Временные методические указания по определению суми-альфа в биологическом материале методом газожидкостной хроматографии

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6101-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

    Суми-альфа - S-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)-
3-метилбутират.  Суми-альфа  представляет  собой  смесь  изомеров,
обогащенную  эсфенвалератом.   Эсфенвалерат  -  оптический  изомер
фенвалерата.   Другим   основным  изомером   суми-альфа   является
(R)-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират.
Суми-альфа  - жидкость или твердое вещество коричневого цвета, без
специфического  запаха.  Т.  кип. 225 °C/1,7 мм рт. ст., летучесть
                     -7
при  20  °C 1,44 x 10   мм рт. ст. Почти нерастворим в воде, менее
1,0 ч./млн. Растворимость в органических  растворителях при 25 °C,
в % вес/объем: ксилол  -  45,0;  хлороформ -  45,0; ацетон - 45,0;
этилацетат - 45,0.

            CH   CH                              C  H  ClNO .
              3    3                              25 22    3
               \/
               CH           //\      //\         Мол. масса 419,9.
        _____   ¦          //  \    //  \
    Cl_//   \\_CH___COOCH__¦   ¦¦-O-¦   ¦¦
       \ ___ /        ¦    \\  /    \\  /
         ---          CN    \\/      \\/

    Предложен  в качестве инсектицида  для  борьбы  с  вредителями
овощных  культур, плодовых  деревьев.  ЛД   для крыс 325 мг/кг (по
                                         50
данным фирмы Сумитомо).

2. Методика определения суми-альфа в биологическом материале

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на определении суми-альфа методом газожидкостной хроматографии после экстракции препарата из анализируемой пробы органическим растворителем и очистки экстрактов в системе жидкость - жидкость.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода определения суми-альфа (ГЖХ)

--------------+------------+-------------+-------------+-------------------
¦Анализируемый¦   Размах   ¦   Среднее   ¦Относительное¦   Доверительный  ¦
¦   объект    ¦варьирования¦  значение   ¦ стандартное ¦интервал среднего,¦
¦             ¦            ¦ определения ¦  отклонение ¦         %        ¦
+-------------+------------+-------------+-------------+------------------+
¦Кровь        ¦64 - 72     ¦67,4         ¦4,99         ¦+/- 4,95          ¦
¦Печень       ¦59 - 64     ¦61,4         ¦4,5          ¦+/- 4,50          ¦
¦Мозг         ¦58 - 65     ¦62,0         ¦4,45         ¦+/- 4,49          ¦
¦Сальник      ¦66 - 69     ¦67,2         ¦2,03         ¦+/- 3,16          ¦
--------------+------------+-------------+-------------+-------------------

Диапазон определяемых концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг (мг/л).

Предел обнаружения 0,005 мг/кг (мг/л).

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, осч 95, ТУ 6-09-3513-86.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.

Трихлоруксусная кислота, ТУ 6-09-1926-77, 20%-ный водный раствор.

Сульфат натрия, ч, ГОСТ 4166-76, 5%-ный водный раствор.

Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Хроматон N-AW-HMDS (0,16 - 0,20 мм) с нанесенной неподвижной фазой SE-30 (Хемапол, ЧССР).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором.

Суми-альфа - 96,5%, фирма "Сумитомо".

Основной рабочий стандартный раствор суми-альфа, содержащий 100 мкг/мл суми-альфа, готовят следующим образом: растворяют 10,36 мг суми-альфа (96,5%) в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Стандартный рабочий раствор, содержащий 1 мкг/мл суми-альфа, получают соответствующим разбавлением основного рабочего раствора. Хранят в холодильнике не более 5-ти месяцев.

Уксусная кислота, хч, ГОСТ 61-69.

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов (тип "Цвет-106" или др.).

Ротационный вакуумный испаритель для отгонки растворителей типа ИР-11, ТУ 25-11-917-76.

Микрошприцы МШ-10М, 10 мкл, ТУ 2-833-106.

Микроизмельчитель тканей, тип РТ-2, ТУ 64-1-1505-79.

Аппарат для встряхивания, ТУ 25-11-917-79, или аналогичный.

Центрифуга с числом оборотов до 6000 в мин.

Центрифуга ОПН-3442, ТУ 5-375-4260-76.

Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.

Воронки делительные емкостью 200, 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы конические емкостью на 100, 300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 25336-82.

Воронки конические, ГОСТ 25336-82.

Воронки Бюхнера, ГОСТ 25336-82.

Колба Бунзена, ГОСТ 25336-82.

Секундомер СД СПР 1.200, ГОСТ 5072-79.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

2.4.1. Пробы (кровь, печень, мозг, сальник, моча) отбирают в лабораторных условиях и сразу же помещают их в испарительную камеру холодильника. Хранят на льду не более 3 суток.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Биологический материал. Пробу биоматериала (кровь, печень, мозг, сальник, моча), предварительно измельченную ножницами, переносят в сосуд для гомогенизации и заливают 50 мл метанола или 50 мл смеси ацетон:вода (4:1). Биоматериал измельчают на микроизмельчителе тканей в течение 3 - 5 мин. при 3000 об./мин. Гомогенизированную пробу помещают в коническую колбу на 100 мл и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 часа (дважды по 30 мин.). Объединенный экстракт фильтруют через воронку Бюхнера. Фильтрат обрабатывают 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты или уксусной кислотой по 1 мл на каждый грамм ткани или мл крови и 10 мл воды и смесь помещают в испарительную камеру холодильника на 1 час. Затем к охлажденной смеси прибавляют по 10 - 15 мл 5%-ного водного раствора сульфата натрия и центрифугируют при 4000 - 5000 об./мин. в течение 10 - 15 мин. или фильтруют через воронку Бюхнера в вакууме водоструйного насоса. Центрифугат экстрагируют гексаном (3 x 20 мл). Объединенные гексановые экстракты промывают дистиллированной водой, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе. Последние порции растворителя удаляют при помощи сжатого воздуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона, выдерживают в холодильнике 2 - 3 часа и затем центрифугируют при 2000 об./мин. в течение 15 мин. Полученный указанным способом центрифугат анализируют на газожидкостном хроматографе.

2.5.2. Идентификация и количественное определение суми-альфа.

2.5.3. Метод газожидкостной хроматографии

Носитель - хроматон N-AW-HMDS.

Неподвижная фаза - 5% SE-30.

Колонка стеклянная 0,5 м x 3 мм.

Скорость газа-носителя (азота) 60 куб. см/мин. ("Цвет-106").

Скорость азота для продувки детектора 150 мл/мин.

                              -12
    Шкала электрометра 20 x 10    А.

Температура колонки 220 °C.

Температура испарителя 240 °C.

Вводимый объем 2 мкл.

Линейный диапазон детектирования 0,5 - 50 нг.

Минимально детектируемое количество 0,5 нг.

Время удерживания при указанных условиях 10,8 мин.

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным введением известного количества стандартного вещества, при условии, что величина пиков находится в диапазоне линейности детектора. Содержание суми-альфа в анализируемой пробе определяют по формуле:

                          C  x V  x H  x V
                           1    1    2
                      X = ----------------,
                            H  x V  x P
                             1    2

    где:
    X - содержание суми-альфа в пробе, мкг/г, мкг/мл;
    C - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
    H  - высота пика стандартного раствора, мм;
     1
    H  - высота пика пробы, мм;
     2
    V   -  объем  стандартного  раствора, введенный в хроматограф,
     1
мкл;
    V  - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
     2
    V - общий объем экстракта после упаривания, мл;
    P - навеска анализируемой пробы, г.

3. Техника безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими и токсическими веществами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: