Временные методические указания по определению экспромта в воде методом хроматографии в тонком слое

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6107-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика пестицида

Экспромт - смесь препаратов "хардин" (12,5% по мочевине) и "грамекс" (12,5% по мочевине) в соотношении 3:1 (весовые).

Действующее вещество хардина - комплекс диэтилэтаноламина и N-(2-хлор-бензол-сульфонил)-N'-(6-метокси-4-метил-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (хлорсульфурона).

Структурная формула:

    --                             -¬   CH CH OH
    ¦                          CH   ¦     2  2
    ¦        Cl                  3  ¦  /
    ¦  _____/           N_____/     ¦ /
    ¦ //   \\_SO NHCONH_//   \\__N  ¦N___C H
    ¦ \ ___ /   2       \ ___ /     ¦ \   2 5
    ¦   ---             N --- \     ¦  \
    ¦                          OCH  ¦   C H
    ¦                             3 ¦    2 5
    L-                             --

    Эмпирическая формула: C  H  ClN O S x C H  NO.
                           12 12   5 4     6 15

Молекулярная масса 474,5.

Синонимы: глин, ХСТТ, хлорсульфурон.

Хардин - препарат, представляющий собой раствор действующего вещества в смеси вода - триэтиленгликоль (1:1, вес. %) с добавкой 0,4% ОП-10. Содержание комплекса в растворе 16,5 +/- 0,5% (вес.).

Плотность препарата при 20 °C - 1115 - 1125 кг/куб. м. Т. кип. - 100 °C, хорошо растворим в воде, в полярных растворителях коагулируется, с неполярными не смешивается, нелетуч, в водных растворах устойчив в течение года, при разбавлении водой на свету при pH 5 - 7 и 20 °C разлагается.

ОБУВ в воздухе - 5 мг/куб. м.

    Хлорсульфурон  -  белое кристаллическое вещество. Эмпирическая
формула  C  H  ClN O S,  мол.  масса  357,78. Т. пл. 174 - 178 °C.
          12 12   5 4
Растворимость в толуоле  -  0,3%, метаноле - 1,8%, ацетоне - 7,0%.
Препарат   выпускается   в  виде  аминных  солей  (диметиламинная,
изопропиламинная,  моноэтаноламинная). Степень чистоты - 96 - 98%.
Действующее     вещество     препарата    грамекс    -    комплекс
диэтилэтаноламина  и  N-O(метил-карбокси-сульфонил)-N'-(4-метил-6-
метокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (грамекса).
    Структурная формула:

    --                             -¬   CH CH OH
    ¦        COOH              CH   ¦     2  2
    ¦            3               3  ¦  /
    ¦  _____/           N_____/     ¦ /
    ¦ //   \\_SO NHCONH_//   \\N    ¦N___C H
    ¦ \ ___ /   2       \ ___ /     ¦ \   2 5
    ¦   ---             N --- \     ¦  \
    ¦                          OCH  ¦   C H
    ¦                             3 ¦    2 5
    L-                             --

    Эмпирическая формула C  H  O N S x C H  NO.
                          14 18 6 5     6 15
    Молекулярная масса - 498,92.
    Химически    чистый   грамекс   -   кристаллическое   вещество
слабо-желтого цвета, без запаха. Т. пл. 162 - 164 °C.
    Эмпирическая формула C  H  O N S, молекулярная масса - 381,36.
                          14 18 6 5

Препарат хорошо растворим в ацетоне. Степень чистоты - 99,1%.

Препарат "экспромт" представляет собой светло-желтую прозрачную жидкость со слабым аминным запахом, плотность - 1,116 г/куб. см, растворим в воде.

ДОК, ПДК, МДУ экспромта в настоящее время не установлены.

2. Методика определения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении хардина и грамекса (действующие вещества пестицида "экспромт") из подкисленной пробы воды хлороформом, концентрировании экстракта и хроматографировании его аликвоты в тонком слое пластин "Силуфол". В качестве подвижной фазы могут быть использованы: бензол - ацетон в соотношении 4:1 (объемн.), гексан - ацетон в соотношении 1:1 (объемн.), диэтиловый эфир.

Для обнаружения зон локализации препаратов на хроматограммах используют смесь растворов бромфенолового синего и азотнокислого серебра с последующей обработкой хроматограмм лимонной (или уксусной) кислотой. Количественное определение препаратов проводят сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандарта.

2.1.2. Метрологическая характеристика

Диапазон определяемых концентраций 0,005 - 0,02 мг/л.

Предел обнаружения - 0,5 мкг.

    Размах варьирования: хардин - 80 - 100%,
                         грамекс - 80 - 100%.
    Среднее значение определения стандартных количеств:
                         хардин - 90,0%,
                         грамекс - 92,0%.
    Стандартное отклонение среднего:
                         хардин - +/- 0,61%,
                         грамекс - +/- 0,74%.
    Относительное стандартное отклонение среднего:
                         хардин - 0,05,
                         грамекс - 0,052.

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен. Другие соединения этого класса (круг, эллипс) в указанных условиях хроматографирования определению не мешают.

2.2. Реактивы и материалы

Хардин (хлорсульфурон), ВНИИХСЗР, 96 - 98%.

Грамекс, ВНИИХСЗР, 99,1%.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ 6-09-1910-77.

Кислота хлористоводородная, ч, ГОСТ 3118-77; водный раствор (1:1).

Кислота уксусная, хч, ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.

Кислота лимонная, хч, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.

Аммиак водный, чда, ГОСТ 3760-79.

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81.

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-3719-83.

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Пластинки "Силуфол" (Kavalier, ЧССР).

Вата гигроскопическая.

2.3. Приборы, посуда

Весы аналитические ВЛА-200М.

Испаритель ротационный ИР-1М, 25-11-917-74.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 50 - 100 мл.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические плоскодонные, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, диаметр 56 мм, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл, 1 л.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1; 5; 10 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2 мл.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Скальпель.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартных рабочих растворов хардина, грамекса

Стандартные растворы пестицидов концентрации 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата в ацетоне (или этиловом спирте) в мерной колбе на 100 мл. Растворы хранят в холодильнике. Годны к употреблению в течение 30 дней. Рабочие растворы пестицидов концентраций 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартных растворов. Хранят рабочие растворы хардина, грамекса в холодильнике. Годны к употреблению в течение 3 - 5 дней.

2.4.2. Проявляющий реактив - бромфеноловый реагент

Смесь растворов бромфенолового синего (БФС) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5% водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра; 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней. После обработки хроматограмм бромфеноловым реагентом осветляют фон обработкой пластин 2-процентным водным раствором лимонной кислоты или 5-процентным водным раствором уксусной кислоты.

2.4.3. Подготовка пластин "Силуфол"

Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3 (об./об.) (глубина погружения пластинки в растворитель составляет 0,5 см). После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят подготовленные пластинки в эксикаторе.

2.5. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЗУ, Москва, 1980, N 2061-79 от 21.08.1979).

Отобранные пробы хранить в стеклянной таре в защищенном от света месте не более 1 - 3 суток.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка

На одно определение берут на анализируемый образец две пробы воды по 500 мл.

500 мл воды помещают в делительную воронку вместимостью 1 л, подкисляют до pH 2 разбавленной кислотой (берут 1 мл раствора кислоты) и экстрагируют препарат дважды свежими 10 - 15 мл хлороформа, каждый раз встряхивая содержимое воронки в течение 2 - 3 мин. Экстракты двух проб объединяют (получают 40 - 60 мл) в делительной воронке вместимостью 250 мл, промывают 10 - 15 мл дистиллированной воды, подкисленной до pH 6 разбавленной хлористоводородной кислотой, и фильтруют через слой (7 - 10 г) безводного сульфата натрия в химической воронке в грушевидную колбу. Растворитель отгоняют до объема около 1 мл на ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °C. Остаток растворителя удаляют продуванием воздуха.

2.6.2. Хроматографирование

    Сухой остаток в колбе  растворяют  в  1  мл ацетона (этанола),
закрывают  колбу герметично пробкой, перемешивают содержимое и 0,2
мл  полученного  раствора  наносят микропипеткой на подготовленную
пластинку  "Силуфол".  Рядом  с  пробой  наносят по 0,2 мл каждого
рабочего раствора пестицидов, что соответствует содержанию в пятне
0,5;  1,0;  2,0;  4,0  мкг  каждого  препарата (растворы хардина и
грамекса  одинаковой концентрации наносят в одну точку). Пластинку
помещают  в  хроматографическую  камеру,  куда  за 10 - 15 мин. до
хроматографирования  наливают  один  из  подвижных  растворителей,
указанных  в таблице, в таком количестве, чтобы глубина погружения
пластинки  в  растворитель  составила 0,5 см. После подъема фронта
растворителя  от  линии старта на высоту 10 см хроматографирование
прекращают.  Пластинку  выдерживают  в вытяжном шкафу до испарения
растворителей   и   обрабатывают  бромфеноловым  реагентом,  затем
раствором  лимонной  (или уксусной) кислоты. О наличии экспромта в
пробе  свидетельствует  проявление  на  хроматограмме  серо-синего
пятна  хардина  либо  пятен  хардина  и грамекса (в зависимости от
количества  экспромта  в  пробе).  Величины  R   хардина, грамекса
                                              f
приведены в таблице.

Таблица

     ВЕЛИЧИНЫ R  ПРОИЗВОДНЫХ МОЧЕВИНЫ НА ПЛАСТИНКАХ "СИЛУФОЛ"
               f

--------------+------------------------------------------------------------
¦ Соединение  ¦                   Подвижный растворитель                  ¦
¦             +---------------------+---------------------+---------------+
¦             ¦бензол - ацетон (4:1)¦гексан - ацетон (1:1)¦диэтиловый эфир¦
+-------------+---------------------+---------------------+---------------+
¦Грамекс      ¦0,28                 ¦0,41                 ¦0,70           ¦
¦Хардин       ¦0,33                 ¦0,35                 ¦нечеткое пятно ¦
¦Круг         ¦0,37                 ¦0,53                 ¦нечеткое пятно ¦
¦Эллипс       ¦0,43                 ¦0,63                 ¦нечеткое пятно ¦
--------------+---------------------+---------------------+----------------

2.7. Обработка результатов анализа

Количественная оценка хардина, грамекса, являющихся действующими веществами экспромта, проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен пробы и рабочих растворов пестицидов. Содержание каждого пестицида в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

                               A x V
                           X = ------,
                               V  x P
                                1

    где:
    X - содержание хардина, грамекса в исследуемой пробе, мг/л;
    A - количество хардина, грамекса, найденное путем сравнения со
стандартами, мкг;
    V - объем рабочей пробы, мл;
    V   -  объем аликвоты, отобранной для хроматографирования, мл.
     1
При нанесении всей пробы V  = V;
                          1
    P - объем исследуемой пробы, мл.

3. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: