Временные методические указания по определению пиретроидов (перметрина, циперметрина, фенвалерата и декаметрина) в молоке и мясе животных методом газожидкостной хроматографии

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6093-91

(Дополнение N 2473-81 от 22 октября 1981 г.)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика пестицидов

1.1. Перметрин (анометрин Н, амбуш, стомозан, мухотоксин, персан, корсар, пермасект) - 3-феноксибензил-(1RS)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.

                               //\      //\
    Cl       H    H           //  \    //  \
      \C=C---+----+-- C-O-CH -¦   ¦¦-O-¦   ¦¦
      /  ¦    \  /   ¦¦     2 \\  /    \\  /
    Cl   H     \/     O        \\/      \\/
            CH /\CH
              3    3

    Эмпирическая формула C  H  Cl O .
                          21 20  2 3
    М.м. 391,28.
    В  чистом виде  в зависимости от соотношения изомеров - вязкая
жидкость,  воскообразная  масса  или кристаллы со слабым запахом и
температурой  плавления 34 - 39 °C. Температура кипения 200 °C при
0,01  мм  рт.  ст. (1,3 Па) и 220 °C при 6,05 мм рт. ст., давление
                            -7
паров  -  3,7  -  4,5  х  10    мм,  летучесть  - 0,007 мг/куб. м,
показатель  преломления - ПД   - 1,5627, плотность - 1,190 - 1,272
                            25
г/куб. см при 20 °C. Растворимость в воде - 1 - 10 мг/л, гексане и
этиленгликоле  -  до 30 г/л. Хорошо растворим в метаноле, этаноле,
циклогексане,   ацетоне,  хлороформе,  диэтиловом  эфире.  Быстрее
гидролизуется в щелочной и сильнокислой среде.
    ЛД    в зависимости от препаративной формы - 450 - 4000 мг/кг,
      50
ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе -
0,002  мг/куб.  м,  в  воде  водоемов - 0,05 мг/л. Нормативы МДУ в
продуктах питания находятся в стадии утверждения.
    1.2.  Циперметрин  (цинометрин,  фендона, цимбуш, альфаметрин,
эктомин,   ренигейд,   беррикейд,   фастак)  -  3-фенокси-(R,S)-2-
цианобензил-(1R,S)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилцикло-
пропанкарбоксилат.

    Cl\     H    H
       C=C--+----+--- C --O--CH-- // \ --O-- // \
    Cl/  ¦   \  /     ¦¦     ¦   ¦   ¦¦     ¦   ¦¦
         H    \/       O     CN   \\ /       \\ /
              /\
            CH  CH
              3   3

    Эмпирическая формула C  H  O NCl .
                          22 19 3   2
    М.м. 416,30.
    Чистое  вещество   в  зависимости  от  соотношения  изомеров -
вязкая  жидкость, воскообразная  масса  или кристаллы. Температура
плавления  1R  цис S + 1S цис R изомеров - 80,5 °C. Давление паров
           -6              -9
1,29  х  10    -  1,3  х 10   мм рт. ст. при 20 °C. Плотность 1,12
г/куб.  см  при  20  °C. Растворимость в воде - 0,5 - 1, гексане -
142,  ксилоле  -  315  мг/л.  Хорошо растворим в низкомолекулярных
кетонах,   спиртах,   хлорсодержащих  углеводах.  Гидролизуется  в
щелочной среде.
    ЛД    в  зависимости  от  препаративной формы 79 - 5000 мг/кг.
      50
ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе
- 0,0005 мг/куб. м, в воде водоемов - 0,03 мг/л.
    Нормативы   МДУ   в   продуктах  питания  находятся  в  стадии
утверждения.
    1.3.    Фенвалерат   (сумицидин,   бельмарк,   OM   S-200)   -
3-фенокси-(R,S)-цианобензил-(R,S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират.

         ---                      ---         ---
    Cl_//   \\___CH__C __O__CH__//   \\__O__//   \\
       \ ___ /   /   ¦¦     ¦¦  \ ___ /     \ ___ /
         ---    CH    O      CN   ---         ---
                /\
              CH  CH
                3   3

    Эмпирическая формула C  H  O NCl.
                          25 22 3
    М.м. 419,91.
    Кристаллы  с  температурой  плавления 23 °C.  Давление паров -
          -7
2,3  х  10    мм рт. ст. В воде не растворим. Растворим в гексане.
Хорошо   растворим   в   ацетоне,   ксилоле   и  низкомолекулярных
одноатомных спиртах. Гидролизуется в щелочной среде.
    ЛД    при оральном введении для крыс 451 мг/кг, ОБУВ в воздухе
      50
рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе  -  0,0003 мг/
куб. м, в воде водоемов - 0,03 мг/л.
    1.4.  Декаметрин  (дельтаметрин,  децис,  к-отрин,  бутокс)  -
3-фенокси-(S)-а-цианобензил-(1R,3R)-цис,-3-(2,2-дибромвинил)-2,2-
диметилциклопропанкарбоксилат.

             CH   CH
               3\/  3
    Br   H      /\      O
      \  ¦     /  \    ¦¦        / \\       // \
       C=C--T-------T--C -O-CH- ¦¦   ¦--O--¦   ¦¦
     /      H       H       ¦    \ //       \\ /
    Br                      CN

    Эмпирическая формула C  H  O Br .
                          22 19 3  2
    М.м. 505,21.

Белое кристаллическое вещество без запаха с температурой плавления 98 - 101 °C. Давление паров 1,5 х 10-8 мм рт. ст. при 25 °C. В воде не растворим, в этаноле - 16, ксилоле - 250, этилацетате - 350 и ацетоне - 500 г/л. Термически устойчив. Гидролизуется в щелочной среде.

    ЛД    - 67 мг/кг. ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,1 мг/куб. м,
      50
в атмосферном воздухе - 0,0001 мг/куб. м,  в воде водоемов - 0,005
мг/л.

2. Методика определения пиретроидов методом газожидкостной хроматографии в молоке и мясе

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении пиретроидов из молока и мяса ацетоном или его 85-процентным раствором с последующей переэкстракцией в смесь гексана с диэтиловым эфиром и концентрировании экстракта. Идентификация (по временам удерживания) и количественное определение (по сумме изомеров) осуществляются на газовом хроматографе с детектором по захвату электронов. Специальную очистку экстрактов в системе гексан - ацетонитрил проводят при значительном содержании жира в пробах, а адсорбционно-хроматографическую на колонке с силикагелем при повышенном загрязнении проб фоновыми хлорорганическими соединениями и продуктами их трансформации.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество: перметрина - 0,5; циперметрина - 0,2; фенвалерата - 0,5; декаметрина - 0,5 нг.

Нижний предел определения в молоке и мясе: перметрина - 0,01; циперметрина - 0,005; фенвалерата - 0,01; декаметрина - 0,01 мг/кг/л.

Доверительные интервалы среднего значения при p = 0,95 и n = 6:

а) в молоке для перметрина - 58 +/- 9,8, циперметрина - 8,1 +/- 9,8; фенвалерата - 78 +/- 10,5 и декаметрина - 74 +/- 10,4%;

б) в мясе для перметрина - 53 +/- 10,8; циперметрина - 76 +/- 10,8; фенвалерата - 78 +/- 11,0 и декаметрина - 72 +/- 11,7%.

2.1.3. Избирательность метода

Фосфор- и хлорорганические пестициды не мешают определению.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон ч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.

Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-87.

Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6265-79.

Натрий сернокислый безводный, ГОСТ 4166-76.

Бутиловый эфир уксусной кислоты ч, ГОСТ 22300-76.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Насадка 30% OV-17 на инертоне-супер (0,125 - 0,160 мм) (ЧССР).

Силикагель, 0,1 - 0,4 мм (ЧССР).

Этиловый спирт - ректификат, ГОСТ 5962-67.

Раствор ацетона 85% водный.

Смесь гексана с диэтиловым эфиром в объемном соотношении 1:1.

Стандартный раствор пиретроидов в гексане с содержанием 1 нг в 1 мкл (срок хранения 1 год при герметичной упаковке).

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83.

Фарфоровые выпарительные чашки, ГОСТ 9147-80, на 25 и 100 мл.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на 100 и 250 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82, ТУ 25-11-917-76.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов - тип "Цвет", "Газохром" и др.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300 мл.

Микрошприц МШ-10М, ТУ 2.833.106.

Воронка фильтрующая ЕФ-1-20-ПОР-100, ГОСТ 25336-82.

Пипетки на 1 мл, ГОСТ 20292-74.

Мясорубка хозяйственная.

Холодильник бытовой.

Центрифуга типа ЦЛР-1.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Подготовка газохроматографической колонки

Стеклянную колонку длиной 500 мм с внутренним диаметром 3 мм заполняют одним из принятых способов готовой набивкой инертон-супер с 3% OV-17. Колонку кондиционируют при 260 °C, продувая газ-носитель со скоростью 60 мл/мин. в течение 8 часов.

2.4.2. Отбор и подготовка проб

Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды" (N 2051-79, утверждены Минздравом СССР 21.08.79).

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Молоко. В колбу с притертой пробкой объемом не менее 300 мл заливают 50 мл молока анализируемой пробы и 150 мл ацетона. Содержимое интенсивно перемешивают, встряхивая колбу не менее 5 минут, и помещают в холодильник при температуре 0 - +3 °C на 6 - 24 часа. Затем нерастворенные компоненты молока отделяют от ацетонового раствора центрифугированием или фильтрованием. Осадок размельчают с помощью размельчителя тканей или шпателем в 25 мл 85-процентного ацетона и переносят в колбу, использованную для первоначальной экстракции. В эту же колбу приливают еще 75 мл 85-процентного ацетона, которым предварительно обмывают оборудование, примененное для размельчения осадка. Колбу с содержимым встряхивают в течение 10 минут и помещают в холодильник на 2 часа. Ацетоновый раствор отделяют от нерастворенных компонентов фильтрованием или центрифугированием. Ацетоновые экстракты объединяют, добавляют 10 мл бутилового эфира уксусной кислоты и испаряют ацетон из экстракта на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Отгонку после испарения ацетона сразу же прекращают, не допуская испарения воды и бутилового эфира уксусной кислоты. Остаток экстракта переносят в делительную воронку, приливают 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1) и экстрагируют пиретроиды, встряхивая воронку в течение 5 минут. Слоям дают разделиться. При медленном разделении слоев добавляют при легком встряхивании 5 - 10 мл этилового спирта. Нижний слой сливают в другую делительную воронку и повторяют экстракцию 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1). Гексанэфирную фракцию объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют досуха под тягой в вытяжном шкафу. Экстракт периодически подливают так, чтобы его количество за все время испарения не превышало одной трети общего объема чашки. Допускается подогрев экстракта до 30 °C, чем удается предотвратить конденсацию воды на стенках чашек и ускорить испарение растворителей.

Мясо. Пробы предварительно пропускают через мясорубку или размельчают ножницами. Отбирают навеску 25 г и гомогенизируют в 25 мл 85-процентного водного раствора ацетона. К гомогенату приливают еще 50 мл раствора ацетона, встряхивают или перемешивают в течение 10 минут и помещают в холодильник при температуре 0 - +3 °C на 6 - 24 часа. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении пиретроидов в молоке. Сухой остаток экстрактов из молока или мяса растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной кислоты. В испаритель вводят 2 - 6 мкл этого раствора.

Если полученные экстракты оказались недостаточно чистыми, что получается при значительном содержании жира или фоновых хлорорганических пестицидов в пробе, и количественное определение пиретроидов затруднено, проводят очистку с ацетонитрилом и (или) на колонке с силикагелем. Для этого конечные экстракты переносят в выпарительные чашки и испаряют досуха.

2.5.2. Очистка экстракта

Очистка с ацетонитрилом. К сухому остатку для его набухания приливают 1 мл ацетона и через 2 - 3 минуты 5 мл гексана. Покачивая чашку, тщательно обмывают ее поверхность и сливают раствор в делительную воронку. Чашку еще раз обмывают 5 мл гексана и сливают раствор в ту же воронку. Приливают 10 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают 2 минуты. Слоям дают разделиться. Нижний (ацетонитрильный) слой сливают в другую воронку. А из гексанового раствора экстракцию повторяют еще дважды, каждый раз применяя по 5 мл ацетонитрила. К объединенному ацетонитрильному раствору приливают 40 мл дистиллированной воды и 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1). Встряхивают воронку в течение 2 минут. Слоям дают разделиться. Нижний слой сливают в другую воронку, приливают 30 мл той смеси и экстракцию повторяют. Гексанэфирный экстракт объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют растворителем досуха.

Очистка на колонке с силикагелем. Очистку экстракта проводят на специальном устройстве (см. рис. - не приводится). Для его подготовки пробирку отсоединяют. В воронку засыпают 4,0 - 4,5 куб. см силикагеля, приливают 5 мл гексана, тщательно перемешивают содержимое стеклянной глазной палочкой и, включая вакуум, отсасывают гексан из воронки в колбу. Силикагель дополнительно промывают 10 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1) порциями по 5 мл и в заключение - 5 мл гексана. После этого колонка готова к работе.

Сухой остаток экстракта смывают с выпарительной чашки 15 мл гексана порциями по 5 мл. Каждую порцию смыва (5 мл) сливают в воронку устройства и перемешивают с силикагелем в течение 3 минут. Не прекращая перемешивания, включают вакуум и медленно по каплям отсасывают гексан в колбу. Так поступают с каждой порцией смыва. Силикагель промывают 20 мл гексана порциями по 5 мл. Но в этом случае гексан полностью из колонки не удаляют. Как только мениск гексана достигает верхнего уровня силикагеля, вакуум отключают, добавляют следующую порцию растворителя, слегка помешивая стеклянной палочкой, выравнивают слой силикагеля, а затем включают вакуум. Так поступают и с последней порцией растворителя. Затем с помощью резиновой муфты закрепляют пробирку, вводя в нее стебель воронки. Пиретроиды элюируют 12 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1), постоянно подливая смесь, и полностью отсасывают элюат в пробирку. Элюат переносят в выпарительную чашку и испаряют почти досуха. Остаток растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной кислоты. В испаритель хроматографа вводят 2 - 6 мкл этого раствора.

2.5.3. Условия хроматографирования

    а)  хроматограф "Цвет-106" с детектором по захвату электронов.
Стеклянная  колонка  размером  500 x 2 мм с насадкой инертон-супер
(0,125  -  0,160  мм)  с 3% OV-17. Температурные режимы: термостат
колонки  -  250,  испарителя  - 280 и детектора - 270 °C. Скорость
газа-носителя  (азота)  -  28 мл/мин., на продувку детектора - 120
                                    -10
мг/мин.  Шкала электрометра - 1 x 10    А. Скорость протяжки ленты
-  200  мм/час.  Линейный  диапазон  детектирования - 0,2 - 10 нг.
Абсолютное время удерживания: перметрина - 2,52 мин., циперметрина
- 3,20 мин., фенвалерата - 4,66 мин., декаметрина - 6,33 мин.
    б)  хроматограф  "Цвет-550"  с  детектором постоянной скорости
рекомбинации.  Стеклянная  колонка  размером 500 x 3 мм с насадкой
инертон-супер (0,125 - 0,160 мм) с 3% OV-17. Температурные режимы:
термостат  колонки  -  260,  испарителя - 270, детектора - 280 °C.
Скорость газа-носителя (азота) - 60 мл/мин.  Шкала  электрометра -
      -9
8 x 10  . Скорость протяжки ленты самописца - 200 мм/час. Диапазон
определяемых   концентраций   0,2   -   10  нг.  Абсолютное  время
удерживания: перметрина - 2,14, циперметрина - 3,05, фенвалерата -
4,42 и декаметрина - 6,88 мин.

В качестве альтернативной может быть использована стеклянная колонка размером 500 x 3 мм с насадкой хроматон N-AW-HDMC (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом сравнения со стандартом по площади пика анализируемого соединения в пробе и известном количестве стандарта. Площадь пика находят одним из общепринятых методов. Содержание пиретроидов в анализируемом материале (C) в мг/кг (л) находят по формуле:

                         S  x C   x V x 100
                          р    ст
                     C = ------------------,
                          S   x V  x P x K
                           ст    а

    где:
    S  - площадь пика анализируемой пробы, кв. мм;
     р
    S   - площадь пика стандарта, кв. мм;
     ст
    C   - содержание пиретроидов в стандарте, нг;
     ст
    V   -  объем  раствора,  из  которого  отбирают  аликвоту  для
инъекции, мл;
    V  - объем аликвоты, которую вводят в хроматограф, мкл;
     а
    P - навеска или объем анализируемого образца, г или мл;
    K - процент определения.

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе с легковоспламеняющимися растворителями, взрывоопасными и высокотоксичными веществами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: