Методические указания по определению диафентиурона (пегаса) в воде, почве, цитрусовых, семенах хлопчатника хроматографическими методами

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6255-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Диафентиурон (пегас CGA 106630) - препарат производства фирмы "СибаГейги", кристаллическое вещество белого цвета, хорошо растворим в ацетонитриле.

                  H C  CH
                   3     3
                     \/
                    C-H
                   /
     /\\  O  /\\  /  H C   CH
    /  \\/ \/  \\/ S  3      3
    ¦¦  ¦   ¦¦  ¦   \\  \ /                         М.м. 384,59.
    \  //   \  //\   C   C
     \//     \//  \ / \ / \
             ¦     N   N   CH
         H C-CH    ¦   ¦     3
          3  ¦     H   H
             CH
               3

Рекомендован как несистемный инсектоакарицид. Легко разрушается под действием солнечного света. Рекомендуется хранить в закрытой таре при температуре не выше 5 °C.

2. Определение диафентиурона в воде, почве, цитрусовых, семенах хлопчатника методами газовой и тонкослойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на определении диафентиурона газожидкостной и тонкослойной хроматографией после извлечения из анализируемой пробы органическим растворителем. Тонкослойная хроматография проводится в тонком слое силикагеля. Газохроматографическое определение проводится на макрокапиллярной колонке либо на набивной колонке в виде гептафторпроизводного.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций - 0,01 мг/л для воды; 0,03 мг/кг - для почвы, растений.

--------------+-------------+------------+-------------+---------------------
¦Анализируемый¦   Размах    ¦  Среднее   ¦Относительное¦   Доверительный    ¦
¦   объект    ¦варьирования,¦  значение  ¦ стандартное ¦интервал среднего, %¦
¦             ¦      %      ¦определения,¦   откл., %  ¦  n = 5, P = 0,95   ¦
¦             ¦             ¦     %      ¦             ¦                    ¦
+-------------+-------------+------------+-------------+--------------------+
¦Вода         ¦85,7 - 90,5  ¦87,5        ¦+/- 4,2      ¦+/- 4,6             ¦
¦Почва        ¦80,1 - 85,3  ¦82,6        ¦+/- 5,7      ¦+/- 7,9             ¦
¦Лимоны       ¦77,1 - 86,0  ¦84,3        ¦+/- 5,8      ¦+/- 7,8             ¦
¦Семена       ¦75,0 - 85,0  ¦80,7        ¦+/- 5,9      ¦+/- 8,0             ¦
¦хлопчатника  ¦             ¦            ¦             ¦                    ¦
--------------+-------------+------------+-------------+---------------------

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, ч, ГОСТ 20015-74.

Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.

Оксид алюминия II ст. акт., ч, МРТУ 6-09-5296-68.

Приготовление стандартных растворов диафентиурона

Стандартный раствор, содержащий 1000 мкг/мл вещества, готовят растворением 50 г препарата в мерной колбе на 50 мл в ацетонитриле (ацетоне). Исходный основной раствор можно хранить в холодильнике в течение 2-х недель.

Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением исходного основного раствора. Рабочие растворы хранят не более 2-х суток (препарат разлагается на свету).

Получение фторпроизводного диафентиурона с концентрацией 1 мкг/мл: 10 мкл основного стандартного раствора, содержащего 10 мкг вещества, переносят в мерную пробирку, прибавляют 10 мкл гептафтормасляного ангидрида и оставляют на 1 час. По истечении этого времени избыток реагентов отдувают в токе сжатого воздуха. Сухой остаток разбавляют в 10 мл гексана.

К методу ГЖХ

Гептафтормасляный ангидрид, ч, ТУ 6-09-40-2571-87.

Азот газообразный, ГОСТ 9293-74.

Хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.

К методу ТСХ

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77.

Нитрат серебра, ГОСТ 1277-81.

Лимонная кислота, ГОСТ 908-79, 2-процентный раствор.

Пластинки "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).

    Проявляющий реактив: Раствор А:  100 мг бромфенолового синего
                                     растворяют в 10 мл ацетона.
                         Раствор Б:  1 г нитрата серебра
                                     растворяют в 40 мл воды и
                                     прибавляют 120 мл ацетона.

Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 200 мл и доводят ацетоном до метки.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф "Цвет-106" с ТИД и ДПР.

Стеклянная макрокапиллярная колонка с фазой SE-301 с толщиной пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м.

Колонка стеклянная 1000 x 3 мм с 5% SE-30.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1087-73.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.

Посуда лабораторная по ГОСТ 1770-74, 25336-82, 20292-74.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Вода. 500 мл пробы помещают в делительную воронку и препарат экстрагируют трижды по 30 мл хлороформа. Отделяют органический слой, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл при температуре бани не выше 60 °C. Досуха удаляют остаток растворителя на воздухе. Далее проводят определение методами ГЖХ и ТСХ.

Почва, лимоны, семена хлопчатника. 10 г анализируемой пробы (лимоны и семена хлопчатника измельчают на электромельнице, почву просушивают и просеивают) помещают в колбу емкостью 500 мл и заливают 150 мл хлороформа. Встряхивают в течение 1,5 - 2 часов. Экстракцию повторяют трижды. Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе до 1 - 2 мл при температуре не выше 60 °C.

2.5.2. Очистка экстракта

Упаренный экстракт (1 - 2 мл) вносят в стеклянную колонку, заполненную 10 г оксида алюминия и 2 - 3 г безводного сульфата натрия, уплотненных и промытых ацетонитрилом. Элюируют пробу 200 мл ацетонитрила. Элюат концентрируют до объема 0,2 - 0,5 мл. Остаток в колбе растворяют в 50 мл гексана и переносят в делительную воронку. Прибавляют в делительную воронку 15 мл ацетонитрила, встряхивают, дают разделиться фазам. Отделяют ацетонитрил, а к гексану добавляют новые 15 мл ацетонитрила. Экстракцию повторяют трижды. Объединяют ацетонитрильную фракцию, концентрируют до объема ~ 0,1 мл. Полностью удаляют растворитель на воздухе. Далее проводят определение методами ГЖХ и ТСХ.

2.5.3. Определение методом ГЖХ

А. Условия хроматографирования при определении на макрокапиллярной колонке

Хроматограф "Цвет-106" с термоионным детектором.

Колонка макрокапиллярная с фазой SE-301, толщина пленки 2 мкм, диаметр 0,6 мм, длина 55 м.

Температура испарителя - 230 °C.

Температура колонки - 230 °C.

Расход газа-носителя - 30 мл/мин.

Время удерживания - 3,7 мин.

Минимально детектируемое количество - 20 нг.

Б. Условия хроматографирования при определении в виде фторпроизводного

Пробу после концентрирования переносят количественно 1 - 2 мл ацетонитрила в пробирку на шлифе. Удаляют растворитель с помощью сжатого воздуха полностью. К сухому остатку приливают 0,1 мл ацетонитрила и 10 мкл гептафтормасляного ангидрида, оставляют на 1 час на воздухе. Затем удаляют избыток реагента струей воздуха полностью. К сухому остатку приливают 1 мл гексана и аликвоту 3 - 5 мкл вводят в хроматограф.

Условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации.

Носитель - хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.

Колонка стеклянная 1000 x 3 мм.

Скорость газа-носителя - 50 мл/мин.

                                -12
    Шкала электрометра - 20 x 10    А.

Температура колонки - 170 °C.

Температура испарителя - 240 °C.

Температура детектора - 240 °C.

Вводимый объем - 5 мкл.

Линейный диапазон детектирования - 2 - 10 нг.

Время удерживания - 4 мин.

2.6. Обработка результатов

Содержание диафентиурона в пробе вычисляют по формуле:

                          G   x h   x V
                           ст    пр    общ
                      X = ----------------,
                            h   x V  x P
                             ст    1

    где:
    X - содержание препарата в пробе, мг/кг, мг/л;
    G     -   количество   стандартного   раствора,  введенного  в
     ст
хроматограф, нг;
    h   - высота пика стандартного раствора, мм;
     ст
    h   - высота пика пегаса в исследуемой пробе, мм;
     пр
    V  - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
     1
    V    - общий объем пробы, мл;
     общ
    P - навеска пробы, г (мл).

2.7. Определение методом ТСХ

    Пробу,   сконцентрированную   до   объема   0,1   -   0,2  мл,
количественно    наносят   на   пластинку   "Силуфол"   (пластинка
предварительно  промыта  в  ацетоне),  смывая  остаток  2 - 3 раза
хлороформом. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего
края  пластинки.  Справа  и  слева  от  пробы  наносят стандартные
растворы пестицида, содержащие 2, 5, 10 мкг препарата. Пластинку с
нанесенными  растворами  помещают  в  хроматографическую камеру, в
которую налита смесь гексан:хлороформ (1:2). После поднятия фронта
растворителей на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько
мин. на воздухе для испарения подвижного растворителя. После этого
пластинку  обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового
синего,  затем  обесцвечивают   2-процентным   раствором  лимонной
кислоты.  Диафентиурон  проявляется в виде пятен сине-бурого цвета
на желтом фоне с R  0,5 +/- 0,05.
                  f

Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора.

Количество препарата в пробе определяют по формуле:

                                 A
                             X = -,
                                 P

где:

X - содержание пегаса в пробе, мг/кг, мг/л;

A - количество пегаса, найденное в пробе, мкг;

P - навеска пробы, г (мл).

2.8. Техника безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: