Временные методические указания по определению харэлли в воде методом хроматографии в тонком слое

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6102-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Харэлли - смесь препаратов "хардин" (12,5% по мочевине) и "эллипс" (11,69% по мочевине) в соотношении 2:1 (весовые).

Действующее вещество хардина - комплекс диэтилэтаноламина и N-(2-хлор-бензол-сульфонил)-N-(6-метокси-4-метил-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (хлорсульфурона).

Структурная формула:

    --                             -¬   CH CH OH
    ¦                          CH   ¦     2  2
    ¦        Cl                  3  ¦  /
    ¦  _____/           N_____/     ¦ /
    ¦ //   \\_SO NHCONH_//   \\__N  ¦N___C H
    ¦ \ ___ /   2       \ ___ /     ¦ \   2 5
    ¦   ---             N --- \     ¦  \
    ¦                          OCH  ¦   C H
    ¦                             3 ¦    2 5
    L-                             --

    Эмпирическая формула: C  H  ClN O SC H  NO.
                           12 12   5 4  6 15

Молекулярная масса: 474,5.

Хардин - препарат, представляющий собой раствор действующего вещества в смеси вода - триэтиленгликоль (1:1, вес %) с добавкой 0,4% ОП-10. Содержание комплекса в растворе 16,5 +/- 0,5% (вес.). Плотность препарата при 20° 1115 - 1125 мг/куб. м, Т. кип. - 100 °C, хорошо растворим в воде, в полярных растворителях коагулируется, с неполярными не смешивается, нелетуч, в водных растворах устойчив в течение года, при разбавлении водой на свету при pH 5 - 7 и 20 °C разлагается.

ОБУВ в воздухе - 5 мг/куб. м.

Хлорсульфурон - белое кристаллическое вещество.

    Эмпирическая формула C  H  ClN O S.
                          12 12   5 4

Молекулярная масса 357,78. Т. пл. 174 - 178 °C. Растворимость в толуоле - 0,3%, метаноле - 1,8%, ацетоне - 7,0%.

Препарат выпускается в виде аминных солей (диметиламинная, изопропиламинная, моноэтаноламинная). Степень чистоты - 96 - 98%.

Действующее вещество эллипса - N-(о-хлорфенилсульфонил)-N-(4-диметиламино-6-(а-метил)-пропилидениминоокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевина.

Структурная формула:

           Cl               N(CH )
     _____/           N_____    3 2                  C  H  ClN O .
    //   \\_SO NHCONH_//   \\N                        16 22   7 4
    \ ___ /   2       \ ___ /       CH
      ---             N --- \      /  3              М.м. 441,5.
                             O _N=C
                              2    \
                                C H
                                     2 5

Синонимы: эллипс, хлорсульфоксиметил. Химически чистое соединение - белое кристаллическое вещество, твердое, без запаха. Т. пл. - 173 °C. Плохо растворим в воде, этиловом спирте, ацетоне, хлороформе, хорошо - в диметилсульфоксиде. Степень чистоты - 96,67%.

Препарат "харэлли" представляет собой светло-желтую прозрачную жидкость со слабым аммиачным запахом, плотность - 1,14 г/куб. см, растворим в воде.

ДОК, ПДК, МДУ харэлли в настоящее время не установлены.

2. Методика определения

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении хардина и эллипса (действующие вещества пестицида "харэлли") из подкисленной пробы воды хлороформом, концентрировании экстракта и хроматографировании его аликвоты в тонком слое пластин "Силуфол". В качестве подвижной фазы могут быть использованы: бензол - ацетон в соотношении 4:1 (об./об.); гексан - ацетон в соотношении 1:1 (об./об.).

Для обнаружения зон локализации препаратов на хроматограммах используют смесь растворов бромфенолового синего и азотнокислого серебра с последующей обработкой хроматограмм лимонной (или уксусной) кислотой. Количественное определение препаратов проводят сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандарта.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0,005 - 0,602 мг/л.

Предел обнаружения - 0,5 мкг.

    Размах варьирования: хардин - 80,0 - 100,0%,
                         эллипс - 80,0 - 100,0%.
    Среднее значение определения стандартных количеств:
                         хардин - 90%,
                         эллипс - 92%.
    Стандартное отклонение среднего:
                         хардин - 0,6,
                         эллипс - 0,8.
    Относительное стандартное отклонение среднего:
                         хардин - 0,05,
                         эллипс - 0,05.

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен: другие соединения этого класса (круг, грамекс) в указанных условиях хроматографирования определению не мешают.

2.2. Реактивы и материалы

Хардин (хлорсульфурон), крист. (ВНИИХСЗР) 96 - 98%.

Эллипс (ВНИИХСЗР) 96,67%.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ 6-09-1910-77.

Кислота хлористоводородная, ч, ГОСТ 3118-77, водный раствор (1:1).

Кислота уксусная, хч, ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.

Кислота лимонная, хч, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.

Аммиак водный, чда, ГОСТ 3760-79.

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81.

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-3710-83.

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Пластинки "Силуфол" (Kavalier, ЧССР).

Вата гигроскопическая.

2.3. Приборы, посуда

Весы аналитические ВЛА-200М.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10396-75.

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 50 - 100 мл.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические плоскодонные, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, диаметр 56 мм, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл, 1 л.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1; 5; 10 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-82, на 0,1; 0,2 мл.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Скальпель.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартного, рабочих растворов хардина, эллипса

Стандартные растворы пестицидов концентрации 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата в ацетоне (или этиловом спирте) в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.

Рабочие растворы пестицидов концентраций 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартных растворов. Хранят рабочие растворы хардина, эллипса в холодильнике. Годны к употреблению в течение 3 - 5 дней.

2.4.2. Проявляющий реактив - бромфеноловый реагент

Смесь растворов бромфенолового синего (БФС) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5% водно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней. После обработки хроматограмм бромфеноловым реагентом осветляют фон обработкой пластин 2-процентным водным раствором лимонной кислоты или 5-процентным водным раствором уксусной кислоты.

2.4.3. Подготовка пластин "Силуфол"

Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3(об./об.). Глубина погружения пластинки в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят подготовленные пластинки в эксикаторе.

2.5. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЗУ, Москва, 1980, N 2061-79 от 21.08.1979). Отобранные пробы хранить в стеклянной таре в защищенном от света месте не более 1 - 3 суток.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка

На одно определение берут из анализируемого образца две пробы воды по 500 мл.

500 мл воды помещают в делительную воронку вместимостью 1 л, подкисляют до pH 2 разбавленной (1:1) дистиллированной водой - хлористоводородной кислотой (берут около 1 мл раствора кислоты) и экстрагируют препарат дважды свежими 10 - 15 мл хлороформа, каждый раз встряхивая содержимое воронки в течение 2 - 3 мин. Экстракты двух проб объединяют (получают по 40 - 60 мл) в делительной воронке вместимостью 250 мл, промывают 10 - 15 мл дистиллированной воды, подкисленной до pH 6 разбавленной хлористоводородной кислотой, и фильтруют через слой (около 7 - 10 г) безводного сульфата натрия в химической воронке в грушевидную колбу. Растворитель отгоняют до объема около 1 мл на ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °C. Остаток растворителя удаляют продуванием воздуха.

2.6.2. Хроматографирование

Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона (или этанола), закрывают колбу герметично пробкой, перемешивают содержимое и 0,2 мл полученного раствора наносят микропипеткой на подготовленную пластинку "Силуфол". Рядом с пробой наносят по 0,2 мл каждого рабочего раствора пестицида, что соответствует содержанию в пятне 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 мкг каждого препарата (растворы хардина и эллипса одинаковой концентрации наносят в одну точку).

    Пластинку  помещают  в хроматографическую камеру, куда за 10 -
15   минут  до  хроматографирования  наливают  один  из  подвижных
растворителей,  указанных  в  таблице,  в  таком количестве, чтобы
глубина  погружения  пластинки  в  растворитель  составила 0,5 см.
После  подъема фронта растворителя от линии старта на высоту 10 см
хроматографирование  прекращают.  Пластинку выдерживают в вытяжном
шкафу  до  испарения  растворителей  и  обрабатывают бромфеноловым
реагентом,  затем  раствором  лимонной  (или  уксусной) кислоты. О
наличии   харэлли   свидетельствует  проявление  на  хроматограмме
серо-синего   пятна  хардина  либо  пятен  хардина  и  эллипса  (в
зависимости  от  содержания харэлли в пробе). Величины R  хардина,
                                                        f
эллипса приведены в таблице.

Таблица

     ВЕЛИЧИНЫ R  ПРОИЗВОДНЫХ МОЧЕВИНЫ НА ПЛАСТИНКАХ "СИЛУФОЛ"
               f

-------------------+----------------------------------------------
¦    Соединение    ¦            Подвижный растворитель           ¦
¦                  +----------------------+----------------------+
¦                  ¦бензол - ацетон (4:1) ¦гексан - ацетон (1:1) ¦
+------------------+----------------------+----------------------+
¦Круг              ¦0,37                  ¦0,53                  ¦
¦Эллипс            ¦0,43                  ¦0,63                  ¦
¦Хардин            ¦0,33                  ¦0,35                  ¦
¦Грамекс           ¦0,28                  ¦0,41                  ¦
-------------------+----------------------+-----------------------

2.7. Обработка результатов анализа

Количественная оценка хардина, эллипса, являющихся действующими веществами харэлли, проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен пробы и рабочих растворов пестицидов.

Содержание каждого пестицида в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

                               A x V
                           X = ------,
                               V  x P
                                1

    где:
    X - содержание хардина, эллипса в исследуемой пробе, мг/л;
    A  - количество хардина, эллипса, найденное путем сравнения со
стандартами, мкг;
    V - объем пробы, мл;
    V   -  объем аликвоты, отобранной для хроматографирования, мл,
     1
при нанесении всей пробы V = V ;
                              1
    P - объем исследуемой пробы, мл.

3. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: