Методические рекомендации по организации и проведению занятий по специфической индикации и лабораторной диагностике особо опасных и некоторых других инфекций

в) рассказать о типовых холерных и Эль-Тор фагах, значении их для диагностики и о распространении явления лизогении среди холерных вибрионов;

г) патогенности, вирулентности и токсигенности холерных вибрионов, методах определения этих свойств, с описанием различных экспериментальных моделей холеры;

д) изменчивости холерных вибрионов, указав, под влиянием каких факторов и в каких направлениях может происходить изменчивость, и подчеркнув возможность утраты ими агглютинабельности (НАГ-вибрионы);

е) рассказать о свойствах нехолерных, галофильных вибрионов и близкородственных микроорганизмов родов Аэромонас и Плезиомонас, о дифференциально-диагностических тестах и трудностях идентификации этих культур.

2) По лабораторной диагностике холеры - определить цели и объекты бактериологического исследования, рассказать о методах и правилах взятия материала от больных лиц, обследуемых на вибриононосительство, различных объектов внешней среды (питьевая вода, хозяйственно-бытовые сточные воды, пищевые продукты, смывы и т.д.). Указать на необходимость быстрой доставки проб в лабораторию, перечислить бакпрепараты и среды, используемые для проведения исследования, подчеркнуть, что среды могут быть использованы только после проверки их качества.

Особое внимание следует уделить изложению следующих вопросов:

а) классической схеме поэтапного исследования на холеру, подчеркнув необходимость пересевов из сред обогащения через 6 - 8 часов, выдачи предварительных ответов, основанных на результатах использования экспрессных и ускоренных методов диагностики, и то, что все исследование на холеру, включая полную идентификацию выделенной культуры, должно укладываться в сроки от 24 - 36 до 48 часов;

б) различным накопительным, селективным и неселективным средам, принципам их конструирования, подчеркнув при этом, что срок исследования на холеру при использовании селективных сред увеличивается;

в) методам идентификации выделенной культуры в целях определения принадлежности ее к роду вибрионов и виду холерных вибрионов, а также основным методам внутривидовой дифференциации вибрионов; рассказать о необходимости определения чувствительности выделенных культур V. cholerae к антибиотикам, к диагностическим холерным фагам;

г) особенностям исследования объектов, содержащих фаг, и особенностям идентификации неагглютинирующихся вибрионов, выделяющихся от людей.

3) По индикации возбудителя холеры - указать, что при исследовании нативного материала и после подращивания его в 1% пептонной воде (через 5 - 6 часов) должны быть использованы экспрессные методы исследования (люминесцентно-серологический и РНГА), сказать о чувствительности и специфичности этих методов при индикации холерных вибрионов.

Необходимо подчеркнуть возможность в сроки, отведенные для индикации (48 часов), не только дать ответ о наличии в исследуемом материале возбудителя холеры с помощью экспрессных и ускоренных методов, но и выделить, идентифицировать чистую культуру возбудителя холеры.

На лекциях желательно использовать следующие наглядные пособия: схемы классификации рода вибрионов, дифференциации вибрионов от родственных микроорганизмов, биохимической и серологической классификации вибрионов, таблицу с данными по устойчивости холерных вибрионов к факторам внешней среды, схемы лабораторной диагностики холеры, идентификации, внутривидовой дифференциации и фаготипирования холерных вибрионов.

Бактериологам рекомендуется подробное освещение всех указанных выше вопросов. При чтении лекций эпидемиологам можно сократить изложение схемы бактериологического исследования и методов идентификации холерных вибрионов, подробно остановиться на устойчивости возбудителя холеры во внешней среде, его чувствительности к холерным фагам и антибиотикам и особое внимание обратить на объекты, подлежащие бактериологическому исследованию, методам их отбора, транспортировки и срокам исследования на холеру.

При проведении практических занятий рекомендуется ознакомить слушателей с основными признаками холерных, нехолерных, галофильных вибрионов и родственных микроорганизмов вибрионов в виде демонстрации.

Для освоения схемы лабораторной диагностики и методов идентификации могут быть рекомендованы четыре варианта.

В первом варианте при наличии времени (30 - 36 часов) по программе занятий и достаточной оснащенности учебной базы слушателям дается возможность освоить все имеющиеся методы диагностики холеры и идентификации ее возбудителя.

При этом предлагаются три задачи.

1) исследование испражнения больного, подозрительного на заболевание холерой, по классической схеме с обязательными пересевами и отбором колоний с помощью косого освещения через 6 - 8 часов после посева, идентификацией выделенной культуры основными методами (определение принадлежности к виду холерных вибрионов и их биотипа), а также определением чувствительности к антибиотикам;

2) исследование воды (с предварительным определением ее pH) по классической схеме с полной идентификацией выделенной культуры, как указано выше. Целесообразно давать курсантам различные варианты задач: исследование воды, зараженной холерными и нехолерными вибрионами. По ходу решения первой и второй задач слушатели используют на различных этапах исследования экспрессные методы (люминесцентно-серологический и иммобилизацию подвижности О-холерной сывороткой и диагностическими фагами "C" и II Эль-Тор) и ускоренные методы Ермольевой - Полева, Попковой и др.;

3) смыв для индикации в нем возбудителя холеры. Эту задачу слушатели решают с использованием указанных выше экспрессных методов, применяя их как для исследования нативного материала, так и после подращивания в 1% пептонной воде и для ускоренной идентификации культур из подозрительных колоний.

При втором варианте, когда по программе отведено меньшее количество времени (16 - 25 часов), учебная база обладает всем необходимым, слушателям предлагаются две задачи:

1) исследования испражнения больного, подозрительного на заболевание холерой, по классической схеме с полной идентификацией выделенной культуры, как и при первом варианте;

2) исследование воды с использованием экспрессных и ускоренных методов.

В третьем варианте, при меньшем количестве времени, отведенном для практических занятий, необходимо, чтобы слушатели провели один бактериологический анализ испражнений по классической схеме с дополнительным использованием на всех этапах основных экспрессных методов (люминесцентно-серологического, иммобилизации О-холерной сывороткой) и ускоренного метода Ермольевой - Полева. Подозрительные колонии в этом случае рекомендуется отбирать через 10 - 12 часов от начала исследования с помощью косого освещения и ускоренно идентифицировать выделенную культуру микроорганизма с помощью реакции агглютинации в бульоне со взвесью из отдельных подозрительных колоний.

И, наконец, в четвертом варианте, который может быть рекомендован при проведении краткосрочных семинаров, слушателям предлагают одну задачу - смыв для индикации в нем возбудителя холеры.

Во всех случаях при идентификации культуры холерных вибрионов определяют чувствительность ее к антибиотикам.

3. Сибирская язва

При чтении лекций необходимо осветить следующие вопросы:

1) По микробиологии сибирской язвы - рассказать о морфологии, характере роста Bac. anthracis, ее биохимических свойствах, антигенной структуре, чувствительности к антибиотикам, устойчивости к факторам внешней среды и дезинфектантам. Особое внимание уделить следующим вопросам:

а) наличию капсулы, значению ее как фактора вирулентности, условиям ее образования;

б) наличию двух форм сибиреязвенного микроба - вегетативной и споровой, - их особенностям и значению каждой из них;

в) сибиреязвенному бактериофагу;

г) таксономии Bac. anthracis, наличию большого числа родственных сапрофитических и условнопатогенных бацилл;

д) тем свойствам, по которым ее можно отличать от других микроорганизмов рода Bacillus;

е) особенностям режима работы с возбудителями сибирской язвы в лаборатории и методам дезинфекции, учитывая наличие споровой формы.

2) По лабораторной диагностике сибирской язвы - изложить основные методы лабораторной диагностики сибирской язвы - классический бактериологический, аллергический, реакция Асколи, ускоренные и экспрессные методы диагностики заболевания и идентификации выделенных культур Bac. anthracis (люминесцентно-серологический, РНГА, поэтапное вскрытие биопробных животных, феномен "жемчужного ожерелья", использование специфического бактериофага, обнаружение капсулообразования). Оценить диагностическую ценность этих методов и сферу их применения. Указать на особенности бактериологического исследования на сибирскую язву "чистого" материала и материала, содержащего постороннюю микрофлору, и изложить методы обработки загрязненного материала перед исследованием. Изложить схему идентификации выделенных культур Bac. anthracis.

При чтении лекции обратить особое внимание на следующие вопросы:

а) необходимость при использовании тех или иных методов диагностики учитывать, в какой форме возбудитель сибирской язвы находится в исследуемом материале (в капсульной, споровой, вегетативной бескапсульной);

б) изложить наиболее рациональную схему бактериологического исследования материала;

в) какие сроки необходимы для ответа о результатах анализа на сибирскую язву;

г) какие методы дифференциации Bac. anthracis от родственных микроорганизмов, в частности от Bac. pseudoanthracis, являются наиболее достоверными;

д) особенности использования люминесцентно-серологического метода диагностики сибирской язвы (методы фиксации препаратов, выбор люминесцирующей сыворотки в зависимости от объекта исследования, специфичность капсульной, споровой и соматической люминесцирующих сибиреязвенных сывороток);

е) значение различных методов лечения для результатов тех или иных диагностических приемов.

3) По индикации возбудителя сибирской язвы - указать, что для этого могут и должны быть использованы оба метода индикации - люминесцентно-серологический и РНГА, - рассказать об особенностях подготовки материала для индикации возбудителя сибирской язвы, о чувствительности указанных методов индикации применительно к Bac. anthracis, о степени их специфичности, о средах, которые должны быть использованы для накопления возбудителя в пробе. Подчеркнуть возможность в сроки, отведенные для индикации (48 часов), не только дать ответ о наличии возбудителя сибирской язвы с помощью индикационных методов, но и выделить и идентифицировать чистую культуру Bac. anthracis.

При изложении теоретического материала по сибирской язве, как и по другим разделам, необходимо ориентироваться на контингент слушателей.

На лекциях желательно использовать следующие наглядные пособия: 1) таблицу, характеризующую свойства сибиреязвенного микроба в сравнении со свойствами других представителей рода Bacillus; 2) данные по устойчивости вегетативной и споровой форм Bac. anthracis к различным факторам внешней среды; 3) схему лабораторной диагностики сибирской язвы.

Для проведения практических занятий могут быть рекомендованы четыре варианта.

1) При наличии времени (не менее 18 часов) по программе занятий и достаточной оснащенности учебной базы слушателям дается возможность практически освоить все имеющиеся на сегодняшний день методы диагностики сибирской язвы и идентификации ее возбудителя.

2) При недостатке времени, когда на практические занятия отведено 10 - 16 часов, а учебная база обладает всем необходимым, часть методов диагностики осваивается курсантами практически, а часть дается в виде демонстрации. В этом случае практически курсанты должны освоить бактериологическую диагностику, использование реакции Асколи, люминесцирующих сибиреязвенных сывороток, феномена "ожерелья" и сибиреязвенного бактериофага.

3) При еще меньшем количестве времени, отведенном на практические занятия (6 - 10 часов), необходимо, чтобы слушатели провели один анализ материала на сибирскую язву бактериологическим методом с использованием люминесцирующих антител и РНГА в качестве экспрессного метода диагностики, а для ускорения идентификации - феномена "ожерелья" и сибиреязвенного бактериофага.

4) На кратковременных семинарах по индикации для практического освоения дается только люминесцентно-серологический метод обнаружения Bac. anthracis.

При первом варианте следует давать слушателям три задачи.

1) исследование содержимого карбункула или мокроты сибиреязвенного больного по классической схеме бактериологической диагностики (микроскопия, посевы на питательные среды, заражение биопробных животных).

Для идентификации выделенной культуры Bac. anthracis слушатели должны использовать все основные методы: посев в бульон, на агар с эритроцитами барана, в желатин, в жидкую желточную среду, в среду с крахмалом, определение подвижности;

2) исследование почвы и смыва с объекта внешней среды. Этот материал как содержащий постороннюю микрофлору должен быть слушателями перед исследованием обработан либо по Дольду, либо прогреванием на водяной бане. При исследовании используется как классический бактериологический метод (см. выше), так и ускоренные методы обнаружения и идентификации Bac. anthracis (люминесцентно-серологический, РНГА, обнаружение капсулы in vitro, феномен "ожерелья", сибиреязвенный бактериофаг).

При идентификации выделенных культур Bac. anthracis кроме указанных выше методов желательно использовать среду с фенолфталеинфосфатом, определение темпа роста, способности роста при 45 °C и пробу на пенициллиназу. Желательно, чтобы слушатели параллельно с Bac. anthracis выделяли культуры почвенных сапрофитических бацилл и идентифицировали их;

3) исследование шерсти или кусочка кожи животного по реакции Асколи с постановкой всех необходимых контролей.

При втором варианте слушателям дают те же три объекта, но при исследовании второго из них они используют только те ускоренные методы обнаружения и идентификации Bac. anthracis, которые были указаны выше для этого варианта. Остальные методы ускоренной идентификации Bac. anthracis, а также дополнительные методы идентификации, указанные в пункте 2 первого варианта, даются в виде демонстрации.

При третьем варианте слушателям дают только мокроту больного или содержимое карбункула, которые они исследуют бактериологическим методом с использованием люминесцирующих антител, РНГА, феномена "ожерелья" и специфического бактериофага.

Наконец, при четвертом варианте слушатели исследуют на наличие различных форм сибиреязвенного микроба (вегетативной капсульной и бескапсульной) с помощью соответствующих люминесцирующих антител мокроту больного, смыв и культуру из подозрительной колонии, выросшей на обычной питательной среде.

Во всех случаях необходимо определять чувствительность выделенных культур сибиреязвенного микроба к антибиотикам.

4. Сап и мелиоидоз

При чтении лекций необходимо изложить основные данные по следующим вопросам:

1) По микробиологии сапа и мелиоидоза - рассказать о морфологии, культуральных свойствах, ферментативной активности, антигенной структуре возбудителей сапа и мелиоидоза, устойчивости их во внешней среде, патогенности для лабораторных животных. Указать на близость ряда свойств обоих возбудителей. Обратить внимание на особенности режима работы с возбудителями сапа и мелиоидоза и методы дезинфекции. Дать краткие сведения о районах распространения сапа и мелиоидоза на земном шаре.

2) По лабораторной диагностике сапа и мелиоидоза - указать объекты, подлежащие исследованию (гной, мокрота, кровь, отделяемое слизистых оболочек больных людей и животных, органы трупа), среды, препараты и оборудование, необходимые для проведения исследования; изложить классический метод диагностики (бактериологическое и биологическое исследование, бактериоскопия, серологическое исследование, при диагностике сапа у животных - аллергический метод) и экспрессные методы (иммуно-люминесцентный и РНГА), оценить диагностическую значимость этих методов и сферу их применения.

3) По индикации возбудителей сапа и мелиоидоза - указать на возможность использования для этой цели обоих методов индикации (люминесцентно-серологического и РНГА); привести данные о чувствительности и специфичности этих методов при сапе и мелиоидозе, о трудности дифференцирования этих возбудителей друг от друга; указать, какие среды следует использовать для их накопления.

При чтении лекций желательно использовать следующие наглядные пособия:

а) микрофотографии возбудителей сапа и мелиоидоза;

б) фотографии колоний указанных возбудителей и характера их роста в жидких средах;

в) препараты органов и тканей лабораторных животных, зараженных сапом и мелиоидозом;

г) схемы лабораторной диагностики сапа и мелиоидоза.

На практических занятиях рекомендуется:

а) познакомить слушателей с морфологией возбудителей сапа и мелиоидоза;

б) продемонстрировать характер роста в жидких и на плотных средах (убитые культуры или фотографии);

в) дать на исследование для обнаружения возбудителей сапа и мелиоидоза с помощью люминесцирующих антител смыв.

Поскольку нет эффективных средств лечения и профилактики этих заболеваний, работать с живыми культурами возбудителей сапа и мелиоидоза на курсах запрещается. При проведении практических занятий следует использовать культуры этих микроорганизмов, убитые формалином в концентрации 0,5%.

5. Туляремия

При чтении лекций необходимо изложить следующее:

1) По микробиологии туляремии - рассказать о номенклатуре и систематике возбудителя туляремии, о морфологии, культуральных и биохимических свойствах, об антигенной структуре, изменчивости, выживаемости возбудителя во внешней среде, чувствительности к антибиотикам и патогенности для человека и животных. Особое внимание уделить следующим вопросам:

а) географическим разновидностям туляремийного микроба, их свойствам;

б) питательным потребностям возбудителя туляремии; особенностям роста на плотных и жидких средах и морфологии клеток, выросших на этих средах;

в) капсуле и значению ее как фактора патогенности (вирулентности);

г) сохраняемости туляремийного микроба в объектах внешней среды, в трупах позвоночных животных, насекомых и при воздействии физических и химических факторов;

д) патогенности туляремийного микроба.

2) По лабораторной диагностике туляремии - указать объекты, подлежащие исследованию, и изложить основные методы диагностики туляремии - классический бактериологический, серологический и аллергический; ускоренные (поэтапное вскрытие биопробных животных и исследование пунктата бубона с применением жидкой среды, использование в качестве биопроб ослабленных животных), экспрессные методы диагностики (люминесцентно-серологический, РНГА) и идентификации выделенной культуры (люминесцентно-серологический, РНГА). Оценить диагностическую ценность этих методов и сферу применения.

При чтении лекции обратить особое внимание на следующие вопросы:

а) какие методы могут быть использованы при исследовании различных объектов внешней среды (вода, воздух, почва, пищевые продукты);

б) особенности исследования "степного материала" (грызуны, эктопаразиты, кровососущие двукрылые);

в) особенности исследования материала от больных;

г) какие сроки необходимы, чтобы дать ответ о результатах анализа на туляремию.

3) По индикации возбудителя туляремии - указать, что для этого должны быть использованы оба метода индикации - люминесцентно-серологический и РНГА; рассказать о подготовке материала для индикации возбудителя туляремии, о методах, которые могут быть использованы для накопления возбудителя в пробе, о чувствительности и степени специфичности указанных методов индикации применительно к Fr. tularensis. Подчеркнуть, что в сроки, отведенные для индикации (48 часов), можно дать ответ о наличии возбудителя туляремии только с помощью экспрессных методов. Выделение и идентификация культуры туляремийного микроба не укладываются в эти сроки.

На лекциях желательно использовать следующие наглядные пособия:

1) схему исследования на туляремию объектов внешней среды;

2) схему исследования грызунов, отловленных живыми и павших, относящихся к различным группам по восприимчивости и инфекционной чувствительности (классификация Н.Г. Олсуфьева и Т.Н. Дунаевой);

3) схему исследования биопробных животных первого и второго пассажа;

4) схему диагностики туляремии у человека;

5) таблицу свойств разновидностей возбудителей туляремии.

Для проведения практических занятий могут быть рекомендованы следующие варианты.

1). При наличии времени (не менее 30 - 36 часов) по программе занятий и достаточной оснащенности учебной базы слушателям дается возможность практически освоить все имеющиеся на сегодняшний день методы диагностики туляремии, индикации и идентификации ее возбудителя при исследовании нескольких объектов.

2) Если на практические занятия отведено меньшее количество часов (20 - 24), а учебная база обладает всем необходимым, методы диагностики осваиваются курсантами при исследовании какого-либо одного объекта.

3) При еще меньшем количестве (16 - 18 часов) времени необходимо, чтобы слушатели провели один анализ материала на туляремию экспрессными методами и ускоренным бактериологическим методом (с поэтапным вскрытием биопробных животных) с применением ускоренных методов идентификации выделенной культуры.

4) На семинарах по индикации для бактериологов даются только экспрессные и ускоренные методы обнаружения туляремийного микроба.

При первом варианте занятия следует начинать с методов приготовления свернутых и жидких желточных сред (практическое освоение и знакомство с другими средами, применяемыми для выращивания туляремийного микроба (демонстрация характера роста возбудителя на этих средах и мазков из чистых культур)). После этого курсантам рекомендуется давать следующие задачи:

1) исследование "степного материала". Для этой цели рекомендуется двум курсантам давать по 5 - 6 мышей (линии С-57 Br или белых); в это число должны входить мыши, павшие в результате заражения Fr. tularensis и забитые здоровыми. Желательно, чтобы некоторые животные были загнившими. При этом курсанты, проводя анализ вдвоем, должны выбрать метод исследования применительно к каждому животному, а также решить вопрос о необходимости постановки индивидуальных и групповых биопроб. Этот материал может быть исследован экспрессными методами (люминесцентно-серологическим, РНГА) и по классической схеме бактериологической диагностики - микроскопия, посевы на питательные среды, приготовление термоэкстракта для реакции преципитации, заражение биопробных животных.

Для идентификации выделенной культуры Fr. tularensis должны быть использованы все основные методы (изучение характера роста на средах, изучение морфологии клеток в мазках, посевы на простые питательные среды, развернутая реакция агглютинации со специфической сывороткой, а также использование люминесцирующих туляремийных сывороток);

2) исследование воды - курсантам даются мембранные фильтры после фильтрации воды. Этот анализ должен быть проведен классическим бактериологическим и ускоренными методами (поэтапное вскрытие биопробных животных или исследование пунктата регионарного лимфатического узла у морских свинок с использованием жидкой желточной среды для накопления возбудителя). Параллельно следует применить экспрессные методы диагностики (использование люминесцирующей туляремийной сыворотки).

Серологическая диагностика туляремии у человека (развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови, микросерореакция и кровянокапельная реакция агглютинации).

При втором варианте курсантам дают одну задачу (исследование грызунов). Этот анализ должен быть проведен с использованием наряду с экспрессными методами (люминесцентно-серологическим и РНГА) классических бактериологических исследований.

При третьем варианте курсантам для исследования дают смыв с пищевых продуктов (зерна), воздух (жидкость из импинжера или плотный фильтр после просасывания воздуха) или воду (мембранные фильтры после фильтрации воды), которые они исследуют экспрессными и ускоренными методами. При выделении культуры возбудителя, наряду с обычными методами идентификации, должны быть применены и экспрессные (люминесцентно-серологический, РНГА).

При четвертом варианте исследуют материал (труп грызуна, смыв и т.п.) на присутствие возбудителя туляремии экспрессными методами (люминесцентно-серологическим и РНГА).

6. Бруцеллез

При чтении лекций необходимо изложить следующие данные:

1) По микробиологии бруцеллеза - современную классификацию бруцелл, патогенность для человека, морфологические, тинкториальные и культуральные свойства бруцелл, ферментативную активность, антигенную структуру, чувствительность к антибиотикам, устойчивость к факторам внешней среды, явление бактериофагии, методы дифференциации видов и биотипов бруцелл, основные формы и факторы изменчивости и пробы, используемые для обнаружения диссоциации (изменчивости) бруцелл.

2) По лабораторной диагностике бруцеллеза - изложить основные методы диагностики: бактериологический, серологический, аллергический, биологический, экспрессные (люминесцентно-серологический, РНГА). Указать, какие объекты подлежат исследованию:

а) в очаге;

б) при исследовании больных людей и животных.

Изложить принципы бактериологического исследования при бруцеллезе, методы обработки материала, содержащего постороннюю микрофлору, особенности исследования "чистого" и загрязненного материалов. Изложить правила проверки качества питательных сред. Объяснить схему идентификации выделенных культур бруцелл. При изложении серологических методов исследования (реакции Райта, Хеддльсона, Кумбса, РНГА, РСК) указать их диагностическую ценность.

3) По индикации бруцелл - дать характеристику люминесцирующих бруцеллезных антител, эритроцитарных диагностикумов, используемых для обнаружения бруцелл, изложить данные о чувствительности и специфичности люминесцентно-серологического метода и РНГА при индикации бруцелл. Подчеркнуть очень медленное накопление этих возбудителей на искусственных питательных средах и относительно быстрое - в органах биопробных животных при внутрибрюшинном их заражении.

На лекциях рекомендуется демонстрировать следующие наглядные пособия:

1) характеристику видов и биотипов бруцелл (таблица);

2) динамику показаний серологических реакций, используемых для диагностики бруцеллеза (схема).

При чтении лекций по микробиологии и лабораторной диагностике бруцеллеза эпидемиологам нужно дать классификацию и основные свойства бруцелл, патогенность для человека, не останавливаясь на методах дифференциации видов бруцелл, изложить схему бактериологического исследования, принципы, оценку и диагностическую значимость основных методов диагностики.

При достаточном количестве времени для проведения практических занятий (около 36 часов) слушателям даются 5 задач.

1) исследование крови больного по классической схеме бактериологической диагностики (посев в бульон и на агар, заражение яиц).

Для идентификации выделенной культуры бруцелл используется постановка реакции агглютинации со специфической агглютинирующей сывороткой, трипафлавиновой пробы и термофлокуляции и для определения вида и биотипа - посев на агар с основным фуксином и тионином, на среду Кристенсена, постановка пробы с фагом "Тб", определение образования сероводорода, реакция агглютинации с моноспецифическими сыворотками. Определяется также чувствительность выделенной культуры бруцелл к антибиотикам;

2) исследование воды или смыва с объекта внешней среды.

Эти объекты исследуют после их концентрации путем фильтрации через мембранные фильтры методом люминесцирующих антител. Поскольку они содержат постороннюю микрофлору, их перед посевом обрабатывают антибиотиками, сеют на агар с антибиотиками (и без них) и заражают морскую свинку. Выделенную культуру идентифицируют люминесцентно-серологическим методом;

3) бактериологическое исследование молока.

    Необработанное  и  обработанное  антибиотиками  молоко сеют на
скошенный  агар.  Создают  условия  повышенной  концентрации  CO .
                                                                2
Выделенную  культуру  идентифицируют  люминесцентно-серологическим
методом и с помощью реакции агглютинации;

4) серологическое исследование крови больного. С сывороткой крови больного ставят реакции Хеддльсона, Райта, Кумбса, РНГА, а также используют непрямой метод люминесцирующих антител;

5) серологическое исследование молока.

С молоком ставят кольцевую пробу и с молочной сывороткой - реакцию агглютинации на стекле.

При недостатке времени, когда на практические занятия отведено 15 - 18 часов, необходимо, чтобы слушатели провели исследования:

1) крови - классическим бактериологическим методом с постановкой биопробы; выделенную культуру идентифицируют только до рода Brucella;

2) воды и смыва с объекта внешней среды с использованием люминесцентно-серологического метода. Применяют обработку исследуемого материала антибиотиками, посев на агар с антибиотиками; выделенную культуру идентифицируют люминесцентно-серологическим методом;

3) серологическое исследование крови больного (постановка реакций Хеддльсона, Райта, РНГА).

    Перед  началом  практических  занятий по бруцеллезу слушателям
демонстрируются  мазки из культур бруцелл, свойства разных видов и
биотипов  бруцелл,  методы  создания повышенной концентрации CO  и
                                                               2
метод обнаружения "S" и "R" форм колоний по Вильсону и Уайту.

На семинарах по индикации даются только люминесцентно-серологический метод обнаружения бруцелл и РНГА.

7. Риккетсиозы

При чтении лекций необходимо изложить краткую характеристику риккетсий и риккетсиозов, изложить основные принципы идентификации риккетсий, обратить внимание на четыре основные группы риккетсий, отметить чувствительность риккетсий к антибиотикам.

Сыпной (эпидемический) и крысиный (эндемический) тиф

По микробиологии сыпного и крысиного тифа необходимо привести морфологическую, биологическую, антигенную и иммунологическую характеристику риккетсий Провачека и Музера, методы их культивирования и окраски, подчеркнуть способность этих риккетсий размножаться только в цитоплазме клеток и склонность к обильному размножению с образованием "клеток Музера". Отметить сходство возбудителей сыпного и крысиного тифа и их дифференциацию с помощью сероиммунологических реакций.

По лабораторной диагностике сыпного и крысиного тифа изложить основные методы диагностики: биологический (выделение возбудителя на морских свинках), серологический (реакция связывания комплемента - РСК, реакция агглютинации - РА, реакция непрямой гемагглютинации - РНГА) и люминесцентно-серологический. Показать диагностическую ценность РСК с корпускулярным антигеном для дифференциальной диагностики сыпного и крысиного тифа.

По индикации возбудителей сыпного и крысиного тифа указать, что для этой цели пригодны люминесцентно-серологический метод и РНГА. Подчеркнуть, что флуоресцирующие сыворотки являются группоспецифическими и не дифференцируют риккетсии Провачека от риккетсий Музера. Отметить, что можно рекомендовать биологическое обогащение материала (заражение белых мышей и просмотр материала через 48 - 72 часа после него). Обратить внимание, что в зависимости от исходного материала (сыворотка или материал, содержащий антиген) применимы модификации РНГА - определение антител или индикация возбудителя. Подчеркнуть, что выделение и идентификация риккетсий в сроки, отводимые для индикации, невозможны.

Пятнистая лихорадка Скалистых гор

Дать общую характеристику группы. Отметить наличие возбудителей с различной эпидемиологической значимостью. Подчеркнуть высокую вирулентность возбудителя пятнистой лихорадки Скалистых гор, в то время как сходный с ним возбудитель клещевого сыпного тифа Северной Азии вызывает доброкачественное заболевание. Риккетсии этой группы размножаются в ядре и цитоплазме, накопление необильное.

По микробиологии пятнистой лихорадки необходимо привести сведения по морфологии, биологии, антигенным и иммуногенным свойствам возбудителя. Отметить факт длительного сохранения возбудителя в иксодовых клещах.

По лабораторной диагностике пятнистой лихорадки изложить основные методы диагностики: биологический (выделение возбудителя на морских свинках - самцах), серологический (РСК, РГА), люминесцентно-серологический. Отметить, что РСК с цельнорастворимым антигеном позволяет выявить антитела, общие для всей группы пятнистой лихорадки.

По индикации возбудителя пятнистой лихорадки - показать, что для этой цели пригоден люминесцентно-серологический метод с применением группоспецифической люминесцирующей сыворотки к возбудителю клещевого сыпного тифа Северной Азии. Отметить, что выделение и идентификация возбудителя не укладываются в сроки, отводимые для индикации.

Клещевой сыпной тиф Северной Азии

По микробиологии, диагностике и индикации сходен с возбудителем пятнистой лихорадки Скалистых гор. Дифференциальный диагноз с другими членами группы возможен лишь в РСК с корпускулярным антигеном.

Лихорадка цуцугамуши

По микробиологии лихорадки цуцугамуши необходимо привести морфологическую, биологическую, антигенную и иммунологическую характеристики. Отметить, что большая часть штаммов риккетсий цуцугамуши необильно размножается в желточном мешке куриного эмбриона. Подчеркнуть, что тинкториальные свойства риккетсий цуцугамуши отличаются от других риккетсий. Отметить слабую устойчивость возбудителя к воздействию физических и химических агентов, способность к лизису даже в клетках хозяина. Обратить внимание на существование высоковирулентных штаммов, вызывающих летальность, равную 55%.

По лабораторной диагностике цуцугамуши изложить основные методы: биологический (выделение на белых мышах), серологический (РСК) и люминесцентно-серологический. Отметить, что известно несколько серологических типов возбудителя.

По индикации возбудителя лихорадки цуцугамуши указать, что экспрессные методы их обнаружения находятся в стадии разработки.

Лихорадка Ку

По микробиологии лихорадки Ку дать характеристику морфологических, биологических, антигенных и иммуногенных свойств. Отметить, что возбудитель в клетке накапливается в виде колоний, расположенных в цитоплазме. Обратить внимание на высокую устойчивость к воздействию физических и химических агентов, длительное выживание в воде, молоке и молочных продуктах, мясе, выделениях животных, на предметах внешней среды (шерсть, хлопок, сено, солома и т.п.), устойчивость в аэрозоле.

По лабораторной диагностике лихорадки Ку привести основные методы диагностики: биологический, серологический (РСК, РА), аллергический, люминесцентно-серологический.

По индикации возбудителя лихорадки Ку указать, что для этой цели пригоден люминесцентно-серологический метод с применением типоспецифической сыворотки.

При чтении лекций могут быть использованы следующие наглядные пособия:

1) схема классификации риккетсий;

2) карта мирового распространения риккетсиозов;

3) микрофотография риккетсий.

Практические занятия должны проводиться в соответствии с лекционной программой, и их объем зависит от количества отводимых часов. Для проведения практических занятий могут быть рекомендованы следующие темы:

1) Методы взятия материала, его хранение, транспортировка.

2) Методы культивирования риккетсий.

3) Приготовление мазков, методы окраски и микроскопия.

4) Методы серологической диагностики.

5) Методы экспрессного анализа.

При проведении практических занятий необходимо учитывать, что работа с зараженными животными и куриными эмбрионами может быть проведена в специализированных лабораториях с соблюдением определенного режима работы. К работе могут быть допущены только лица, вакцинированные против лихорадки Ку и сыпного тифа.

8. Натуральная оспа

При чтении лекций необходимо изложить следующие данные:

1) О возбудителе натуральной оспы - рассказать о вирусах, относящихся к группе оспы, о близости их антигенной структуры, морфологии вируса оспы и телец Гварниери, выживаемости возбудителя во внешней среде, отношении к антибиотикам. Особое внимание уделить следующим вопросам:

а) устойчивости вируса оспы по отношению к различным физическим агентам, устойчивости вируса, находящегося в плотной и жидкой фазах;

б) чувствительности вируса оспы к различным химическим агентам и дезсредствам (указать наиболее эффективные дезсредства);

в) особенностям режима работы с возбудителем натуральной оспы в лаборатории и методам дезинфекции.

2) По лабораторной диагностике - изложить основные методы диагностики натуральной оспы - экспрессные методы, основанные на культивировании вируса, серологические методы (РГА и РТГА). Оценить диагностическую ценность этих методов и сферу их применения.

При чтении лекций обратить особое внимание на следующие вопросы:

а) материал для исследования, его взятие, доставка и подготовка к исследованию;

б) при изложении методов диагностики указать на возможность дифференцирования вирусов оспы и вакцины в каждом случае, четко разграничить методы, дающие групповой (вирус оспы и вакцины) и видоспецифический ответы;

в) применение реакции гемагглютинации: РНГА (обнаружение возбудителя в объектах внешней среды, в патологическом материале от больных), РНА (определение специфических антител), РГА (дополнительный метод идентификации при культивировании вируса).

3) По индикации возбудителя натуральной оспы - указать, что для этой цели должны быть использованы: люминесцентно-серологический метод и РНГА, которые позволяют идентифицировать искомый объект как в первичном (нативном) материале, так и после его обогащения на тканевых культурах.

При чтении лекций обратить внимание на следующее:

а) используемые в практике противооспенные люминесцирующие сыворотки и эритроцитарные препараты являются группоспецифическими и поэтому наряду с вирусами натуральной оспы окрашивают и другие вирусы подгруппы осповакцины;

б) положительные результаты экспресс-анализа нативного материала, пробы с помощью иммуно-люминесцентного метода и РНГА дают право на предварительное суждение о наличии в исследуемой пробе вирусов подгруппы осповакцины (натуральной оспы, алястрим, вакцины коровьей оспы и т.д.);

в) для получения более достоверных результатов индикации вируса необходимо использование культур клеток с последующим применением метода люминесцирующих антител и РНГА, а при возможности и других методов;

г) положительный ответ о присутствии в пробе вирусов группы оспы выдается на основании выявления иммуно-люминесцентным методом специфического свечения, положительной РНГА, а также характерных цитоплазматических изменений, подавляемых специфической сывороткой;

д) следует подчеркнуть, что в сроки, предусмотренные схемой специфической индикации для выдачи положительного ответа (до 48 часов), окончательный ответ выдан быть не может;

е) все сомнительные, а при необходимости и отрицательные пробы подлежат дальнейшему исследованию при использовании более углубленных (классических) приемов и методов анализа.

На лекциях желательно использовать следующие наглядные пособия:

1) схему лабораторной диагностики натуральной оспы;

2) схему строения 11 - 12-дневного куриного эмбриона;

3) схему постановки реакции гемагглютинации и торможения реакции гемагглютинации;

4) тканевые препараты с внутриклеточными включениями (тельца Гварниери) или фотографии их.

Для проведения практических занятий могут быть рекомендованы следующие варианты.

1) При наличии времени (не менее 19 часов) по программе занятий и достаточной оснащенности учебной базы слушателям дается возможность практически освоить большую часть имеющихся на сегодняшний день методов лабораторной диагностики натуральной оспы и идентификации ее возбудителя.

2) При недостатке времени, когда на практические занятия отведено меньшее количество (10 - 12) часов, а учебная база обладает всем необходимым, часть методов диагностики осваивается курсантами практически, а часть дается в виде демонстрации. В этом случае слушатели должны практически освоить экспрессные и ориентировочные методы диагностики (реакцию микропреципитации, РНГА), один из методов культивирования вируса (на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона) и серологические методы (реакцию торможения гемагглютинации).

3) При еще меньшем количестве часов (8 - 10), отведенных на практические занятия, необходимо, чтобы слушатели провели один анализ материала на натуральную оспу с использованием ориентировочных экспрессных методов диагностики, все остальные методы дать в виде демонстраций положительных и отрицательных результатов.

При первом варианте слушателям дают две задачи.

При решении первой из них патологический материал исследуют с использованием экспрессных и ориентировочных методов (люминесцентно-серологический метод, если это возможно <1>, РНГА, реакция микропреципитации), методов культивирования на куриных эмбрионах в культуре ткани, с последующим использованием в сомнительных случаях биопробных животных.

--------------------------------

<1> Люминесцентно-серологический метод дает более четкие результаты при исследовании материала от больного, представляющего клеточный пласт эпидермиса (мазки-отпечатки основания папул, везикул).

В качестве второй задачи следует дать сыворотку крови больного, подозрительного на заболевание натуральной оспой. Обнаружение специфических антител должно быть проведено с помощью реакции торможения гемагглютинации.

При втором варианте слушателям для исследования дают те же объекты. При анализе первого объекта (патологический материал) слушатели применяют методы экспресс-диагностики и культивирования возбудителя на хорионаллантоисной оболочке куриных эмбрионов. Методы культивирования возбудителя в культуре ткани и дополнительные методы идентификации возбудителя на лабораторных животных (кроликах) могут быть только продемонстрированы.

Исследование сыворотки крови больного также проводят с помощью реакции торможения гемагглютинации.

При третьем варианте патологический материал исследуют, применяя экспрессные методы (РНГА, реакцию микропреципитации в агаре).

9. Орнитоз

При чтении лекций необходимо обратить внимание на следующие вопросы:

1. Общая характеристика биологических свойств возбудителей семейства хламидий, их морфология и антигенная структура, инфекции, вызываемые этими возбудителями. Особое внимание следует уделить основному представителю этой группы - возбудителю орнитоза - и механизму заражения при этой инфекции. При изложении материала об орнитозе необходимо осветить следующие вопросы:

а) культивирование возбудителя;

б) устойчивость возбудителя орнитоза к действию различных физических факторов, устойчивость во внешней среде и в аэрозоле;

в) чувствительность возбудителя орнитоза к действию различных химических агентов и дезинфицирующим средствам, чувствительность к антибиотикам;

г) особенности режима работы с возбудителями орнитоза в лаборатории и методы дезинфекции;

д) специфическая профилактика.

2. Лабораторная диагностика орнитоза - следует изложить основные методы диагностики, способы выделения возбудителя, методы приготовления антигена и аллергена, серологические реакции (РСК, НРСК, РГА и РТГА, РН), внутрикожная проба. При чтении лекций необходимо обратить внимание на следующие вопросы:

а) взятие материала для исследования у больного и у птиц, особенности его пересылки и подготовка к исследованию;

б) методы серологической идентификации (РСК, НРСК, РТГА, РН) и их специфичность;

в) методы ранней диагностики орнитоза.

3. Индикация возбудителя орнитоза. В этом разделе необходимо указать, что в целях индикации могут быть использованы метод иммунофлуоресценции, метод окраски зараженной культуры ткани акридином оранжевым. При чтении лекций обратить внимание на следующее: надежным методом индикации орнитоза является заражение культуры малого числа клеток с последующей окраской этой культуры акридином оранжевым через 10, 16 и 24 часа после заражения параллельно с выявлением возбудителя в этой культуре клеток методом иммунофлуоресценции.

Окончательный отрицательный ответ может быть дан после проведения дальнейших исследований с использованием других серологических методов.

При чтении лекций могут быть использованы наглядные пособия:

1) таблица распределения орнитоза среди диких птиц;

2) схемы постановки РСК, НРСК, РТГА;

3) фотографии возбудителя орнитоза, развивающегося в культуре клеток, или препараты, окрашенные акридином оранжевым.

Практические занятия могут быть проведены по следующим вариантам программы <1>.

--------------------------------

<1> В связи с особенностями работы с возбудителем орнитоза работу с ним всем курсантам проводить не рекомендуется.

1) Слушатели осваивают практически все методы идентификации орнитоза при наличии достаточного количества времени (1 месяц).

2) Часть методов осваивается практически, часть дается в виде демонстрации. Необходимо практическое освоение серологических методов: РСК, НРСК, РГА и РТГА. Метод окраски зараженной культуры клеток акридином оранжевым и метод иммунофлуоресценции.

3) При минимальном количестве времени (две недели) - курсанты осваивают методику окраски зараженной культуры клеток акридином оранжевым и РТГА.

При первом варианте программы слушатели получают задание исследовать сыворотки на наличие специфических антител в РСК, НРСК и РТГА, а также изучают методику окраски зараженной культуры клеток акридином оранжевым, технику приготовления мазков-отпечатков и окраску их по Романовскому - Гимзе, методику иммунофлуоресценции.

При втором варианте слушатели осваивают методику постановки РТГА, метод иммунофлуоресценции, метод окраски культуры клеток акридином оранжевым; при третьем варианте - методику окраски акридином оранжевым и метод иммунофлуоресценции.

10. Арбовирусные инфекции

При чтении лекций необходимо осветить следующие вопросы.

1. Общие сведения об арбовирусах:

а) классификация, антигенная структура, особенности эпидемиологии и экологии;

б) устойчивость арбовирусов к действию различных физических факторов, устойчивость в жидкой среде и в аэрозоле;

в) отношение арбовирусов к действию химических агентов, в частности эфира и дезоксихолата натрия, а также различных дезинфекционных средств;

г) гемагглютинирующая активность арбовирусов, условия ее выявления;

д) особенности режима работы с арбовирусами;

е) специфическая профилактика.

2. Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций - указать основные методы диагностики, способы выделения арбовирусов, методы получения арбовирусных антигенов, серологические реакции, используемые для идентификации арбовирусов. При чтении лекций необходимо особо остановиться на следующих вопросах:

а) правила взятия материала для исследования - объектов внешней среды, переносчиков, материала от больных, - особенности транспортировки, подготовка к исследованию;

б) основные этапы идентификации вновь выделенных агентов, позволяющие получить предварительный и окончательный ответ;

в) методы серологической идентификации (РТГА, РСК, РНГА, РН) и их специфичность;

г) методы ранней диагностики арбовирусных инфекций - РДПА с антигеном, приготовленным из сыворотки крови больных, - и выделение вируса методом бляшек с одновременным зональным гашением их.

3. Индикация арбовирусов. При изложении данных по этому разделу следует указать, что в целях индикации могут быть использованы как метод иммунофлуоресценции, так и РНГА, однако в обоих случаях необходимо предварительное обогащение вируса в культурах клеток. При этом необходимо указать следующее:

а) наличие поливалентных люминесцирующих иммунных сывороток или иммунных асцитических жидкостей (ИАЖ) мышей позволяет получить данные о групповой принадлежности выделенного вируса, дальнейшая идентификация может быть осуществлена с помощью моновалентных препаратов;

б) имеющиеся в настоящее время препараты сенсибилизированных эритроцитов могут дать только группоспецифические реакции;

в) окончательный отрицательный ответ может быть выдан лишь после проведения дальнейших исследований с использованием прочих серологических методов, в частности реакции нейтрализации.

При чтении лекций могут быть использованы следующие наглядные пособия:

1) схема классификации арбовирусов;

2) схема выделения и идентификации арбовирусов;

3) таблица, в которой указаны оптимальные значения pH для постановки РГА с арбовирусами;

4) схема постановки РГА и РТГА;

5) схема индикации арбовирусов.

Практические занятия могут быть проведены по следующим вариантам программы, в зависимости от количества отведенного для этой цели времени.

1). Курсанты осваивают практически все этапы и методы выделения и идентификации арбовирусов (24 часа).

2). Часть методов осваивается слушателями практически, часть дается в виде демонстрации. В этом случае необходимо практическое освоение методики выделения вируса в клеточных культурах и серологических методов - РТГА, РСК, РДПА, РНГА, а также метода иммунофлуоресценции (12 часов).

3). При минимальном количестве времени (8 - 10 часов) курсанты осваивают методику заражения клеточных культур и обнаружения вирусного антигена с помощью люминесцирующих сывороток или ИАЖ и РНГА.

При первом варианте программы слушатели получают два задания: 1) идентификация вируса в патологическом материале и 2) исследование сыворотки больного на наличие специфических антител к арбовирусам. При выполнении первого задания курсанты проводят выделение вируса в клеточных культурах и на сосунках белых мышей и идентификацию его с применением методов досерологической идентификации (определение размеров вирусных частиц, типа нуклеиновой кислоты и чувствительности к эфиру и дезоксихолату натрия) и серологической диагностики: иммунофлуоресценции, РНГА и РДПА - для экспресс-диагностики и РГА, РТГА, РСК и РН - для получения окончательного ответа. В целях обнаружения специфических антител в сыворотках используют РТГА, РСК и РН.

Во втором варианте курсанты также получают для исследования патологический материал и сыворотку больного, проводят заражение клеточных культур и осваивают методы экспресс-диагностики - иммунофлуоресценцию, РНГА и РДПА. Сыворотку исследуют в РТГА и РСК. Остальные методы (получение антигенов, РГА, РН) даются в виде демонстрации.

При третьем варианте слушатели получают только патологический материал, проводят заражение клеточных культур и идентификацию вируса с помощью метода иммунофлуоресценции и РНГА с препаратами сенсибилизованных антителами эритроцитов.

11. Ботулизм

1. При чтении лекций по микробиологии ботулизма необходимо обратить особое внимание на следующие вопросы:

а) роль бактериальной клетки и вырабатываемого ею токсина в этиологии ботулизма;

б) морфология Bac. botulinus, возможность существования в вегетативной и споровой форме, тинкториальные свойства старых и молодых культур данных микроорганизмов;

в) анаэробный тип дыхания Bac. botulinus и характер роста в жидкой и на плотной питательных средах;

г) способность Bac. botulinus вырабатывать эндотоксин, существование 6 серотипов токсина и соответственно 6 типов Bac. botulinus;

д) минимальные смертельные дозы ботулинического токсина для человека и животных, устойчивость токсина к воздействию физических и химических факторов.

2. При чтении лекций по лабораторной диагностике - на необходимость проведения исследования в двух направлениях:

а) в целях выделения и идентификации Bac. botulinus;

б) в целях обнаружения и идентификации ботулинического токсина.

Обратить внимание на выбор объектов и соответствующую подготовку их к исследованию. Подчеркнуть необходимость при исследовании больших количеств воды применения фильтрации через тальк.

Изложить бактериологический метод исследования, подробно остановиться на особенностях культивирования возбудителя ботулизма, указав на необходимость проверки качества питательных сред. Подчеркнуть недостатки этого метода (большой срок исследования и низкий процент положительных результатов).

Подробно рассказать об основном методе обнаружения и идентификации ботулинического токсина - реакции нейтрализации с помощью противоботулинических (поливалентной и моноспецифических) сывороток на мышах и морских свинках. Обратить внимание на оценку результатов этого метода и возможность установить с его помощью примерное количество токсина в исследуемом материале.

Подробно изложить ускоренные методы определения ботулинического токсина и его идентификации: РНГА, метод Минервина, некоторые модификации в постановке реакции нейтрализации токсина на мышах при исследовании воды (повторное - до гибели - внутрибрюшинное введение белым мышам воды с добавлением к ней NaCl до концентрации 0,85% и предварительное фильтрование больших количеств воды через тальк). Обратить особое внимание на специфичность и чувствительность этих методов. Подчеркнуть, что концентрирование токсина через тальк дает возможность не только ускорить получение ответа, но и определить присутствие в исследуемом материале ничтожных количеств токсина (0,01 DLM для белых мышей).

3. При чтении лекций по индикации ботулинического токсина указать, что с этой целью используют реакцию непрямой гемагглютинации и реакцию нейтрализации ботулинического токсина противоботулиническими сыворотками на мышах.

Рекомендуется использовать следующие наглядные пособия:

1) схему бактериологического исследования на наличие Bac. botulinus;

2) схему опыта по нейтрализации ботулинического токсина.

Для проведения практических занятий по индикации и лабораторной диагностике ботулизма могут быть рекомендованы следующие варианты.

1) При наличии достаточного количества времени (не менее 12 часов) и достаточной оснащенности учебной базы может быть предоставлена возможность: а) продемонстрировать свойства чистых культур возбудителя ботулизма, б) провести полное бактериологическое исследование, выделение и идентификацию возбудителя ботулизма и в) определить наличие в исследуемом материале ботулинического токсина классическим и ускоренным методами.

2) При меньшем количестве (8 - 10) учебных часов и достаточной оснащенности учебной базы может быть проведено исследование материала на наличие в нем ботулинического токсина с помощью классического и ускоренных методов, а морфологию возбудителя и характер роста на питательных средах можно только продемонстрировать.

3) При наличии не более 4 часов или недостаточной оснащенности учебной базы может быть продемонстрирован метод нейтрализации ботулинического токсина противоботулиническими сыворотками (как универсальный метод индикации и лабораторной диагностики).

12. Кокцидиоидный микоз

В лекции о кокцидиоидном микозе необходимо изложить морфологические особенности кокцидиоидного гриба, двухфазовую природу его развития, описать строение вегетативных клеток и спор, морфологические особенности их в природных (почва) и лабораторных (культуры) условиях, своеобразие обмена веществ, неприхотливость в питании.

Следует остановиться на жизнеспособности их во внешней среде, на устойчивости к физико-химическим и биологическим воздействиям. Указать проявления изменчивости морфолого-биологических свойств кокцидиоидного гриба в природных и экспериментальных условиях, разобрать данные об антигенной специфичности и иммуногенности.

Необходимо тщательно разобрать дифференциальные признаки кокцидиоидного гриба, отличие его от сходных с ним грибов, выделяемых из общих мест обитания.

Дать развернутую характеристику патогенности гриба для диких, домашних и лабораторных животных, а также для человека. Указать клеточные формы, с которыми связана патогенность (артроспоры), подчеркнуть патогенетическое и эпидемиологическое значение их. Далее надо остановиться на судьбе артроспор в организме, на особенностях второго - паразитарного - цикла развития кокцидиоидного гриба и описать его тканевые формы (сферулы и эндоспоры), их полиморфизм, отличие от сходных образований и артефактов. После этого обосновать рациональную схему лабораторной диагностики и индикации, указать сроки предварительного и окончательного ответа при исследовании материала на наличие возбудителя кокцидиоидного микоза.

Затем перейти к краткой характеристике развития болезни и описанию клинических проявлений, течения и исхода кокцидиоидного микоза: острых и хронических стадий, типичных и стертых форм кокцидиоидомикоза, показать черты сходства и различия с другими инфекционными и неинфекционными заболеваниями.

При характеристике специфической перестройки организма больных надо изложить характер и последовательность развития антител, их специфичность и стойкость, диагностическое и прогностическое значение. Должное внимание следует уделить специфической аллергии, динамике развития, эпидемиологическому значению аллергических проб для выявления иммунной прослойки среди обследуемых контингентов.

После этого кратко остановиться на лечении кокцидиоидомикоза, отметив современное состояние специфической терапии и профилактики болезни, а потом разобрать этапы лабораторной диагностики микоза: выявление тканевых форм и получение культур, серологические реакции и биологические методы выявления кокцидиоидного гриба.

Учитывая исключительное значение в развитии кокцидиоидомикоза природных и культуральных форм возбудителя, надо четко, с конкретными примерами изложить основные эпидемиологические факторы, показать эндемичность распространения (преимущественно в США), резервуар в природе (почва, дикие грызуны), пути и способы заражения, значение сезона и химического состава почвы, гнездовой характер локализации гриба, сохранение и размножение гриба в почве и на предметах внешней среды, полное отсутствие фактов о заражении восприимчивых людей от больных кокцидиоидомикозом.

Надо разобрать режим и условия работы с культуральными формами особо опасных грибов, особенно в период их споруляции на искусственных средах.

Необходимо подчеркнуть:

1) поголовную восприимчивость населения и массовый характер поражения при аэрозольном заражении;

2) высокую патогенность природных и культуральных форм кокцидиоидного гриба, его отдельных клеточных элементов (артроспор) и легкость передвижения их воздушными течениями;

3) высокую устойчивость артроспор к прогреванию и высушиванию, к воздействию солнечной радиации и длительное сохранение жизнеспособности их в подсохшей земле и в пыли;

4) нетребовательность в питании, быстроту размножения и дешевизну накопления грибковой массы с артроспорами;

5) отсутствие средств и методов специфической профилактики и эффективной терапии больных кокцидиоидомикозом;

6) потерю трудоспособности больными острыми формами кокцидиоидомикоза (месяцами) и пожизненную инвалидность страдающих хроническими формами, высокую летальность при кокцидиоидной гранулеме.

В характеристике возбудителя на лекции по кокцидиоидомикозу особое внимание надо уделить: патогенности артроспор, устойчивости их к внешним воздействиям, легкости передвижения воздухом, аэрозолями, а также очень высокой жизнеспособности в условиях высушивания и голодания, к воздействию солнечной радиации и прогреванию в почве жарких пустынных местностей. Полезно подчеркнуть наличие в почве других патогенных для животных, но безвредных для человека грибов, морфологически сходных с возбудителями кокцидиоидомикоза (грибы рода Эммонси), осложняющих идентификацию кокцидиоидного гриба. В оценке лабораторной диагностики надо подчеркнуть:

1) исключительное значение прорастания тканевых (сферулы) форм в нативных препаратах исследуемого материала под покровным стеклом, что является необходимым для обоснования их истинной природы, для отличия от сходных, но не грибковых форм, а также от сферул некоторых грибов, патогенных только для некоторых видов грызунов;

2) большое значение специфической иммунолюминесценции и РНГА, а также реакции преципитации как наиболее ценных методов экспрессной индикации и идентификации;

3) воспроизведение экспериментального микоза с получением соответствующих ретрокультур от животных.

В разделе индикации кокцидиоидного гриба дать сравнительную оценку различных методов индикации, показать недостатки микологического (выделение культуры), биологического (заражение животных), обосновать преимущество и доступность люминесцентно-серологического метода и РНГА для экспрессной индикации кокцидиоидного гриба.

Нужна также сравнительная оценка различных методов забора проб воздуха, воды и почвы, смывов с различных предметов для индикации кокцидиоидного гриба во внешней среде.

Для проведения практических занятий может быть рекомендовано несколько вариантов соответственно предоставленному времени для подготовки специалистов.

Первый вариант, рассчитанный на 24 - 30 часов, включает в свою программу:

1) освоение условий и методов работы с особо опасным материалом (культуры кокцидиоидного гриба, посевы и пересевы, наблюдение за ростом и спороношением, изготовление взвесей культур и заражение животных); сравнительное изучение культур кокцидиоидного гриба, сходных с ним и родственных микроорганизмов, выявление характерных морфологических элементов и тканевых форм в организме восприимчивых животных; работа проводится сначала на убитых культурах, а затем на малопатогенных вариантах кокцидиоидного гриба;

2) освоение методов микроскопического, культурального и серологического исследования, постановки аллергических проб у животных, зараженных кокцидиоидным грибом (интраназально, внутрибрюшинно и интратестикулярно), в динамике развития кокцидиоидного микоза;

3) освоение различных, включая и экспрессные (иммунолюминесценция и РНГА), методов индикации кокцидиоидного гриба в воздухе, почве, в смывах с предметов внешней среды и пищевых продуктов, а также в воде.

Второй вариант рассчитан на 12 - 16 часов и включает в свою программу:

1) освоение методики работы с патогенными культурами кокцидиоидного гриба на моделях из родственных с ним непатогенных культур; изучение морфологии культуральных и тканевых форм, включая и артефакты, кокцидиоидного гриба по готовым препаратам;

2) демонстрация различных методов заражения восприимчивых животных вирулентными культурами кокцидиоидного гриба; освоение интраназального введения животным непатогенных культур соответствующих грибов;

3) освоение люминесцентно-серологического метода и РНГА для индикации на модели убитых клеток кокцидиоидного гриба как в патологическом материале, так и в смывах с предметов внешней среды, из воздуха и почвы.

Третий вариант рассчитан на 6 - 8 часов и включает в свою программу:

1) освоение методов работы с культурами кокцидиоидного гриба на непатогенных штаммах;

2) освоение методики специфической иммунолюминесценции и РНГА для экспрессной индикации убитого кокцидиоидного гриба в образцах воздуха, почвы, в смывах с объектов внешней среды;

3) изучение морфологии культуральных и тканевых форм (включая артефакты) кокцидиоидного гриба по готовым препаратам;

4) демонстрация методов диагностики и идентификации возбудителя, включая прорастание эндоспор в сферулах в препаратах из мокроты или гноя.

Четвертый вариант рассчитан на 4 - 6 часов. Он состоит из демонстрации:

1) готовых препаратов из тканевых и культуральных форм кокцидиоидного гриба и прорастания эндоспор в сферулах;

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: