 мл экстракта. Объем анализируемого экстракта не должен превышать 0,5 мл.
Пробирку нагревают вдоль ее длины небольшим пламенем горелки в течение 30 - 40 с до полного испарения четыреххлористого углерода (нельзя допускать сильного нагревания кислоты на дне пробирки). Затем пламя увеличивают и нагревают пробирку еще в течение 50 - 100 с, минерализуя все органические вещества, имеющиеся в пробе экстракта. После этого пробирку охлаждают. После охлаждения в нее вносят 0,06 мл раствора смеси углекислого натрия, гидразингидрата и уксусной кислоты, жидкость взбалтывают и прибавляют 0,02 мл 3-процентного раствора молибдата натрия. При наличии фосфорорганических инсектицидов в исследуемой пробе через 1 мин. при анализе карбофоса, метатиона, актеллика, волатона, через 4 мин. - при анализе ДДВФ появляется синее окрашивание. Через 10 мин. в пробирку добавляют 2 мл дистиллированной воды, перемешивают и измеряют оптическую плотность раствора на ФЭК-56М при длине волны 597 (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 3 мм относительно раствора сравнения (дистиллированная вода). Повторность опытов двукратная.
П.15.7.3. Построение калибровочного графика.
В ряд пробирок, содержащих по 0,02 мл концентрированной серной кислоты, микрошприцем или микропипеткой вносят раствор анализируемого инсектицида в четыреххлористом углероде, содержащий 0,05; 0,10... 10,00 мкг действующего вещества инсектицида.
Или в ряд пробирок вносят 0; 0,05; 0,1; 2 мл стандартного раствора N 2, что соответствует 0; 0,05; 0,1... 2 мкг фосфора. Добавляют по 0,02 мл концентрированной серной кислоты.
Далее ведут определение, как описано для анализа экстракта из зерна.
Градуировочный график строят в координатах оптическая плотность - количество инсектицида в мкг или оптическая плотность - количество фосфора в мкг.
П.15.7.4. Обработка результатов анализа.
Содержание инсектицида в мг/кг в анализируемой пробе вычисляют по формуле:
А x Б
Х = ---------,
В x Г x К
где:
Х - содержание инсектицида в зерне, мг/кг;
А - количество инсектицида в пробе, найденное по калибровочному графику, мкг;
К - коэффициент экстракции инсектицида из зерна для: карбофоса - 0,68, метатиона - 0,59, ДДВФ - 0,57, волатона - 0,60, актеллика - 0,78;
Б - количество четыреххлористого углерода, взятое для экстракции инсектицида из зерна, мл;
В - количество экстракта, взятое для анализа, мл;
Г - масса исследуемой пробы, г.
При определении по искусственному градуировочному графику содержание инсектицида в мг/кг вычисляют по формуле:
А x Б x К
1
Х = ----------,
В x Г x К
где:
Х - содержание инсектицида в пробе;
А - количество фосфора в пробе, найденное по калибровочному графику, мкг;
Б - количество четыреххлористого углерода, взятое для экстракции инсектицида из зерна, мл;
В - количество экстракта, взятое для анализа, мл;
Г - масса исследуемой пробы, г;
К - коэффициент экстракции инсектицида из зерна;
К - коэффициент пересчета фосфора на инсектицид для: карбофоса -
1
10,60, метатиона - 8,90, ДДВФ - 7,13, волатона - 9,17, актеллика - 9,85.
П.15.8. Требования безопасности.
Необходимо соблюдать правила безопасности, принятые для работы с органическими растворителями, кислотами и ядовитыми веществами.
Примечание. При проведении массовых анализов фосфорорганических инсектицидов в зерне для сокращения времени проведения анализа и выбраковки образцов зерна с содержанием инсектицидов на уровне МДУ и ниже рекомендуется анализировать следующие объемы экстракта (мл): для карбофоса - 0,03, метатиона - 0,10, ДДВФ - 0,35, волатона - 0,30, актеллика - 0,08.
Отсутствие окраски на последнем этапе анализа говорит о том, что в зерне содержание инсектицида не превышает МДУ.
Приложение 16
МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБОФОСА В ЗЕРНЕ
П.16.1. Принцип метода.
Метод основан на экстракции карбофоса из зерна четыреххлористым углеродом и последующем разложении экстрагированного карбофоса раствором щелочи в присутствии этанола с образованием диметилдитиофосфата натрия и фумарата натрия по реакции:
CH O S CH O S
3 \|| NaOH 3 \|| CHCOONa
P -S-CHCOOC H ----> P -SNa + | + 2C H OH.
/ 2 5 / CHCOONa 2 5
CH O CH O
3 3
Окрашенные растительные пигменты и примеси, которые могут образовываться при щелочном гидролизе карбофоса и мешать дальнейшему определению, удаляют после подкисления соляной кислотой экстракцией четыреххлористым углеродом.
Добавление сернокислой меди в раствор натриевой соли диметилдитиофосфорной кислоты приводит к образованию комплекса, раствор которого в четыреххлористом углероде окрашен в желтый цвет:
CH O S CH O S S OCH
3 \|| 3 \ / \ / \\/ 3
2 P -SNa + CuSO ----> P Cu P
/ 4 / \\/ \ / \
CH O CH O S S OCH
3 3 3
Оптическую плотность этого раствора определяют на ФЭК в сравнении с чистым экстрагентом.
Чувствительность определения - 0,02 мг в пробе, 0,1 мг/кг, полнота и точность определения - 100 +/- 3%.
Метод специфичен.
П.16.2. Реактивы.
Четыреххлористый углерод химически чистый или перегнанный.
Этанол (этиловый спирт абсолютный).
Едкий натр (NaOH) 6 Н раствор (48 г едкого натрия растворить в 200 мл дистиллированной воды).
Соляная кислота (HCl) 7 Н раствор (115,4 мл соляной кислоты налить в мерную колбу на 200 мл и долить до метки дистиллированной водой).
Сульфат меди (CuSO ) 1-процентный раствор (1 г сульфата меди растворяют
4
в 100 мл дистиллированной воды).
Безводный сернокислый натрий (Na SO ).
2 4
Хлористый натрий (NaCl) 2-процентный раствор (20 г хлористого натрия растворяют в 1 л дистиллированной воды).
Карбофос с точно известным содержанием активного вещества в препарате.
П.16.3. Аппаратура.
ФЭК.
Весы аналитические.
Весы технические.
Холодильный шкаф.
Мельница лабораторная.
Штативы (7 шт.).
П.16.4. Посуда.
Колбы для экстракции на 500 - 800 мл с притертыми пробками или с резиновыми пробками с прокладкой из фольги.
Колбы мерные на 50, 200, 250 мл.
Колбы конические на 50, 250 мл.
Делительные воронки на 500 мл (7 шт.).
Пипетки на 1 мл (4 шт.), 5 мл (3 шт.), 10 мл (2 шт.), 25 мл (1 шт.).
Цилиндры мерные на 25 мл (2 шт.), 100 мл (2 шт.), 500 мл.
Бюкс на 10 мл.
Воронки диаметром 30 - 50; 90 - 100 мм.
Секундомер.
Стеклянные палочки.
Шпатель.
П.16.5. Построение калибровочного графика.
На аналитических весах в предварительно взвешенный бюкс помещают навеску карбофоса, в которой содержится точно 50 мг активного вещества. Например, если в препарате карбофоса содержится 30% активного вещества, то навеска Х = (50 x 100) : 30 = 166,7 мг. Навеску из бюкса количественно переносят в мерную колбу на 50 мл. Для этого в колбу вставляют воронку. В бюкс, держа его над воронкой, вносят около 2 мл этанола, растворяют препарат и выливают раствор через воронку в колбу. Эту операцию повторяют около 10 раз. Затем из пипетки бюкс обмывают этанолом снаружи, следя за тем, чтобы ни одна капля не упала мимо воронки. После этого этанолом промывают воронку. Затем доводят до метки колбы этанолом.
Полученный раствор N 1 тщательно перемешивают. В 1 мл раствора N 1 содержится 1 мг активного вещества карбофоса.
В другую мерную колбу емкостью 250 мл отбирают пипеткой 25 мл раствора N 1 и доводят до метки этанолом. В 1 мл полученного раствора N 2 содержится 0,1 мг активного вещества карбофоса. Раствор N 2 используют как стандартный.
В делительные воронки мерным цилиндром вносят по 100 мл четыреххлористого углерода и добавляют в каждую воронку по одному из следующих количеств раствора N 2: 0; 2,5; 5; 10; 15; 20; 25 мл.
В каждую воронку добавляют мерным цилиндром по 25 мл этанола и растворы взбалтывают.
Далее работу проводят не более чем с 1 - 2 воронками одновременно, которые при каждой операции закрывают пробками.
В воронки добавляют пипеткой до 1 мл 6 Н раствора едкого натра, встряхивают в течение 1 мин.
Затем в воронки немедленно добавляют мерным цилиндром по 75 мл раствора хлористого натрия, предварительно охлажденного до температуры не выше 15 °C, и тщательно встряхивают в течение 1 мин.
Воронки устанавливают в штативы, ожидают полного разделения фаз, которое устанавливают по наличию четкой границы между жидкостями.
После расслоения фаз отбрасывают нижний слой, в котором содержится четыреххлористый углерод. Для этого открывают пробку в воронке, медленно открывают нижний кран и при выпуске нижнего слоя следят, чтобы ни одна капля верхнего слоя жидкости не была отброшена.
К оставшемуся верхнему слою жидкости добавляют мерным цилиндром 25 мл четыреххлористого углерода и пипеткой - 1 мл соляной кислоты. Воронку тщательно встряхивают в течение 1 мин. и снова проводят разделение фаз, а нижний слой отбрасывают как можно полнее.
Если на границе слоев образуются пузырьки эмульсии или же четыреххлористый углерод окрашивается в желтый цвет, то дополнительно проводят операцию по разделению фаз с одним четыреххлористый углеродом (без добавления соляной кислоты). При этом пузырьки эмульсии аккуратно вместе с нижним слоем отбрасывают. В воронки пипеткой добавляют точно 15 мл четыреххлористого углерода и 2 мл раствора сульфата меди. Воронку встряхивают в течение 1 мин. и дают слоям разделиться. Нижний слой сливают в коническую колбу или стакан на 50 мл. Верхний слой отбрасывают. В случае образования на границе разделения слоев пузырьков эмульсии нижний слой сливают в коническую колбу или стакан вместе с пузырьками эмульсии. Затем в него добавляют 2 - 3 г безводного сернокислого натрия и перемешивают стеклянной палочкой, фильтруют через бумажный фильтр, после чего колориметрируют фильтрат.
На ФЭК немедленно (поскольку желтая окраска образовавшегося медного комплекса диметилдитиофосфорной кислоты стабильна не более 5 мин.) измеряют оптическую плотность желтого раствора нижнего слоя при 418 ммк.
Измерение проводят в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения четыреххлористый углерод.
ФЭК должен быть включен для прогрева за 10 - 15 мин. до работы на нем. В две кюветы наливают до метки четыреххлористый углерод (не доливая до верхнего края кюветы 0,5 см). Снаружи кюветы тщательно вытирают фильтровальной бумагой. Необходимо следить, чтобы стенки кюветы, через которые проходит свет, были абсолютно чистыми. В третью кювету таким же образом наливают исследуемый раствор (желтый раствор нижнего слоя из делительной воронки) и осуществляют колориметрирование в соответствии с инструкцией работы на ФЭК. Каждый вариант растворов колориметрируют не менее чем в трех повторностях, и все точки наносят на калибровочный график.
По полученным данным строят калибровочный график следующим образом.
На миллиметровой бумаге наносят оси: абсцисс (горизонтальную) и ординат (вертикальную). На оси абсцисс откладывают количество активного вещества карбофоса в масштабе: 10 мл соответствуют 0,1 мг активного вещества карбофоса. На оси ординат откладывают показания ФЭК в масштабе: 5 мм соответствуют 0,01 показания ФЭК. На график наносят полученные при определении точки и соединяют их линией (линия должна быть близкой к прямой под углом около 45°).
Калибровочный график необходимо составлять каждый раз при нарушении работы ФЭК, но не реже двух раз в год.
П.16.6. Техника определения карбофоса в зерне.
На технических весах отвешивают 100 г зерна и размельчают его на мельнице (частицы при этом должны быть размером около 1/8 части зерна). Зерно помещают в коническую колбу на 500 мл и добавляют мерным цилиндром 100 мл четыреххлористого углерода. Колбу закрывают пробкой, интенсивно встряхивают в течение 5 мин. и оставляют на 24 ч при комнатной температуре. Через 24 ч колбу встряхивают в течение 5 мин. и фильтруют через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Затем мерным цилиндром на 100 мл измеряют и записывают объем экстракта и разбавляют его четыреххлористым углеродом до объема 100 мл. Полученный раствор переносят в делительную воронку. Добавляют к нему мерным цилиндром 25 мл этанола и раствор взбалтывают.
Далее анализ проводят, как при построении калибровочного графика.
Полученные на ФЭК показания (число делений на правом барабане) откладывают на оси ординат калибровочного графика. Из этой точки проводят перпендикуляр до пересечения с линией графика. Из точки пересечения опускают перпендикуляр на линию абсцисс. В точке пересечения отсчитывают количество активного вещества карбофоса. Из трех измерений рассчитывают среднюю величину.
Расчет содержания карбофоса в зерне проводят по следующей формуле:
100 x в в
Х = ------- = 1000 -,
0,1 x а а
где:
Х - содержание активного вещества карбофоса в зерне, кг/кг;
100 - количество четыреххлористого углерода, взятое для экстракции, мл;
а - количество экстракта из зерна после фильтрования, мл;
0,1 - количество зерна, взятого для анализа, кг;
в - количество активного вещества карбофоса, отсчитанное по калибровочному графику, мг.
Приложение 17
МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ В ЗЕРНЕ И ЗЕРНОПРОДУКТАХ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ (РАЗРАБОТАНА ВО ВНИИГИНТОКС)
П.17.1. Принцип метода.
В основу методики положен систематический ход анализа фосфорорганических пестицидов карбофоса, ДДВФ, фоксима, метатиона в зерне и зернопродуктах хроматографическими методами после экстракции пестицидов ацетоном.
Систематический ход анализа слагается из этапов: определение пестицидов в экстракте (без его очистки) хроматоэнзимным методом (ТСХЭ) с использованием единой подвижной фазы - хлороформа и различных условий активации соединений на пластинках; подтверждение предварительно установленного пестицида методом газожидкостной (ГЖХ) или тонкослойной (ТСХ) хроматографии с применением условий хроматографирования, специфических для этого соединения.
Систематический анализ позволяет идентифицировать пестициды, рекомендованные в настоящее время для обеззараживания зерна и зернохранилищ, если эти препараты в смеси или если аналитику не известно, каким пестицидом проводилась обработка.
П.17.2. Метрологическая характеристика метода.
Диапазон определяемых концентраций 0,001 - 10 мкг.
Предел обнаружения 0,01 мкг (0,02 мг/кг).
Размах варьирования 75 - 105%.
Среднее значение определения стандартных количеств исследуемых пестицидов методом ТСХЭ - 87%, методом ГЖХ - 81%.
Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5 для метода ТСХЭ (87 +/- 12)%, для метода ТСХ (81 +/- 5)%.
П.17.3. При предварительной идентификации методом ТСХЭ определению
карбофоса, фоксима и метатиона могут мешать фосфорорганические пестициды,
имеющие близкие к ним значения R - фозалон, цидиал, фталофос, фенкаптон,
f
метафос. Однако последние не применяются для обеззараживания зерна и
зернохранилищ.
П.17.4. Реактивы и растворы.
П.17.4.1. Основные стандартные растворы (А) карбофоса, ДДВФ, фоксима, метатиона, актеллика в ацетоне, содержание действующего вещества 100 мкг/мл.
Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора А: раствор Б - 0,5 мл раствора А доводят в мерной колбе до 100 мл ацетоном (содержание пестицида 0,5 мкг/мл); раствор В - 5 мл раствора Б доводят в мерной колбе до 25 мл (содержание пестицида 0,1 мкг/мл).
П.17.4.2. Для экстракции.
Ацетон, х.ч.
Н-гексан, х.ч.
Диэтиловый эфир (для наркоза).
Натрий сернокислый безводный.
Хлороформ, х.ч.
Спирт этиловый ректификат.
Фильтры бумажные (красная лента).
П.17.4.3. Для хроматоэнзимного определения (ТСХЭ).
Силикагель КСК, раздробленный и просеянный через сито, 100 меш.
Кальций сернокислый (CaSO x 2H O), прокаленный в течение 6 ч при
4 2
160 °C.
Бром, ч.
Индоксилацетат, ч.д.а.
Калий железосинеродистый, х.ч., K [Fe(CN )] - 0,05 М водный раствор
3 6
(1,645 г растворяют в 100 мл воды).
Калий железистосинеродистый, х.ч., K [Fe(CN )] x 3H O - 0,05 М водный
4 6 2
раствор (2,110 г растворяют в 100 мл воды).
Ортофосфорная кислота.
Борная кислота, х.ч.
Уксусная кислота, ледяная, х.ч.
Едкий натр, х.ч.
Буферный раствор pH = 8,69. Готовят раствор смеси ортофосфорной (2,1 мл), уксусной (2,3 мл), борной (2,47 г) кислот и доводят дистиллированной водой до 1 л. Для получения буферной смеси с pH = 8,69 к 100 мл указанного раствора прибавляют 65 мл 0,2 Н раствора едкого натра.
Ферментный препарат получают из печени крупного рогатого скота (свежую печень, однократно замороженную и сохраняемую в дальнейшем в холодильнике, можно использовать в течение 6 мес.). Для приготовления ферментного раствора 1 г печени растирают в ступке с 9 мл буферного раствора и фильтруют через вату. К 1 мл полученной сыворотки прибавляют 4 мл буферного раствора и используют этот раствор для опрыскивания пластинок. Используют свежеприготовленный раствор.
Проявляющий реактив: 10 мг индоксилацетата растворяют в 6 мл этанола, прибавляют 6 мл дистиллированной воды, 1 мл раствора железосинеродистого и 1 мл железистосинеродистого калия и хорошо перемешивают. Раствор готовят непосредственно перед опрыскиванием. На одну пластинку расходуется 3 мл смеси.
П.17.4.4. Для хроматографии в тонком слое (ТСХ).
Силикагель КСК, раздробленный и просеянный через сито, 100 меш.
Кальций сернокислый, подготовленный в соответствии с п. П.17.4.3.
Крахмал водорастворимый.
Серебро азотнокислое, ч.д.а.
Бромфеноловый синий индикатор (водонерастворимый).
5-процентный водный раствор уксусной кислоты.
Резорцин, ч.д.а.
Натрий углекислый, ч.
Цинковая пыль.
П-диметиламинобензальдегид.
Азотнокислый висмут, основной, ч.д.а.
Винная кислота, ч.д.а.
Йодид калия, х.ч.
Кислота соляная 0,5 Н (41,15 мл концентрированной соляной кислоты с удельной массой 1,19 разбавляют дистиллированной водой до 1 мл).
Лимонная кислота 4-процентная.
Проявляющие реактивы:
бромфеноловый синий (используют для обнаружения карбофоса, волатона, метатиона). 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона и доводят до 100 мл 0,5-процентным раствором азотнокислого серебра в смеси ацетона с водой 3:1. Через 10 мин. после опрыскивания бромфеноловым синим пластинку опрыскивают 5-процентным раствором уксусной кислоты;
щелочной раствор резорцина (используют для обнаружения ДДВФ). 2-процентный водный раствор резорцина перед опрыскиванием смешивают с 10-процентным водным раствором углекислого натрия в отношении 2:3;
раствор п-диметиламинобензальдегида (используют для обнаружения метатиона на пластинках с добавкой цинка). 0,25-процентный раствор п-диметиламинобензальдегида в этаноле. Раствор перед обработкой пластинок смешивают в соотношении 10:1 с ледяной уксусной кислотой;
реактив Драгендорфа, который готовят следующим образом. Раствор А (17 г основного азотнокислого висмута растворяют в 800 мл дистиллированной воды и добавляют 200 г винной кислоты) смешивают с раствором Б (160 г йодида калия растворяют в 400 мл дистиллированной воды). Перед употреблением 1 мл смеси смешивают с 2 г винной кислоты и 10 мл дистиллированной воды.
П.17.4.5. Для газожидкостной хроматографии (ГЖХ).
Стационарная фаза - металсиликоновый полимер Е-30 в количестве 5% на хроматоне N-AW-НМДС 0,16 - 0,20 мм и в количестве 3% на хроматоне N-AW-НМДС.
Водород.
Азот особой чистоты (содержание O не должно превышать 0,003%).
2
Стекловата.
П.17.5. Приборы и посуда.
П.17.5.1. Для экстракции.
Колбы конические плоскодонные на шлифах емкостью 250 и 100 мл.
Воронки химические диаметром 60 мм.
Цилиндры мерные на 100, 25, 10 мл.
Пробирки мерные на шлифах емкостью 5 - 10 мл.
Ротационный испаритель с набором колб ИР-1М.
П.17.5.2. Для хроматографических определений.
Хроматограф марки "Цвет" с термоионным детектором.
Баллон для азота особой чистоты.
Баллон для водорода.
Компрессор для нагнетания воздуха.
Колонки стеклянные длиной 1 и 3,5 м с внутренним диаметром 3 мм.
Микрошприц на 10 мкл МШ-10.
Стеклянные пластинки размером 9 x 12 см.
Камера для хроматографирования диаметром 15 см, высотой 20 см.
Пульверизаторы стеклянные.
Пластинки силуфол-254 (кроме пластинок, покрытых силикагелем).
Камера для опрыскивания (стеклянный колпак диаметром 250 мм).
Пипетки на 1, 5 и 10 мл.
Мерные колбы емкостью 25, 100 мл.
Микропипетки на 0,1 мл с ценой деления 0,01 мл.
Термостат СШ-35.
Ступка керамическая диаметром 10 см.
Эксикатор.
П.17.6. Подготовка к определению.
П.17.6.1. Подготовка колонок для ГЖХ.
Для заполнения колонки один конец ее закрывают стеклянной ватой и присоединяют к водоструйному насосу, а в другой конец через воронку засыпают сорбент. Заполняют колонку при очень легком просасывании водоструйным насосом. После заполнения отсоединяют насос, закрывают второй конец колонки тампоном из стеклянной ваты. Перед использованием колонку прогревают в течение 12 ч при 250 °C без продувки газом-носителем. Затем продувают газом-носителем азотом при рабочей температуре до стабильного состояния (10 ч). При этом детектор следует отсоединять, чтобы избежать его загрязнения.
П.17.6.2. Приготовление пластинок для ТСХЭ и ТСХ.
П.17.6.2.1. Пластинки с гипсом.
Для приготовления 12 пластинок берут 35 г силикагеля КСК, 2 г сернокислого кальция, приготовленного согласно п. П.17.4.3, и 90 мл дистиллированной воды. Силикагель с гипсом растирают в фарфоровой ступке, прибавляют воду и размешивают до образования однородной массы. 10 г суспензии наносят на пластинку и равномерно распределяют по поверхности. Сушат пластинки строго в горизонтальном положении в течение 18 - 20 ч при комнатной температуре, хранят в эксикаторе.
П.17.6.2.2. Пластинки с крахмалом.
Для приготовления 15 пластинок берут 40 г силикагеля КСК, 1 г крахмала и 125 мл дистиллированной воды. Крахмал заваривают в 20 мл воды, доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо перемешивают. Далее поступают, как описано в п. П.17.6.2.1.
П.17.6.2.3. Пластинки с добавлением цинковой пыли.
Для приготовления 7 пластинок берут 14 г силикагеля КСК, 1,5 г сернокислого кальция, приготовленного согласно п. П.17.4.3, 1 г просеянной цинковой пыли, смешивают в ступке, прибавляют 40 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и наносят на пластинки (по 6 мл).
П.17.6.3. Описание определения.
П.17.6.3.1. Экстракция.
Из пробы зерна, муки, отрубей, измельченного хлеба массой 1 кг методом квартования отбирают три навески по 25 г (зерна 50 г). Пробу заливают 50 мл ацетона и оставляют на час, периодически встряхивая. Сливают растворитель через фильтр, пробу заливают новой порцией ацетона и экстрагируют еще 1 ч. Объединяют обе порции экстракта, сушат безводным сернокислым натрием в течение 15 мин. и переносят в прибор для отгонки растворителей. Упаривают растворитель до объема 1 мл под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C. Остаток из колбы переносят в мерную пробирку, фильтруя через бумажный фильтр, смоченный ацетоном. Ополаскивают колбу ацетоном, фильтруя смывы, доводят объем в пробирке до 5 мл. Проводят предварительную идентификацию хроматоэнзимным методом.
П.17.6.3.2. Хроматоэнзимное определение.
Для хроматоэнзимного определения используют пластинки, приготовленные, как описано в п. П.17.6.2.1. С целью уменьшения краевого эффекта с хроматографической пластинки снимают с краев вдоль направления движения подвижной фазы (со стороны 12 см) слой сорбента шириной 2 - 3 мм. Затем вдоль этой же стороны пластинку разделяют полосами на 4 равные части. Экстракт пробы в объемах 2 и 20 мкл (из общего объема 5 мл) наносят на 1-ю и 3-ю полосы пластинок. Затем в качестве стандарта на 2-ю и 4-ю полосы наносят карбофос в количестве 0,001 и 0,010 мкг.
Пластинку с карбофосом хроматографируют в хлороформе. Затем пластинку активируют бромом. Для этого пластинку после удаления растворителя помещают на 1 мин. в эксикатор, насыщенный парами брома. После удаления избытка брома с пластинки (через 60 мин.) проводят ингибирование. Для этого пластинку опрыскивают свежеприготовленным ферментным раствором и инкубируют в течение 40 - 60 мин. в насыщенном водными парами термостате при температуре 38 °C. Для увлажнения в термостат ставят чашку Петри с водой.
После инкубации пластинки опрыскивают раствором индоксилацетата. Пестициды проявляются в течение 10 - 30 мин. в виде белых пятен на светло-синем фоне.
Количественное определение проводят путем сравнения площади пятна пробы с наиболее близкой к ней по величине площадью стандарта. Пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации соблюдается для исследуемых пестицидов в пределах от 0,001 до 0,100 мкг. Содержание пестицида в пробе рассчитывают по формуле:
A x Y x S x Y
1 2
X = ---------------,
S x Y x P
1 2
где:
A - содержание пестицида в стандарте, мкг/мл;
Y - объем стандарта, нанесенного на пластинку, мкл;
1
S - площадь пятна стандарта, кв. мм;
1
S - площадь пятна пробы, кв. мм;
2
Y - объем экстракта, нанесенного на пластинку, мкл;
2
Y - общий объем экстракта, мл;
P - масса пробы, взятой для анализа, г.
Для подтверждения структуры соединения, установленного хроматоэнзимным
методом, дальнейшее определение проводят методом газожидкостной и
тонкослойной хроматографии.
П.17.7. Газохроматографический анализ.
Для подтверждения наличия в пробе волатона и метатиона,
характеризующихся близкими значениями R (см. п. П.17.8.4), используют
f
метод ГЖХ.
В этом случае для анализа применяют ацетоновый экстракт пробы (5 мл),
полученный, как описано в п. П.17.6.3.1.
Определение проводят на хроматографе марки "Цвет" с термоионным
-10
детектором. Рабочая шкала электрометра 2 x 10 , скорость протяжения ленты
самописца 200 мм/ч, скорость газа-носителя азота 22 мл/мин.
П.17.7.1. Условия хроматографирования.
Определение метатиона.
Колонка стеклянная, длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм.
Носитель хроматон N-AW-НМДС с 5% SE-30.
Температура колонки 190 °C, испарителя 200 °C.
При указанных условиях хроматографирования время удерживания метатиона 3,8 мин. Волатон при этих же условиях разрушается на колонке.
Определение волатона.
Колонка стеклянная, длина 3,5 м, внутренний диаметр 3 мм.
Носитель хроматон N-AW-НМДС с 3% SE-30.
Температура колонки 160 °C, испарителя 175 °C.
При указанных условиях хроматографирования время удерживания фоксима 2,1 мин. При этом пик метатиона размытый, время удерживания его 4,2 мин.
П.17.7.2. Обработка результатов анализа.
Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пиков, расчет ведут по формуле:
A x H x Y x Y
2 1
X = ---------------,
H x Y x P
1 2
где:
A - количество пестицида в стандартном растворе, введенном в
хроматограф, мкг/мл;
Y - объем стандартного раствора пестицида, введенного в хроматограф,
1
мкл;
H - высота пика стандартного раствора пестицида, мм;
1
H - высота пика пестицида в пробе, мм;
2
Y - объем пробы, введенный в хроматограф, мкл;
2
Y - общий объем экстракта после упаривания и разведения, мл;
P - масса анализируемой пробы, г.
П.17.8. Тонкослойнохроматографический анализ.
Для подтверждения структуры исследуемых соединений после предварительной идентификации хроматоэнзимным методом используют также метод хроматографии в тонком слое.
П.17.8.1. Очистка экстракта.
Ацетоновый экстракт (5 мл), полученный, как описано в п. П.17.6.3.1, упаривают на ротационном испарителе под вакуумом при комнатной температуре досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл этанола и вымораживают при 0 °C в течение 30 мин. Выпавшие хлопья отфильтровывают через бумажный фильтр, раствор переносят в пробирку со шлифом емкостью 5 мл, упаривают растворитель под вакуумом на ротационном испарителе (температура бани 45 °C) до объема 0,3 мл и проводят определение методом хроматографии в тонком слое.
П.17.8.2. Определение ДДВФ.
Остаток из пробирки количественно переносят на хроматографическую
пластинку. Используют пластинки с тонким слоем силикагеля КСК и крахмалом,
приготовленные согласно п. П.17.6.2.2. На эту же пластинку наносят
стандартные растворы пестицида в количестве 4 - 20 мкг. Подвижная фаза
н-гексан:ацетон 1:1. Для обнаружения используют раствор резорцина. После
опрыскивания пластинку помещают в сушильный шкаф при температуре 100 °C на
5 - 7 мин. ДДВФ проявляется в виде оранжевых пятен с R 0,56. Нижний предел
f
обнаружения препарата 1 мкг.
П.17.8.3. Определение метатиона.
Остаток из пробирки количественно переносят на хроматографическую
пластинку. Используют пластинки с тонким слоем силикагеля КСК с гипсом и
добавкой цинковой пыли, как описано в п. П.17.6.2.3. На эту же пластинку
наносят стандартные растворы пестицида в количестве 4 - 20 мкг. Подвижная
фаза н-гексан:ацетон 4:1. Для обнаружения используют раствор
п-диметиламинобензальдегида. После опрыскивания пластинку термостатируют
при 100 - 120 °C в течение 5 - 7 мин. Метатион проявляется в виде желтых
пятен на белом фоне с R 0,41. Нижний предел обнаружения 2 мкг.
f
П.17.8.4. Определение карбофоса, волатона и метатиона.
Остаток из пробирки количественно переносят на хроматографическую
пластинку. Используют пластинки с тонким слоем силикагеля КСК с крахмалом.
На эту же пластинку наносят стандартные растворы пестицида 4 - 20 мкг.
Подвижная фаза хлороформ. Для обнаружения используют бромфеноловый
реактив. Через 10 мин. после опрыскивания этим реактивом фон обесцвечивают
5-процентным раствором уксусной кислоты. Препарат проявляется в виде синих
пятен на светлом фоне R 0,46. Нижний предел обнаружения 1 мкг. Этим же
f
реактивом проявляются волатон и метатион, имеющие в указанных условиях
хроматографирования R 0,85 и 0,91. При наличии последних их идентифицируют
f
методом ГЖХ.
П.17.8.5. Определение актеллика.
Остаток из пробирки количественно переносят на хроматографическую пластинку силуфол-254. На эту же пластинку наносят стандартные растворы пестицида 5 - 10 мкг.
Хроматографирование проводят в смеси растворителей н-гексан: ацетон в соотношении 10:1. Когда фронт растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают, сушат и обрабатывают проявляющим реактивом Драгендорфа.
При наличии актеллика в пробах проявляются пятна оранжевого цвета. При использовании пластинок силуфол-254 просматривают пластинки под лампой "Хроматоскоп". Зоны локализации актеллика обнаруживаются в виде сиренево-фиолетовых пятен на желтом флуоресцирующем фоне.
П.17.8.6. Обработка результатов анализа.
Количественное определение проводят путем сравнения проб со стандартами. При количествах 1 - 20 мкг для исследуемых пестицидов наблюдается пропорциональная зависимость концентрации от площади пятна. При большем содержании пестицидов берут аликвотную часть пробы. Содержание каждого вещества в пробе рассчитывают по формуле:
A x S
2
X = ------,
S x P
1
где:
A - содержание пестицида в стандарте, мкг;
S - площадь пятна стандарта, кв. мм;
1
S - площадь пятна пробы, кв. мм;
2
P - масса пробы, взятая для анализа, г.
Приложение 18
МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТЕЛЛИКА И ПЕРМЕТРИНА ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ И ЗЕРНЕ ПШЕНИЦЫ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ (РАЗРАБОТАНА ВО ВНИИГИНТОКС)
П.18.1. Принцип метода.
Метод основан на определении актеллика и перметрина методами газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и тонкослойной хроматографии (ТСХ) после извлечения из анализируемой пробы органическим растворителем.
П.18.2. Метрологическая характеристика метода.
------------------------------------------------+------------+------------- ¦ Показатели и единицы измерения ¦ ГЖХ ¦ ТСХ ¦ +-----------------------------------------------+------------+------------+ ¦Минимально детектируемое количество, мкг: ¦ ¦ ¦ ¦ актеллик ¦0,01 ¦0,5 ¦ ¦ перметрин ¦0,003 ¦3,0 ¦ ¦Суммарная погрешность определения, %: ¦ ¦ ¦ ¦ актеллик ¦12,0 ¦14,6 ¦ ¦ перметрин ¦13,5 - 15,7 ¦17,2 - 19,5 ¦ ¦Нижний предел определения в воздухе, мг/куб. м:¦ ¦ ¦ ¦ актеллик ¦0,0001 ¦0,2 ¦ ¦ перметрин ¦0,005 ¦0,1 ¦ ¦Нижний предел определения в зерне, мг/кг: ¦ ¦ ¦ ¦ актеллик ¦0,002 ¦0,1 ¦ ¦ перметрин ¦0,04 ¦0,06 ¦ ¦Среднее значение определения в зерне со ¦ ¦ ¦ ¦стандартным отклонением, %: ¦ ¦ ¦ ¦ актеллик ¦88,5 +/- 2,5¦85,8 +/- 2,5¦ ¦ перметрин ¦72,0 +/- 2,2¦82,0 +/- 2,2¦ ¦Доверительный интервал среднего при p = 0,95%: ¦ ¦ ¦ ¦ актеллик ¦85,3 - 91,7 ¦82,3 - 88,7 ¦ ¦ перметрин ¦69,2 - 74,8 ¦69,2 - 74,8 ¦ ------------------------------------------------+------------+-------------
П.18.3. Условия отбора, хранения проб и подготовка их к анализу.
Отбор проб воздуха проводится следующим образом.
Воздух, содержащий аэрозоли и пары исследуемых инсектицидов, аспирируют со скоростью 1 л/мин. через помещенный в фильтродержатель бумажный фильтр "синяя лента" и последовательно с ним соединенную склянку Дрекселя, содержащую 100 мл смеси ацетона и воды в соотношении 7:3, в течение 30 мин. Для определения 1/2 ПДК суммы актеллика и перметрина следует отобрать не менее 30 л воздуха.
Длительность хранения пробы в холодильнике не более двух дней.
П.18.4. Реактивы и растворы.
Ацетон, ГОСТ 2603-79.
Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, ГОСТ 4233-77.
Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.
Н-гексан, ч., ТУ 6-09-3375-75.
Стандартные растворы актеллика и перметрина с содержанием действующего вещества 0,1 мг/мл в ацетоне и 0,002 мг/мл в н-гексане. Хранят в холодильнике не более двух месяцев.
Для ГЖХ:
Азот, ГОСТ 9293-74.
Водород.
Для ТСХ:
Серебро азотнокислое, ч.д.а., ГОСТ 1277-63.
Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-74.
Висмут азотнокислый, основной, ч., ГОСТ 4110-75.
Винная кислота, ч., ГОСТ 5817-77.
Калий йодистый, х.ч., ГОСТ 4237-78.
Кальций сернокислый, ч.д.а., ГОСТ 3210-77.
Аммиак 25-процентный водный, ГОСТ 3760-79.
Силикагель Л С 5/40 мкм + 13% гипса (Chemopol, ЧСФР).
Пластинки силуфол (Chemopol, ЧСФР).
Фильтры бумажные обеззоленные "синяя лента", ТУ Б-09-1678-77.
Проявляющие реактивы:
раствор А (реактив Драгендорфа): 1,7 г основного нитрата висмута растворяют в 30 мл дистиллированной воды и добавляют 20 г винной кислоты. Раствор Б: 16 г йодида калия растворяют в 40 г дистиллированной воды. Растворы А и Б смешивают в равных объемах для получения основного раствора. При хранении в темном прохладном месте раствор стоек в течение года. Для обработки пластинки отбирают 1 мл приготовленного основного раствора, прибавляют 2 г винной кислоты и разбавляют 10 мл дистиллированной воды;
нитрат серебра, ГОСТ 1277-81;
проявляющий реагент: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл аммиака и доводят объем до 100 мл ацетоном. Хранят в темном месте. Для обработки 1 пластинки берут 10 мл раствора.
Приготовление пластинок: 14 г силикагеля и 1 г гипса тщательно смешивают с 40 мг дистиллированной воды. Полученную однородную массу наносят на 6 - 7 пластинок размером 90 x 120 мм (пластинки предварительно обезжиривают).
П.18.5. Приборы, аппаратура, посуда.
Электроаспиратор для отбора проб воздуха, ТУ 64-1-862-77.
Фильтродержатели.
Склянка для промывания и очистки газов (склянка Дрекселя), ТУ Ц5-11-1062-75.
Ротационный вакуумный испаритель для отгонки растворителей ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Водяная баня, ТУ 64-1-423-74.
Воронки делительные 250 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы конические на 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72.
Воронки химические диаметром 6 см, ГОСТ 9613-75.
Колбы мерные на 25 мл, ГОСТ 1770-74.
Пипетки на 0,1 и 1 мл, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные на 50 мл, ГОСТ 1770-74.
Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10591-74.
Пластинки стеклянные 90 x 120 мм.
Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации или с детектором по захвату электронов, а также с термоионным детектором (марки "Цвет", "Газохром" или др.). Колонка стеклянная: длина 0,5 - 1,0 м, диаметр 3 мм. Заполнены:
А: хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) 5% SE-30, или хроматон N-AW (0,125 - 160 мм) 3% OV-1, или хроматон (0,100 - 0,125 мм) ПСМ-100.
Б: хроматон N-DW-ДМС (0,125 - 0,160 мм) 5% SEДС550.
Микрошприц 10 мкл.
П.18.6. Подготовка пробы для анализа актеллика и перметрина в воздухе.
Бумажный фильтр, содержащий аэрозоли актеллика и перметрина, вынимают из фильтродержателя и помещают в коническую колбу, заливают 20 мл ацетона, перемешивая в течение 60 мин. Затем экстракцию проводят еще дважды тем же количеством растворителя по 30 мин. Экстракты объединяют, сушат безводным сернокислым натрием, упаривают на ротационном испарителе до объема 1 мл.
Смесь ацетона и воды (7:3), содержащую пары пестицидов, переносят в делительную воронку, прибавляют 100 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют препараты дважды по 20 мл хлороформа. Объединенный хлороформенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия (5 - 7 г) и сливают в колбу для отгонки растворителя. Отгоняют растворитель под вакуумом досуха при температуре бани не выше 40 °C. Растворяют остаток в ацетоне (1 мл) и объединяют его с экстрактом, полученным из фильтра, который использовали для отбора проб воздуха на содержание аэрозолей изучаемых пестицидов. Концентрируют растворитель до объема 1 мл и анализируют хроматографическими методами.
П.18.7. Подготовка пробы для анализа актеллика и перметрина в зерне.
П.18.7.1. Раздельное определение актеллика и перметрина в пробе.
25 - 30 г измельченного зерна помещают в колбу, прибавляют 50 мл смеси, состоящей из 25 мл ацетона и 25 мл 0,1-процентного раствора хлористого натрия, и экстрагируют в течение 60 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют еще дважды тем же количеством растворителя. Экстракты объединяют, фильтруют через бумажный фильтр, охлаждают в течение 1 ч в холодильнике. В случае выпадения осадка экстракт еще раз фильтруют. Затем проводят экстракцию трижды по 30 мл гексана, встряхивая медленно в делительной воронке по 5 мин. каждый раз. Объединенные экстракты сушат безводным сульфатом натрия, упаривают их в ротационном испарителе или в фарфоровой чашке до объема 1 мл. Упаренный экстракт анализируют хроматографическими методами.
П.18.7.2. Одновременное определение актеллика и перметрина в пробе.
10 - 50 г зерна помещают в колбу на 100 мл, прибавляют 10 - 50 мл н-гексана. Экстрагируют в течение 30 мин. на аппарате для встряхивания. Затем оставляют на 24 ч. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр, упаривают в ротационном испарителе или на водяной бане при температуре не более 40 °C до объема 1 мл. Упаренный экстракт анализируют методом ГЖХ на хроматографе с детекторами постоянной скорости рекомбинации или по захвату электронов.
П.18.8. Хроматографирование.
П.18.8.1. Газожидкостная хроматография.
При раздельном определении пестицидов в пробе воздуха или зерна для анализа актеллика аликвотную часть (3 - 5 мкл) сконцентрированного экстракта вводят в газовый хроматограф с термоионным или пламеннофотометрическим детектором, а для анализа перметрина - с электроннозахватным детектором.
При одновременном анализе актеллика и перметрина в пробе аликвотную часть сконцентрированного экстракта (25 мкл) вводят в хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации.
Условия хроматографирования приведены в табл. П.18.1.
Таблица П.18.1
УСЛОВИЯ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА АКТЕЛЛИКА И ПЕРМЕТРИНА
--------------------+-----------------------------------------------+------------------- ¦ Параметры ¦ Раздельное определение в пробе ¦ Одновременное ¦ ¦ +-------------------------------+---------------+ определение ¦ ¦ ¦ актеллика ¦ перметрина ¦ актеллика ¦ ¦ +---------------+---------------+---------------+ и перметрина ¦ ¦ ¦ пламенно- ¦ термоионный ¦ электронно- ¦ в пробе ¦ ¦ ¦ ионизационный ¦детектор (ТИД) ¦ захватный ¦ ¦ ¦ ¦детектор (ПИД) ¦ ¦детектор (ЭЗД) ¦ ¦ +-------------------+---------------+---------------+---------------+------------------+ ¦Длина колонки, м ¦1,0 ¦1,0 ¦0,5; 1,0 ¦1,0 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Диаметр колонки, мм¦3 ¦3 ¦3 ¦3 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Твердый носитель ¦Хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) ¦ ¦Хроматон N-AW ДНС ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(0,125 - 0,160 мм)¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Жидкая фаза ¦5% SE-30 ¦ ¦5% SEДС550 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте:
Федеральное