Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) в растениях, почве, воде водоемов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

Утверждены
Минздравом СССР
22 октября 1981 г. N 2473-81

--------------------------------

<*> Разработаны: Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС); Т.М. Петровой, Е.Г. Красниковой (ВИЗР); А.Ф. Скурьят, Е.М. Бунякиной (БелНИИЗР).

Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 70.

Таблица 70

ХАРАКТЕРИСТИКА ПИРЕТРОИДОВ

--------------+------------+---------------------+--------+----------+-----T-------
¦Общепринятое ¦  Брутто-   ¦ Химическое название ¦Моле-   ¦ Давление ¦ДСД, ¦МДУ в ¦
¦  название   ¦  формула   ¦                     ¦кулярная¦паров, Па ¦мг/кг¦карто-¦
¦  (торговое  ¦            ¦                     ¦масса   ¦          ¦     ¦феле, ¦
¦  название)  ¦            ¦                     ¦        ¦          ¦     ¦мг/кг ¦
+-------------+------------+---------------------+--------+----------+-----+------+
¦             ¦            ¦                     ¦        ¦        -5¦     ¦      ¦
¦Перметрин    ¦C  H  O Cl  ¦+/-Цис,транс-3-(2,2- ¦391,28  ¦4,5 x 10  ¦0,035¦0,05  ¦
¦(амбуш)      ¦ 21 20 3  2 ¦дихлорвинил)-2,2-    ¦        ¦(25 °C)   ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦диметилциклопропан-  ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦карбоновой кислоты   ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦3-феноксибензиловый  ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦эфир                 ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦                     ¦        ¦        -6¦     ¦      ¦
¦Циперметрин  ¦C  H  O Cl  ¦(1RS)-Цис,транс-3-   ¦416     ¦5,1 x 10  ¦0,003¦0,01  ¦
¦(рипкорд,    ¦ 22 19 3  2 ¦(дихлорвинил)-2,2-   ¦        ¦(70 °C)   ¦     ¦      ¦
¦цимбуш)      ¦            ¦диметилциклопропан-  ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦карбоновой-1 кислоты ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦(RS)-3-фенокси-      ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦альфа-цианобензиловый¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦эфир                 ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦                     ¦        ¦        -5¦     ¦      ¦
¦Фенвалерат   ¦C  H  O NCl ¦(RS)-2-Метил-(4-     ¦405     ¦3,1 x 10  ¦0,034¦0,01  ¦
¦(сумицидин)  ¦ 25 22 3    ¦хлорфенил)бутановой  ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦кислоты (RS)-альфа-  ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦циано-3-фенокси-     ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦бензиловый эфир      ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦                     ¦        ¦        -8¦     ¦      ¦
¦Декаметрин   ¦C  H  Br NO ¦(1R)-Цис-3-(2,2-     ¦505,2   ¦1,5 x 10  ¦0,003¦0,01  ¦
¦(децис,      ¦ 22 19  2  3¦дибромовинил)-2,2-   ¦        ¦(25 °С)   ¦     ¦      ¦
¦дельтаметрин)¦            ¦диметилциклопропан-  ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦карбоновой кислоты   ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦(S)-3-фенокси-альфа- ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
¦             ¦            ¦цианобензиловый эфир ¦        ¦          ¦     ¦      ¦
--------------+------------+---------------------+--------+----------+-----+-------

Препараты нерастворимы в воде. Хорошо растворяются в ацетоне, спиртах, хлороформе. ПДК в воде водоемов составляет: рипкорда - 0,07 мг/л, сумицидина - 0,05 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на определении синтетических пиретроидов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения препаратов из анализируемой пробы органическими растворителями (хлороформ, смесь гексана и ацетона, 50-процентный водный раствор ацетона) с последующей очисткой экстрактов перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и (или) на колонках с адсорбентами.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,01 - 0,04 мг/кг (мг/л). Остальные параметры приведены в таблице 71.

Таблица 71

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ

----------+---------+-----------------------+-------------+----------------
¦Препарат ¦Анализи- ¦   Среднее значение    ¦Относительное¦ Доверительный ¦
¦         ¦руемый   ¦    определения, %     ¦ стандартное ¦   интервал    ¦
¦         ¦объект   ¦                       ¦ отклонение  ¦   среднего    ¦
¦         ¦         ¦                       ¦             ¦  при n = 5,   ¦
¦         ¦         ¦                       ¦             ¦  p = 0,95, %  ¦
¦         ¦         +----------+------------+------+------+-------+-------+
¦         ¦         ¦   ТСХ    ¦    ГЖХ     ¦ ТСХ  ¦ ГЖХ  ¦  ТСХ  ¦  ГЖХ  ¦
+---------+---------+----------+------------+------+------+-------+-------+
¦Амбуш    ¦Вода     ¦75 +/- 1,7¦78 +/- 4,4  ¦2,3   ¦5,7   ¦+/- 5,2¦+/- 6,5¦
¦         ¦Почва    ¦66 +/- 2,2¦67 +/- 3,6  ¦3,6   ¦5,2   ¦+/- 9,3¦+/- 6,0¦
¦         ¦Картофель¦70 +/- 2,3¦70 +/- 3,9  ¦3,2   ¦5,7   ¦+/- 8,1¦+/- 6,5¦
¦Рипкорд  ¦Вода     ¦80 +/- 2,0¦82 +/- 3,5  ¦2,5   ¦4,3   ¦+/- 6,9¦+/- 5,0¦
¦         ¦Почва    ¦71 +/- 2,2¦72 +/- 3,8  ¦3,1   ¦5,3   ¦+/- 7,0¦+/- 6,1¦
¦         ¦Картофель¦75 +/- 2,4¦77 +/- 3,3  ¦3,2   ¦4,3   ¦+/- 8,2¦+/- 5,0¦
¦Сумицидин¦Вода     ¦72 +/- 2,4¦80 +/- 1,7  ¦3,1   ¦1,7   ¦+/- 8,0¦+/- 2,0¦
¦         ¦Почва    ¦68 +/- 2,1¦70 +/- 2,1  ¦3,2   ¦3,0   ¦+/- 8,7¦+/- 3,5¦
¦         ¦Картофель¦70 +/- 2,6¦75 +/- 1,7  ¦3,7   ¦2,2   ¦+/- 9,5¦+/- 3,0¦
¦Децис    ¦Вода     ¦80 +/- 1,8¦85,6 +/- 2,7¦2,2   ¦3,2   ¦+/- 5,0¦+/- 8,2¦
¦         ¦Почва    ¦72 +/- 2,5¦79,0 +/- 2,9¦3,4   ¦3,7   ¦+/- 8,1¦+/- 9,5¦
¦         ¦Картофель¦75 +/- 2,7¦82,3 +/- 2,3¦3,6   ¦2,8   ¦+/- 9,0¦+/- 7,2¦
----------+---------+----------+------------+------+------+-------+--------

Избирательность метода. Хлорсодержащие пестициды определению не мешают.

Реактивы и растворы. Для экстракции и очистки экстрактов. Ацетон ч. Диэтиловый эфир х.ч. н-Гексан ч., х.ч. Сульфат натрия безводный свежепрокаленный. Хлороформ ч. Ацетонитрил ч. Бензол ч.д.а. Хлорид кальция х.ч., 0,05-процентный раствор. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности. Хлорид натрия ч.

    Для метода ТСХ.  Пластинки  "Силуфол" УФ   .  Аммиак ч.,  25-процентный
                                            254
водный раствор.  Нитрат серебра. Фосфорно-молибденовая кислота ч.д.а. Спирт
этиловый 96-процентный.

Проявляющие реагенты: N 1 - 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл 25-процентного раствора аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; N 2 - 10-процентная фосфорно-молибденовая кислота в этиловом спирте.

Для метода ГЖХ. Неподвижные фазы: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HDMC (0,16 - 0,20 мм); 3% OV-1 на хроматоне N-AW-HDMS (0,125 - 0,160 мм); 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW (0,100 - 0,125 мм). Азот особой чистоты.

Стандартные растворы: N 1 - основной стандартный раствор пиретроидов в гексане (500 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 6 мес.; N 2 - стандартный раствор пиретроидов в гексане или бензоле (10 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 2 недель.

Приборы и посуда. Колбы: конические на 50 и 250 мл; круглодонные со шлифами для отгонки растворителей; мерные. Делительные воронки на 50; 100 и 250 мл. Воронки. Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см с диаметром 15 мм. Аппарат для встряхивания колб. Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель). Камера хроматографическая. Микропипетки на 0,1 - 0,2 мл. Хроматоскоп (хемоскоп). Пульверизатор стеклянный. Микрошприцы на 10 мкл. Газовый хроматограф "Цвет", "Газохром" с ДЭЗ (ДПР).

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. В колонку помещают ватный тампон, последовательно 3 - 4 г сульфата натрия, 5 г оксида алюминия, 2 г безводного сульфата натрия.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку, добавляют 10 г хлорида натрия, хорошо перемешивают и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3 - 0,5 мл при температуре бани не выше 50 °C, а затем досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ТСХ и ГЖХ).

Измельченную пробу растительного материала (овощи, фрукты, зеленая масса) массой 25 г помещают в коническую колбу, заливают 50 мл 50-процентного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр, объединяют и помещают на 1 ч в холодильник. При выпадении осадка пробу следует отфильтровать вторично. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 - 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, затем на воздухе досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ГЖХ и ТСХ). Если конечные экстракты получились недостаточно чистые, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии. В первом случае к сухому остатку в колбу добавляют 3 - 5 мл ацетонитрила, встряхивают 1 - 2 мин. Переносят ацетонитрил количественно (смывая колбу 1 - 2 мл свежего ацетонитрила) в делительную воронку и приливают 50 мл 2-процентного раствора хлорида натрия. Пиретроиды дважды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл, встряхивая по 1 - 2 мин. Пиретроиды переходят в гексан, коэкстрактивные вещества остаются в водном растворе. Объединенный гексановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Для очистки экстракта подготовленную колонку промывают 30 - 40 мл хлороформа или бензола, элюат отбрасывают. Вносят в колонку остаток пробы после упаривания (если растворитель был удален досуха, остаток растворяют в 1 - 2 мл гексана) порциями по 1 - 2 мл гексана, дают раствору впитаться и элюируют пиретроиды 50 мл бензола. Элюат концентрируют досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Пробу почвы (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл смеси ацетона и хлорида кальция (1:1), встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют, объединяют, переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 - 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют. Если конечные экстракты получились недостаточно чистыми, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии (так же, как при анализе растительного материала).

    Условия хроматографирования (метод ГЖХ).  В хроматограф последовательно
вводят  по  5  мкл   стандартного   раствора   N 2   и   пробы.  Носитель -
                                                                     -12
хроматон   N-AW-HDMC   (0,16 - 0,20 мм). Шкала  электрометра  20 x 10    А.
Линейный диапазон детектирования 3 - 15 нг. Нижний предел определения (нг):
амбуш - 10,  рипкорд - 3,  сумицидин - 5,  децис - 5.   Время   удерживания
пиретроидов приведено в таблице 72.

Таблица 72

ВРЕМЯ УДЕРЖИВАНИЯ ПИРЕТРОИДОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЯХ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

---------------------+--------------------------------------------
¦      Препарат      ¦             Неподвижная фаза              ¦
¦                    +---------------------+---------------------+
¦                    ¦    5% SE-30 <*>     ¦    3% OV-1 <**>     ¦
+--------------------+---------------------+---------------------+
¦Амбуш               ¦1 мин. 24 с          ¦1 мин. 57 с          ¦
¦Рипкорд             ¦2 мин. 30 с          ¦2 мин. 20 с          ¦
¦Сумицидин           ¦3 мин. 06 с          ¦-                    ¦
¦Децис               ¦3 мин. 36 с          ¦3 мин. 30 с          ¦
---------------------+---------------------+----------------------

--------------------------------

<*> Длина колонки 0,5 м. Температура (°C): испарителя - 240, колонки - 220, детектора - 250. Скорость потока азота 60 мл/мин.

<**> Длина колонки 1 м. Температура (°C): испарителя - 270, детектора - 280. Скорость потока азота 30 мл/мин.

Для идентификации амбуша (перметрина) может быть использована колонка длиной 1 м с 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW. Температура испарителя и детектора 270 °C, колонки - 240 °C. Скорость азота 60 мл/мин. Время удерживания амбуша 7 мин. 30 с.

Тонкослойная хроматография. Экстракт после определения методом ГЖХ упаривают до 0,2 - 0,3 мл и количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Помещают пластинку в камеру, содержащую смесь растворителей гексан-ацетон (4:1). После развития хроматограмм и высушивания на воздухе пластинку обрабатывают одним из проявляющих реагентов.

При обработке раствором нитрата серебра после облучения УФ-светом в течение 5 мин. пиретроиды проявляются в виде серо-черных пятен. Нижний предел определения рипкорда 3 мкг, амбуша, дециса, сумицидина - 5 мкг.

При обработке 10-процентным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этиловом спирте нижний предел определения составляет 3 - 10 мкг.

    Хроматограммы   на   пластинках   "Силуфол"   УФ      до   опрыскивания
                                                    254
проявляющими  реагентами  можно  просматривать  в  хроматоскопе. В УФ-свете
(лямбда  =  254 нм)  пиретроиды  обнаруживаются  в  виде  темных  пятен  на
флуоресцирующем фоне. Предел обнаружения - 3 мкг.  Величины R   пиретроидов
                                                             f
на   пластинках   "Силуфол"   при   использовании  в  качестве   подвижного
растворителя  смеси  гексана с ацетоном  (4:1)  равны:  для  амбуша - 0,61,
рипкорда - 0,44, сумицидина - 0,34, дециса - 0,45.

Обработка результатов анализа. При использовании метода ГЖХ количественное определение проводят путем сравнения пиков пробы и стандарта (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты.

Количество препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                                    C  V S
                                     ст 2
                                X = ------,
                                    S  V P
                                     ст 1

    где:
    C   - количество  препарата  во  введенном  в  хроматограф  стандартном
     ст
растворе, нг;
    S   - площадь  пика  стандартного  раствора  пиретроида,  введенного  в
     ст
хроматограф, кв. мм;
    S - площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;
    V  - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
     1
    V  - объем анализируемого экстракта после упаривания, мл;
     2
    P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.
    При использовании метода ТСХ содержание препарата в пробе (X, мг/кг или
мг/л) рассчитывают по формуле:

                                      A
                                  X = -,
                                      P

где:

A - количество препарата, найденное путем сравнения размера или интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

P - навеска анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: