Временные методические указания по определению глуфосинат аммония (баста) в воде и растительных культурах методом тонкослойной хроматографии

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6106-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика

Глуфосинат аммоний (баста), XOE 039866-DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфонат аммония (по номенклатуре ИЮПАК).

       O
       ¦                 -  +
    CH P-CH -CH -CH-COOH/ NH                     C H  N O P.
      3    2   2 ¦          4                     5 15 2 4
       \\        NH
        O          2                             М.м. 198,19.

Белое кристаллическое вещество, температура плавления 215 °C.

Растворим в воде, нерастворим в органических растворителях. ОДУ в воде водоемов 0,02 мг/л.

Гербицид для борьбы с широким спектром одно- и многолетних двудольных и злаковых сорняков в овощеводстве, виноградарстве, садоводстве.

2. Методика определения глуфосината аммония (баста) в воде и растительных культурах <*>

--------------------------------

<*> Примечание: методика разрабатывалась на яблоках различных сортов, кожуре цитрусовых, травянистой растительности, хвое, зерне, картофеле; при определении в других культурах необходимо предварительно провести анализ контрольной пробы исследуемого продукта.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на концентрировании водного экстракта, очистке и выделении глуфосината аммония на колонке с полисорбом и определении препарата из аликвоты подготовленного экстракта хроматографией на пластинках "Силуфол" с обнаружением басты по реакции с нингидрином.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

    Минимально детектируемое количество - 0,1 мкг.
    Нижний предел определения:
      вода - 0,025 мг/л
      растения:
        овощи, фрукты - 0,1 мг/кг
        зерно - 0,2 мг/кг
        зеленая масса (травянистая растительность, хвоя) - 0,5 мг/кг
    Размах варьирования, %:
      вода - 70 - 102
      растения - 66 - 105
    Среднее значение определения, %:
      вода - 87
      растения - 83
    Стандартное отклонение, %:
      вода - 5,6
      растения - 6,4
    Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5:
      вода +/- 15,6
      растения +/- 18

Поправочный коэффициент, учитывающий потери при концентрировании вымораживанием до 2 - 3 мл, равен 1,2.

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают другие ФОП, в том числе водорастворимые, глифосат фосфамид. Определению могут мешать водорастворимые коэкстрактивные вещества, содержащие аминогруппу. В связи с этим проводится ТСХ-анализ контрольного образца исследуемой культуры, как описано ниже (п. 2.5.1).

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Полисорб С-60/100, ТУ 6-05-211-1313-86.

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.

Аммиак водный, 25%, ч, ГОСТ 3760-79.

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-81.

Этанол 96%, ГОСТ 5962-81.

Медь сернокислая, чда, ГОСТ 19347-84, прокаленная при t = 160 °C до светло-голубого цвета.

Натрия хлорид, ч, ГОСТ 4233-77.

Диэтиловый эфир медицинский, ГОСТ 6265-74.

Вата обезжиренная (промытая эфиром).

Бинт или марля.

Глуфосинат аммоний с содержанием основного вещества не менее 99%.

Основной стандартный раствор (ОСР) глуфосината аммония: 100 мг вещества растворяют в 100 мл 1-процентного водного раствора аммиака. Раствор хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.

Рабочие стандартные растворы 1 - 100, 2 - 10 мкг/мл, 3 - 1 мкг/мл готовят разведением ОСР 1-процентным раствором аммиака.

Растворы хранить в холодильнике не более 2-х недель.

Проявляющий реагент: 2-процентный раствор нингидрина в ацетоне. Хранить в темной склянке.

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб, ТУ 25-11-917-74.

Вакуумный водоструйный насос.

Колба Бунзена емк. 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронка Бюхнера, d = 75 мм, ГОСТ 9147-80.

Электроплитка с закрытой спиралью.

Холодильник бытовой с морозильной камерой.

Колбы конические, 250, 50 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные, 100, 50 мл, ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные,50,100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пробирки мерные, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Выпарительные чашки 40 - 50 мл, ГОСТ 9147-80.

Колонки хроматографические, альфа = 18 мм, высота 20 см.

Пипетки на 1 - 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Микропипетки на 0,1; 0,2 мл, ГОСТ 1770-74, или дозаторы пипеточные на 0,1; 0,2 мл, III, ТУ 84-1-3329-81, или шприц на 1 мл.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция глуфосината аммония из воды и растений

    Вода. 200 мл анализируемой пробы помещают в круглодонную колбу
емкостью  500  мл.  Присоединяют  колбу к ротационному испарителю,
помещают ее в баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) <*>.
Вращают  колбу  на ротационном испарителе (без включения вакуума),
чтобы   вода  в  колбе  начала  кристаллизоваться.  Кристаллизацию
проводят  до  тех  пор,  пока  в колбе не останется ~= 20 мл воды.
Оставшуюся  воду переносят в отгонную колбу емкостью 50 - 100 мл и
продолжают  кристаллизацию до тех пор, пока в колбе не останется 2
-  3  мл.  Быстро  сливают  воду  в  мерную  пробирку  (V ).  Либо
                                                         1
оставшуюся  воду  (~=  20  мл)  сливают  в  выпарительную  чашку и
упаривают  на  кипящей водяной бане до объема ~= 2 мл. (Осторожно!
Не выпаривать  досуха,   чашку  периодически  ополаскивают  водой,
оставшейся  в чашке.) Переносят оставшуюся воду в мерную пробирку.
Измеряют  объем  (V ). Отбирают 1 мл пробы, прибавляют к нему 1 мл
                   1
этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают,
дают   отстояться   и   аликвоту   0,1   -   0,3   мл  наносят  на
хроматографическую пластинку.

--------------------------------

<*> Примечание: приготовленную смесь лед с солью можно повторно заморозить в холодильнике, чтобы использовать в дальнейшем.

Растительные продукты. Овощи, фрукты, траву измельчают до 0,5 - 1 см, зерно до 2 - 3 мм (отсеивают от муки) и отбирают среднюю пробу: овощи, фрукты - 100 г, трава - 20 г, зерно - 50 г. Пробу помещают в плоскодонную колбу и заливают точно измеренным объемом воды: овощи, фрукты - 150 мл, траву, зерно - 100 мл. Встряхивают пробу в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отбирают часть экстракта (овощи, фрукты - 80 - 90 мл, зерно, трава - 60 - 70 мл), фильтруя его под вакуумом водоструйного насоса в колбу Бунзена через двойной слой марли, вложенной в воронку Бюхнера. Из колбы Бунзена отбирают в цилиндр точно половину прибавленного к исследуемому образцу объема воды: овощи, фрукты - 75 мл (соответствует массе "P" - 50 г), трава, зерно - 50 мл (масса 10 и 25 г соответственно). Измеренный водный экстракт переносят в делительную воронку и промывают этилацетатом 2 x 30 мл; этилацетат (верхний слой) отбрасывают. Водный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей емкостью 100 - 150 мл и концентрируют вымораживанием до 2 - 3 мл, как описано для воды. Далее проводят очистку образца на колонке, как описано ниже.

Одновременно с анализируемым образцом подготавливают экстракт аналогичного контрольного образца.

Очистку экстрактов проводят на колонке с полисорбом.

Подготовка колонки. Колонку присоединяют к колбе Бунзена, соединенной с водоструйным насосом. В колонку помещают тампон из обезжиренной ваты, насыпают 15 куб. см полисорба, наливают 10 мл ацетона и включают водоструйный насос. Затем на слой полисорба помещают ватный тампон и промывают слой еще 40 мл ацетона при легком просасывании водоструйным насосом, чтобы полностью удалить ацетон. Затем насос отключают.

    К  подготовленному, как  описано  выше, экстракту  (2  - 3 мл)
прибавляют   50  мл  ацетона  и  хорошо  перемешивают.  Пропускают
полученный   ацетоновый   раствор   через   колонку  под  вакуумом
водоструйного   насоса,  промывают  колонку  20  мл  ацетона  (под
вакуумом), затем 20 мл смеси ацетон - вода  9:1  (под вакуумом)  и
весь элюат  отбрасывают.  Колбу  отключают  от вакуума, пропускают
через колонку  15  мл  воды при прокапывании без отсоса. Когда над
слоем  сорбента  останется  ~  0,5  см  воды,  подключают  колбу с
колонкой к водоструйному  насосу.  Сливают элюат из колбы в мерную
пробирку  и  измеряют  точно  объем  - V  - (должно быть ~ 10 мл).
                                        1
Отбирают 1 мл экстракта, прибавляют к нему 1 мл  этанола  и  1  мл
(1,2  г)   прокаленной   сернокислой   меди,   перемешивают,  дают
отстояться и аликвоту 0,1 - 0,2 мл анализируют методом ТСХ.

Примечание: можно (за исключением образцов, содержащих крахмал, например картофеля, зерна) вместо концентрирования вымораживанием использовать только способ концентрирования упариванием, но при этом использовать небольшие выпарительные чашки, а пробу доливать в чашку по мере упаривания. Упаривать осторожно, чтобы остаток в чашке каждый раз был не менее 2 мл. При этом способе концентрирования перед очисткой на колонке экстракт в чашке (2 - 3 мл) охлаждают 10 минут в холодильнике (t +4 - 6 °C). К охлажденному экстракту прибавляют ацетон, как описано ниже.

Одновременно готовят элюат контрольного образца. Из полученного контрольного элюата (10 мл) отбирают в две пробирки по 1 мл, в одну из которых прибавляют микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония (0,1 мл рабочего стандартного раствора 2). Если нет возможности подготовить экстракт контрольного образца (см. п. 2.1.3), то обязательно от полученного элюата исследуемого образца отбирают 1 мл и прибавляют в него микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония. Далее прибавляют по 1 мл этанола и поступают, как описано выше для исследуемого образца.

2.5.2. Тонкослойная хроматография

    Пластинку  "Силуфол"  размером  15  x 15 см делят на 5 полосок
шириной  3  см.  С нижнего края пластинки, на расстоянии 1,5 см от
края, по  центру каждой полосы наносят микропипеткой (шприцом) или
пипеточным  дозатором  по  0,2  мл  контрольного  элюата, элюата с
внесенным  глуфосинатом  аммония, элюата исследуемого образца, 0,2
мл рабочего стандартного раствора 3, что соответствует  0,2 мкг, и
0,1  мл рабочего стандартного раствора 2, что соответствует 1 мкг.
Пластинку  при  нанесении  проб  и  стандартов  для более быстрого
испарения  воды  можно  подогревать  на  электрогрелке. Когда вода
испарится,  пластинку  помещают  в  хроматографическую  камеру,  в
которую налита  смесь метанол - аммиак  (7:3).  Дают  растворителю
подняться  на  10  см  от  старта  и вынимают пластинку из камеры.
Помещают  ее  под УФ-свет на 25 минут, располагая на расстоянии 20
см  от  источника  света.  После  облучения  опрыскивают пластинку
проявляющим  реагентом  и  помещают на 1 мин. в сушильный шкаф при
температуре  40  °C.  Затем  вынимают  из  шкафа  и  оставляют при
комнатной   температуре  (исключить  прямое  попадание  солнечного
света).  Через  5  -  7  минут проявляются сиренево-красного цвета
пятна  глуфосината аммония с R  0,7 +/- 0,5, в том числе стандарт,
                              f
внесенный в контрольный экстракт (или элюат исследуемого образца).
Сразу  после  проявления  стандартов  проводится оценка содержания
пестицида в исследуемом образце.
    Примечание:  при  увеличении температуры и времени прогрева, а
также   при   более  длительном  хранении  (уже  после  проявления
стандартов)   в  некоторых  образцах  проявляются  коэкстрактивные
вещества с R  0,68 +/- 0,05 и 0,72 +/- 0,05, 0,5 +/- 0,05.
            f

2.6. Обработка результатов анализа

    Количественное   определение   проводится   путем  визуального
сравнения  интенсивности  окраски  и  размера  пятен пробы и пятен
стандартных растворов. При этом следует обратить внимание на пятно
стандарта,  содержащего  0,2  мкг, и  пятно, где 0,2 мкг внесено в
пробу.  Наиболее  точно  (ошибка  +/-  11%)  количественная оценка
достигается  при концентрациях 0,2 - 1 мкг. При большем содержании
баста  в  исследуемом образце необходимо разбавить элюат (исходный
объем  V  = 10 мл) и повторить ТСХ-определение, как описано выше в
        1

п. 2.5.2.

    Расчет  результатов  содержания  баста  в  образце проводят по
следующей формуле:

                           A x V  x B x K
                                1
                       X = --------------,
                               V  x P
                                2

    где:
    X - содержание баста в образце, мг/кг;
    A - содержание баста, найденное в образце на пластинке, мкг;
    V  - общий объем водного элюата, мл;
     1
    B - кратность разведения V ;
                              1
    V   -  объем  этанольного экстракта, нанесенного на пластинку,
     2
мл;
    P - масса анализируемой пробы, мл или г (для растений с учетом
взятой аликвоты соответствует 1/2 навески);
    K  -  коэффициент,  учитывающий  потери  при  концентрировании
вымораживанием до объема 2 - 3 мл, равен 1,2.

3. Техника безопасности

Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: