Инструкция по микробиологической диагностике кишечных заболеваний, вызванных шигеллами, салмонеллами и энтеропатогенными кишечными палочками

Следует отметить, что в идентификации культур, подозрительных на принадлежность к шигеллам или салмонеллам, наиболее важное значение имеет подробное изучение ферментативных свойств. Использование в целях идентификации культур только метода агглютинации подозрительных колоний на стекле прямо с чашки первичного посева или даже со среды Ресселя или "скошенного столбика" может явиться источником серьезных диагностических ошибок. К такому приему надо относиться с большой осторожностью.

При невозможности окончательной идентификации культуры на месте ее необходимо направить в вышестоящую лабораторию или научно-исследовательский институт. В этом случае ответ формулируется так: "Выделена культура, подозрительная на принадлежность к шигеллам (салмонеллам). Анализ необходимо повторить".

Выдача таких ответов допускается только как исключение при обязательном условии пересылки культур в вышестоящую лабораторию.

При достаточном наборе биохимических тестов и диагностических бактериальных препаратов неидентифицированные культуры представляют большую редкость.

6. Фаготипирование брюшнотифозных бактерий

Впервые схема фаготипирования брюшнотифозных бактерий (S. typhi) была предложена в 1938 г. Крейджи и Иеном. В основу фаготипирования этих бактерий положено их строго специфическое отношение к адаптированным Vi-бактериофагам II серологического типа. Бактериофаг Vi-II - это один из Vi-фагов, активных в отношении культур, обладающих Vi-антигеном. Данный бактериофаг легко адаптируется к устойчивым Vi-штаммам брюшнотифозных бактерий, утрачивая при этом способность лизировать исходный штамм-субстрат.

В настоящее время принята международная стандартная схема фаготипирования брюшнотифозных бактерий, разработанная в 1947 г. Крейджи и Феликсом. Она включает 78 препаратов типовых Vi-бактериофагов, с помощью которых выявляется такое же количество фаготипов этих бактерий. Бактериофаги и соответствующие им фаготипы бактерий обозначают заглавными буквами латинского алфавита (от А до Т включительно), часть фагов обозначена арабскими цифрами (от 25 до 48).

Помимо типовых адаптированных Vi-II бактериофагов, при типировании культур обязательно применяют один или несколько неадаптированных брюшнотифозных Vi-бактериофагов (серологических типов I, IV, VII и др.), которые выявляют присутствие в культуре типируемого штамма Vi-антигена.

Одним из необходимых условий для определения фаготипа культуры является наличие в ней Vi-ангигена, так как именно с ним связана чувствительность культур к Vi-бактериофагам <1>.

--------------------------------

<1> Практически почти все свежевыделенные культуры бактерий брюшного тифа содержат Vi-антиген, что выявляется с помощью Vi-сыворотки в реакции агглютинации. Если штамм дает слабую реакцию Vi-агглютинации и результаты фаготипирования получаются нечеткими, рекомендуется его рассеять, выделить 8 - 10 колоний, из них под контролем Vi-сыворотки отобрать наиболее богатые Vi-антигеном штаммы и вновь подвергнуть их фаготипированию. Высев для отбора колоний лучше сделать из молодой 3 - 4-часовой бульонной культуры.

Вторым обязательным условием для проведения фаготипирования является использование типовых бактериофагов в так называемых тест-разведениях (TD в иностранных источниках), которые обычно указывают либо в специальном приложении к набору типовых фагов, либо на этикетках ампул или флакончиков с фагами.

    Штаммы фаготипа А лизируются всеми типовыми фагами. Подразделение типов
на подтипы в группах  В, С, D, Е и т.д. построено таким образом, что штаммы
подтипов  с  порядковым  номером  1 (В , С , D , Е  и т.д.)  лизируются  не
                                      1   1   1   1
только гомологичным фагом, но и фагами всех других подтипов данной группы.

В прилагаемой схеме указана активность типовых бактериофагов в отношении фаготипов бактерий брюшного тифа.

Техника фаготипирования. Суточную агаровую культуру типируемого штамма, проверенного предварительно с помощью Vi-сыворотки на содержание Vi-антигена, пересевают в пробирку с 2 - 3 мл мартеновского (можно хоттингеровского) бульона (pH 7,0 - 7,2) и помещают в термостат при температуре 37° на 3 - 4 часа. Молодую бульонную культуру наносят на чашку Петри, содержащую 25 - 30 мл 1,1 - 1,3% слабо щелочного питательного агара, хорошо подсушенного. Чашки с агаром рекомендуется приготовить накануне опыта, оставить их на ночь в термостате с закрытыми крышками, а на следующий день подсушить с открытыми крышками еще в течение 20 - 30 минут.

Культуру наносят на чашки петлей диаметром 5 мм или тонко оттянутой пастеровской пипеткой в виде отдельных капель, число которых должно быть на единицу больше числа используемых типовых бактериофагов (одна лишняя - для испытания с Vi-I фагом). Можно культуру засеять на чашку в виде сплошного газона. После того как нанесенная культура впитается в агар и засеянные участки подсохнут, на них наносят петлей или оттянутой пастеровской пипеткой типовые бактериофаги в тест-разведениях, а также Vi-I фаг.

После подсыхания капель фага чашки помещают в термостат при температуре 37 - 37,5°, результаты типирования учитывают дважды - через 5 - 6 часов и через 18 - 20 часов. Учет результатов проводят невооруженным глазом и с помощью 5-кратной лупы через дно чашки в прямом освещении. Фаготип культуры определяют по схеме, которая прилагается к каждому набору типовых фагов (табл. 3, на вклейке).

Таблица 3

РЕАКЦИЯ ТИПОВЫХ ШТАММОВ S. TYPHI С ТИПОВЫМИ ФАГАМИ

------+----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
¦Типо-¦                                                                  Типы фагов                                                                       ¦
¦вые  +---T--T---T--T---T--T--T---T--T--T---+---T--T---+---T---T--T---T--T---+---T---+---T---+---T--T---T--T--T---T--T---+---T---+---T--T---T--T---T--T---+
¦штам-¦ А ¦В ¦В  ¦В ¦С  ¦С ¦С ¦С  ¦С ¦С ¦D  ¦D  ¦D ¦D  ¦D  ¦D  ¦D ¦Е  ¦Е ¦Е  ¦F  ¦F  ¦ G ¦ Н ¦I  ¦I ¦ К ¦L ¦L ¦М  ¦M ¦ N ¦ О ¦ Т ¦27 ¦28¦38 ¦39¦40 ¦42¦46 ¦
¦мы   ¦   ¦ 1¦ 2 ¦ 3¦ 1 ¦ 2¦ 3¦ 4 ¦ 6¦ 7¦ 1 ¦ 2 ¦ 4¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8¦ 1 ¦ 2¦ 3 ¦ 1 ¦ 2 ¦   ¦   ¦ 1 ¦ 2¦   ¦ 1¦ 2¦ 1 ¦ 2¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦A    ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦++¦++¦++ ¦++¦++¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦
¦     ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦++¦++¦++ ¦++¦++¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦++¦++ ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦B    ¦+/-¦++¦-  ¦+ ¦-  ¦- ¦- ¦+  ¦+ ¦- ¦+/-¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦+  ¦+  ¦+  ¦+  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦+  ¦+ ¦-  ¦+/-¦+/-¦+/-¦++¦+  ¦+ ¦++ ¦+ ¦++ ¦
¦ 1   ¦   ¦++¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦+ ¦   ¦  ¦++ ¦  ¦++ ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦B    ¦+  ¦- ¦++ ¦+ ¦+  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦+/-¦+/-¦+ ¦+  ¦-  ¦+  ¦+ ¦+  ¦- ¦+  ¦+  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦+  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦++ ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦B    ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦+  ¦+/-¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦++¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦++ ¦++¦+  ¦++¦++¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++¦+/-¦++¦++ ¦
¦ 3   ¦   ¦  ¦   ¦++¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦+ ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦+  ¦  ¦   ¦+ ¦+ ¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦+  ¦++¦+  ¦++¦   ¦+ ¦++ ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦C    ¦+/-¦+ ¦+/-¦+ ¦++ ¦++¦++¦++ ¦++¦++¦+  ¦-  ¦+ ¦+/-¦+/-¦+  ¦- ¦+/-¦- ¦+/-¦+/-¦+  ¦+/-¦+/-¦+  ¦+ ¦-  ¦+ ¦- ¦+/-¦+ ¦-  ¦-  ¦+/-¦+/-¦++¦++ ¦+ ¦++ ¦- ¦-  ¦
¦ 1   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦++¦++¦++ ¦++¦++¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦+ ¦+  ¦  ¦++ ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦C    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦+/-¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦+  ¦- ¦-  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦++¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦C    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦+/-¦++¦++¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦+  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦+  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦+/-¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦+/-¦- ¦++ ¦- ¦-  ¦
¦ 3   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦++¦++¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦C    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦++ ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 4   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦++ ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦C    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦++¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 6   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦++¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦C    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦+  ¦+ ¦++¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦+/-¦- ¦-  ¦- ¦- ¦+/-¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 7   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦++¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦D    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦- ¦-  ¦- ¦- ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦+ ¦+  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦+/-¦
¦ 1   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦++¦  ¦   ¦  ¦  ¦++ ¦++ ¦++¦++ ¦++ ¦++ ¦++¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦D    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦++ ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦++ ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦D    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦++¦-  ¦-  ¦+/-¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 4   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦++¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦D    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦++ ¦++ ¦-  ¦++¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 5   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦++¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦++ ¦++ ¦   ¦++¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦D    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦+ ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦++ ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦+  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦+/-¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦++ ¦+ ¦-  ¦
¦ 6   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦+ ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦++ ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦D    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦++ ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 7   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦++ ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦D    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦++¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 8   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦++¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦E    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦++ ¦++¦++ ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦++ ¦
¦ 1   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦++ ¦++¦++ ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦+  ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦E    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦+  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦++¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦E    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦++ ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 5   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦F    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦++ ¦++ ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 1   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦++ ¦++ ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦F    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦++ ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦++ ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+

¦G    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦++ ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦++ ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦H    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦++ ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦+ ¦+  ¦- ¦++ ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦++ ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦I    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦++ ¦++¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 1   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦++ ¦++¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦I    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦++¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦++¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦K    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦++ ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦++ ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦L    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦++¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 1   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦++¦++¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦L    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦+ ¦++¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦M    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦++ ¦++¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 1   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦++ ¦++¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦M    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦++¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦ 2   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦++¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦N    ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦+ ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦+ ¦-  ¦- ¦++ ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦O    ¦-  ¦- ¦-  ¦+ ¦-  ¦- ¦- ¦+  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦+/-¦+ ¦-  ¦++ ¦-  ¦-  ¦+ ¦+/-¦- ¦++ ¦++¦++ ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦++ ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦+  ¦+ ¦++ ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦T    ¦-  ¦+ ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦+ ¦+/-¦- ¦- ¦+  ¦-  ¦- ¦-  ¦+  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦+  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦+/-¦- ¦- ¦-  ¦- ¦+/-¦-  ¦++ ¦-  ¦++¦-  ¦++¦++ ¦+ ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦++ ¦   ¦++¦   ¦++¦++ ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦27   ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦++ ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦++ ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦++ ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦28   ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦++¦-  ¦++¦-  ¦- ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦++¦   ¦++¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦38   ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦++ ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦++ ¦  ¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦39   ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦-  ¦- ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦++¦   ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦40   ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦++ ¦- ¦-  ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦  ¦   ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦42   ¦-  ¦- ¦-  ¦++¦-  ¦- ¦+ ¦++ ¦++¦++¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦++ ¦- ¦+  ¦- ¦-  ¦+  ¦++ ¦-  ¦-  ¦-  ¦++¦+/-¦+ ¦- ¦+  ¦++¦-  ¦+  ¦-  ¦-  ¦+ ¦+  ¦+ ¦++ ¦++¦++ ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦+ ¦   ¦  ¦  ¦++ ¦+ ¦+ ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦++ ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦+  ¦   ¦   ¦   ¦++¦   ¦  ¦  ¦   ¦+ ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦++¦++ ¦
+-----+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+---+
¦46   ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦-  ¦- ¦- ¦-  ¦- ¦+  ¦-  ¦-  ¦-  ¦- ¦++ ¦- ¦-  ¦- ¦++ ¦
¦     ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦   ¦  ¦  ¦   ¦  ¦   ¦   ¦   ¦   ¦  ¦+  ¦  ¦   ¦  ¦++ ¦
------+---+--+---+--+---+--+--+---+--+--+---+---+--+---+---+---+--+---+--+---+---+---+---+---+---+--+---+--+--+---+--+---+---+---+---+--+---+--+---+--+----

При типировании могут быть получены результаты, отклоняющиеся от указанных в схеме, как-то:

а) культура, обладающая Vi-антигеном, четко лизируется Vi-I фагом, но не чувствительна ни к одному из типовых Vi-II бактериофагов. Причинами этого явления могут быть: выделение фаготипов, к которым типовые фаги или еще не открыты, или отсутствуют в используемом наборе, а также выделение истинных Imperfect или Гамма-форм, к которым Vi-II бактериофаги не могут быть адаптированы;

б) культура богата Vi-антигеном, но проявляет неопределенную или частичную чувствительность к нескольким типовым фагам; это так называемые полилизабильные, или деградированные, штаммы. Для успешного типирования подобных штаммов можно рекомендовать типирование нескольких колоний, что иногда позволяет выявить среди них такие, которые сохраняют признаки определенного фаготипа. Если полилизабильные культуры выделены у больных, связанных между собой эпидемиологически, наблюдается выраженная однотипность в их чувствительности к одним и тем же типовым фагам, что позволяет иногда судить об общем для таких больных источнике инфекции;

в) культуры, лишенные Vi-антигена, естественно не могут быть типированы и обозначаются как W-форма.

7. Фаготипирование паратифозных B бактерий (S. paratyphi B)

Схема типирования S. paratyphi B, предложенная в 1943 г. Феликсом и Келлоу, в настоящее время включает 10 типов и подтипов, к которым добавляются еще 26 вариантов, показывающих отклонения от основного типа реакций с типовыми фагами. В отличие от типирования S. typhi, тип которых определяют по реакции культуры с идентичным адаптированным бактериофагом, типирование паратифозных бактерий основано на определении четких рисунков лизиса культуры рядом типовых фагов.

Техника типирования. Суточную агаровую культуру типируемого штамма пересевают в пробирку с 5 мл мартеновского бульона (pH 6,8 - 7,2) и помещают в термостат при температуре 37° на 3 - 4 часа (можно использовать и 18 - 20-часовую культуру). Затем на чашки Петри, содержащие около 20 мл 1,1 - 1,3% слабо щелочного хорошо подсушенного агара, петлей диаметром 3 - 4 мм или тонко оттянутой пипеткой наносят бульонную культуру отдельными каплями, число которых должно быть на одну каплю больше числа имеющихся типовых фагов (лишняя капля берется для контроля). Культуру можно нанести в виде сплошного газона, предварительно разметив дно чашки на сектора в соответствии с числом типовых фагов. Когда культура впитается в агар и засеянные участки станут сухими, на них наносят петлей или пипеткой типовые бактериофаги, взятые в рабочих тест-разведениях (РТР), указанных для каждого фага на этикетках или в специальном приложении. На контрольную каплю культуры наносят каплю бульона. После подсыхания капель чашки помещают в термостат при температуре 37°. Результаты типирования учитывают через 5 - 6 часов и через 24 часа невооруженным глазом или с помощью 5-кратной лупы через дно чашки в проходящем свете.

Определение фаготипа культуры производят в соответствии со схемой, прилагаемой к набору типовых фагов. Следует помнить, что могут встречаться некоторые отклонения от указанных в схеме каждого типа рисунков лизиса. Например, культура типируемого штамма может не лизироваться ни одним из типовых бактериофагов, такую культуру обозначают как отрицательную. В другом случае культура может лизироваться несколькими типовыми фагами, представляя при этом новый литический рисунок, не укладывающийся в уже установленные схемой типы, такую культуру обозначают как нетипируемую. Следует провести подробный антигенный анализ типируемого штамма с помощью монорецепторных сывороток. Обозначение фаготипов паратифозных B бактерий следующее: 1, 2, 3a, 3aI, 3b, Jersey, Beccles, Taunton, BAOR, Dundee, Worksop.

Таблица 4

СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОТИПОВ САЛМОНЕЛЛ ПАРАТИФА B

III. СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ САЛМОНЕЛЛЕЗНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Серологические исследования проводят: а) с целью диагностики при отрицательных бактериологических исследованиях или для уточнения диагноза ретроспективно при положительных бактериологических находках и отсутствии клинических симптомов болезни; б) с эпидемиологической целью для оценки состояния коллективного иммунитета, выявления источника инфекции, определения природы вспышки. Наибольшее значение серологические исследования приобрели в диагностике брюшного тифа и паратифов.

Самой распространенной является реакция агглютинации бактериальных диагностикумов в испытуемой сыворотке (реакция Видаля).

В настоящее время применяется также реакция непрямой гемагглютинации с эритроцитарными диагностикумами.

1. Реакция агглютинации (Видаля) при брюшном тифе, паратифах и прочих салмонеллезах

Кровь для реакции берут из пальца иглой Франка со сменными иглами, оспопрививательными перьями, иглой от шприца или шприцем из вены локтевого сгиба; последнее особенно удобно проводить одновременно со взятием крови из вены для выделения гемокультуры.

Для реакции агглютинации нужно не менее 0,5 - 1 мл крови. Кровь собирают в стерильную пробирку, которую ставят затем в термостат на 30 - 60 минут, после чего сгусток отделяют от стенок стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой и ставят в холодильник. Не позже чем через 24 часа после взятия крови отсасывают сыворотку. Если сыворотка не прозрачна, ее центрифугируют, затем отсасывают прозрачную сыворотку. Оставшийся сгусток после получения сыворотки целесообразно измельчить и посеять для выделения гемокультуры.

Методика постановки реакции. Готовят разведение сыворотки 1:100 в обычной бактериологической пробирке, для чего к 0,1 мл сыворотки добавляют 9,9 мл физиологического раствора. В четырехрядный штатив ставят несколько рядов агглютинационных пробирок (по числу применяемых диагностикумов), по 4 пробирки в каждый ряд, куда наливают (кроме первых пробирок в ряду) по 0,5 мл физиологического раствора. Сыворотку, разведенную 1:100, разливают по 0,5 мл в 1-ю и 2-ю пробирки каждого ряда. Во 2-й пробирке, следовательно, разведение будет 1:200. Содержимое 2-й пробирки тщательно перемешивают градуированной пипеткой и 0,5 мл переносят в 3-ю пробирку (разведение 1:400), из 3-й пробирки также переносят 0,5 мл в 4-ю пробирку (разведение 1:800). Из последней пробирки 0,5 мл сыворотки после тщательного перемешивания выливают.

Если для постановки реакции используют большое количество антигенов, можно упростить работу по приготовлению разведений исследуемой сыворотки. Для этого серийное разведение готовят в обыкновенных бактериологических пробирках в объеме, соответствующем количеству взятых антигенов, а затем разливают по 0,5 мл каждого разведения в соответствующие пустые (без физиологического раствора) агглютинационные пробирки каждого ряда. Так, если в реакцию взято 10 антигенов (т.е. соответственно 10 агглютинационных рядов), объем каждого разведения сыворотки, кроме первого, должен быть равен 5 мл. Первое разведение делается в двойном объеме по сравнению с прочими, так как половина его пойдет на заполнение первых пробирок каждого ряда, а вторая половина - для приготовления следующего разведения. Обязательно также при приготовлении исходного первого разведения учесть количество сыворотки, необходимое для контроля.

В каждый ряд агглютинационных пробирок с разведениями сыворотки и в контрольную (с 0,5 мл физиологического раствора) добавляют по 1 капле одного из диагностикумов.

Для контроля спонтанного выпадения осадка в сыворотке ставят в штатив пробирку с наименьшим разведением сыворотки (1:50 или 1:100), куда диагностикум не добавляют. Второй контрольной пробиркой является диагностикум в 0,5 мл физиологического раствора.

После добавления диагностикумов штатив с пробирками энергично встряхивают, затем помещают в термостат при температуре 37° на 18 - 24 часа. Учет результатов реакции агглютинации производят с помощью агглютиноскопа, осторожно встряхивая осадок или медленно наклоняя пробирку.

При положительной реакции осадок равномерным слоем покрывает дно пробирки. Края его обычно неровные (так называемый зонтик). Надосадочная жидкость просветляется. После легкого встряхивания пробирки в прозрачной надосадочной жидкости всплывают отдельные хлопья агглютината. Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдают хорошо выраженную агглютинацию, считают ее титром. При отрицательной реакции взвесь сохраняет исходную мутность, так же как в контроле диагностикума. При избытке антигена он может осесть на дно в виде плотного комка.

В настоящее время для постановки серологических реакций при заболеваниях салмонеллезной этиологии выпускают формалиновые ОН-диагностикумы, а также О-(2, 4, 7, 8, 9, 3 - 10) и Н-монодиагностикумы. При положительном результате с одним из ОН- или О-диагностикумов ставят реакцию агглютинации и с Н-монодиагностикумами в пределах выявленной О-группы (номенклатуру выпускаемых препаратов см. в Приложении).

Реакцию Видаля можно поставить и со штаммом, выделенным у больного (аутокультура). В этом случае в качестве диагностикума используют взвесь живой или убитой суточной агаровой культуры бактерий густотой в 3 млрд. микробных тел в 1 мл физиологического раствора.

Положительным результатом у людей, не привитых против брюшного тифа, считают агглютинацию в разведении 1:100 при наличии клинической картины и не ниже 1:200 при отсутствии таковой. У привитых больных указанные титры О-антител не являются надежным диагностическим признаком. Диагностический титр Н-антител у ранее привитых больных должен быть не менее 1:400.

Однако абсолютная высота титра агглютининов не может быть достоверным доказательством наличия заболевания. Специфический инфекционный характер реакции агглютинации выявляется только в динамике по нарастанию титра агглютининов.

В ответе указывают: "Реакция Видаля с брюшнотифозными, паратифозными диагностикумами отрицательная" или "Реакция Видаля с брюшнотифозным (или другим салмонеллезным серотипа...) диагностикумом дала положительный результат до титра 1: -".

2. Реакция пассивной Vi-гемагглютинации (ViPПГА)

Обнаружение антител к Vi-антигену оказывает большую помощь в диагностике заболеваний брюшным тифом и выявлении хронических носителей брюшнотифозных палочек.

Применявшаяся ранее для этой цели реакция агглютинации с бактериальным Vi-диагностикумом является, как показал опыт работы, недостаточно чувствительной и специфичной.

В настоящее время для обнаружения Vi-антител применяется реакция пассивной гемагглютинации с эритроцитарным Vi-диагностикумом. Принцип реакции заключается в том, что эритроциты, адсорбировавшие на своей поверхности молекулы антигена, приобретают способность агглютинироваться в присутствии соответствующих антител <1>.

--------------------------------

<1> Стандартный формалинизированный эритроцитарный Vi-диагностикум выпускается Московским научно-исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии. Срок годности препарата 6 месяцев.

Методика постановки реакции. Кровь для исследования берут из локтевой вены или пальца. Сыворотку (0,2 - 0,3 мл) обрабатывают так же, как для постановки реакции Видаля. Указанного количества сыворотки достаточно как для постановки ViPПГА, так и для одновременной постановки реакции Видаля.

Для постановки ViPПГА используются либо агглютинационные пробирки, либо полистероловые пластинки с лунками. Из испытуемой сыворотки готовят двукратные серийные разведения в объеме 0,5 мл (как и при постановке реакции Видаля), начиная с разведения 1:10 до разведения 1:1280. Ампулы с эритроцитарным Vi-диагностикумом тщательно взбалтывают до образования однородной взвеси и в каждую пробирку (лунку) с разведениями сывороток прибавляют по 0,25 мл диагностикума. Пробирки или пластинки встряхивают и помещают на 1 1/2 - 2 часа в термостат при температуре 37°.

Контролями диагностикума служат: а) постановка реакции со стандартной адсорбированной монорецепторной Vi-сывороткой (ампула такой сыворотки вкладывается в каждую коробку с эритроцитарным диагностикумом) - реакция должна быть положительной до разведения сыворотки, указанного в наставлении, прилагаемом к диагностикуму; б) постановка реакции с 0,5 мл физиологического раствора - реакция должна быть отрицательной.

Результаты реакции оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума:

++++ эритроциты полностью агглютинированы. Они равномерно устилают почти все дно пробирки или лунки или образуют картину зонтика;

+++ агглютинированы почти все эритроциты. Они равномерно покрывают дно пробирки. На этом фоне имеется малозаметное кольцо из осевших неагллютинированных эритроцитов в центре дна пробирки (лунки);

++ наряду с равномерным агглютинатом на дне пробирки или лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов в виде маленького колечка или "пуговки";

+ большинство эритроцитов не агглютинировано и осело в центре дна пробирки или лунки. Одновременно небольшое количество агглютинированных эритроцитов осело в виде мелких хлопьев вокруг центра дна пробирки или лунки;

- признаков агглютинации нет. Эритроциты осели в виде маленького колечка или "пуговки" (в зависимости от рельефа дна пробирки) в центре дна пробирки или лунки. Колечко или "пуговка" имеют малый размер и совершенно ровные края.

Титром Vi-антител в испытуемой сыворотке считается последнее разведение сыворотки, которое еще дает ярко выраженную агглютинацию эритроцитов и может быть оценено не менее чем на +++.

Реакция считается положительной при агглютинации эритроцитов на +++ в пробирке с разведением сыворотки 1:40 и более.

При оценке результатов реакции необходимо учитывать, что Vi-антитела появляются не у всех (хотя и у большинства) больных и что они образуются в поздние сроки болезни (конец 2-й, 3-я неделя). Поэтому отсутствие Vi-антител малосущественно при постановке диагноза брюшного тифа; наоборот, обнаружение Vi-антител в титре 1:40 и выше может служить существенным дополнительным диагностическим признаком, особенно в сочетании с положительными результатами реакции Видаля.

При применении ViPПГА с целью выявления хронических брюшнотифозных носителей также рекомендуется проводить параллельное исследование сывороток на наличие Vi-антител с помощью эритроцитарного Vi-диагностикума и на наличие О- и Н-антител с помощью соответствующих микробных диагностикумов. Все лица, сыворотка которых дает положительную реакцию с эритроцитарным Vi-диагностикумом в разведениях 1:40 и выше, считаются подозрительными на носительство брюшнотифозных микробов и подлежат углубленному бактериологическому обследованию. Материалом для исследования при этом служат испражнения, моча и желчь.

Особенно подозрительным является присутствие в сыворотке комплекса из Vi и Н-антител или всех трех видов брюшнотифозных антител (Vi, Н- и О-) в диагностических титрах. Тем не менее результат серологического исследования не может служить основанием для постановки окончательного диагноза брюшнотифозного носительства, который может быть поставлен только бактериологически путем выделения культуры салмонеллы тифа.

IV. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Применение сред с антибиотиками для выделения шигелл

Для повышения высеваемости дизентерийных бактерий можно параллельно с посевом на обычную среду Плоскирева производить посев на эту среду с добавлением антибиотиков (синтомицина, левомицетина и др.).

На приготовленной таким образом среде подавляется рост сопутствующей, чувствительной к указанным к антибиотикам микрофлоры, и вследствие этого облегчается выявление колоний шигелл, часто обладающих устойчивостью к антибиотику. При этом количество выделяемых дизентерийных бактерий значительно возрастает по сравнению с посевами на обычные среды.

Следует, однако, учитывать, что рост чувствительных к антибиотикам шигелл на этих средах подавляется. Поэтому посев на среды с антибиотиками ни в коем случае не исключает и не заменяет посева на обычные среды.

Для приготовления среды на 1000 мл ее (после охлаждения) добавляют 5 мл 1% спиртового раствора химически чистого синтомицина или половинное количество такого же раствора левомицетина.

Порция засеваемого материала может быть несколько увеличена по сравнению с посевом на обычную среду Плоскирева.

2. Серологическая диагностика дизентерии

Методика постановки серологических реакций при дизентерии не отличается от постановки реакции Видаля при брюшном тифе. Вследствие многообразия видов возбудителей дизентерии серологические реакции необходимо ставить с диагностикумами наиболее распространенных видов.

Диагностическим титром к шигеллам вида Флекснера для взрослых считают 1:400, для детей - 1:200, а для детей до 3 лет - даже 1:100; в отношении микробов Григорьева - Шига, Зонне и Ньюкестл - для взрослых 1:100. В связи с большим числом неспецифических положительных результатов этой реакции при дизентерии, в особенности в отношении диагностикума бактерий Флекснера, достоверные результаты могут быть получены лишь по нарастанию титров агглютининов при повторных постановках реакции на протяжении болезни.

В ответе указывают: "Реакция агглютинации сыворотки крови с антигеном шигелла вида... отрицательная", "Реакция агглютинации с антигеном шигелла вида... дала положительный результат до титра 1:...".

3. Серологическая диагностика при колиэнтеритах

Этот метод не имеет широкого применения, так как антитела к энтеропатогенным эшерихиям выявляются редко. Методика реакции агглютинации такая же, как и при постановке реакции Видаля. Сыворотку испытывают, начиная с разведения 1:20. Специфичность реакции в низких титрах обоснована тем, что у здоровых людей реакция всегда отрицательная. В качестве антигена используют только гретые (1 час при температуре 100°) культуры наиболее распространенных энтеропатогенных серотипов, лучше аутокультуру. Диагностическая ценность реакции возрастает при нарастании агглютининов в динамике.

4. Реакция нарастания титра фага (РНФ)

Реакция нарастания титра фага, предложенная В.Д. Тимаковым и Д.М. Гольдфарбом в 1955 г., основана на следующей предпосылке: специфический фаг (так называемый индикаторный), за очень редкими исключениями, размножается только при контакте с соответствующими микробами, следовательно, повышение титра фага, внесенного в исследуемый материал, указывает на вероятное присутствие в нем бактерий, одноименных с фагом.

РНФ не имеет самостоятельного диагностического значения. При положительном результате исследования материала, полученного от людей, ее необходимо подтверждать выделением соответствующей культуры. В качестве сигнальной РНФ можно использовать для обследования окружения больного, у которого выделен определенный возбудитель.

Методика постановки РНФ описана во Временных методических указаниях, утвержденных Министерством здравоохранения СССР 1 марта 1960 г.

Приложение 1

ПРИМЕНЕНИЕ САЛМОНЕЛЛЕЗНОГО О-БАКТЕРИОФАГА

Салмонеллезный О-бактериофаг обладает широким диапазоном специфического действия в отношении бактерий рода салмонелла и практически неактивен в отношении других представителей энтеробактерий.

Определение чувствительности культур к О-бактериофагу (О-фаготест) является простым, удобным и достаточно надежным вспомогательным методом при исследовании на кишечную группу бактерий. 97,5% заведомо салмонеллезных культур высокочувствительны к О-бактериофагу и только 2,5% могут быть резистентными. Прочие кишечные бактерии (не считая дизентерийных, которые в небольшом проценте случаев могут быть чувствительны к этому бактериофагу) лизируются указанным бактериофагом не более чем в 0,6 - 0,7% случаев. Среди известных и наиболее распространенных серологических типов салмонелл резистентные встречаются внутри нескольких типов: в небольшом количестве - у S. derby, S. tennesse и S. gallinarum-pullorum; в большом количестве (иногда до 50%) - у S. anatum, S. london и некоторых других серологических типов группы E.

Методика испытания культур на чувствительность к О-бактериофагу

Две капли 4- или 18-часовой бульонной культуры испытуемого штамма (можно использовать взвесь суточной агаровой культуры на физиологическом растворе) наносят тонко оттянутой пастеровской пипеткой или петлей диаметром 0,4 - 0,5 мм на хорошо подсушенный слабо щелочной питательный агар (pH = 7,2 - 7,4) в чашке Петри. После подсыхания на одну из капель петлей или пастеровской пипеткой меньшего диаметра наносят О-бактериофаг, а на другую в качестве контроля - каплю бульона.

Фаг наносят неразведенный или в разведении 1:5 (в зависимости от указания на этикетке). На одной чашке, таким образом, можно испытать одновременно 8 - 10 культур. Чашки с нанесенными культурами и О-бактериофагом помещают на 18 - 20 часов в термостат при температуре 37°, после чего учитывают результаты. Положительный результат реакции при появлении на месте нанесения фага четко очерченной зоны сливного лизиса оценивают на ++++ при наличии отдельных негативных колоний, отчетливо видимых глазом, в зависимости от их количества реакцию оценивают на +++, ++, +.

При отсутствии лизиса в местах нанесения фага будет сплошной рост культуры, как и в контроле.

О-фаг может быть также использован для предварительного испытания культуры. Для этого подозрительные колонии, выросшие на чашке с дифференциальной средой (Плоскирева, Эндо, висмут-сульфитным агаром и др.), снимают и пересевают на один из секторов чашки Петри со слабо щелочным агаром. В центр каждого засеянного сектора тонкой пастеровской пипеткой или петлей наносят каплю О-фага, чашки помещают в термостат и на следующий день производят учет результатов. На одной чашке одновременно может быть испытано 5 - 6 колоний.

Культура, лизировавшаяся фагом, является подозрительной на салмонеллезную и может быть прямо с чашки испытана в реакции агглютинации со смесью салмонеллезных сывороток. В случае положительного результата реакции агглютинации культуру засевают на скошенный агар и на пестрый ряд для изучения биохимических свойств и антигенной структуры (с помощью салмонеллезных монорецепторных сывороток), без чего не представляется возможным дать окончательный ответ о принадлежности культуры к определенному серологическому типу рода салмонелла. Культуры, не чувствительные к О-бактериофагу, подлежат также дальнейшему изучению (биохимическому и серологическому). Большую помощь О-фаг может оказать при изучении атипичных, трудно диагностируемых культур. Атипичные салмонеллезные культуры в большинстве случаев чувствительны к О-фагу, в то время как культуры, лишь сходные с салмонеллезными по биохимическим свойствам (например, лактозонегативные E. coli), как правило, не лизируются этим фагом.

Салмонеллезный О-бактериофаг в качестве экспериментального препарата готовится в отделе эпидемиологии кишечных инфекций Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии Министерства здравоохранения СССР.

Приложение 2

РЕЦЕПТУРА РЕКОМЕНДУЕМЫХ КОНСЕРВИРУЮЩИХ СМЕСЕЙ, ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ИНДИКАТОРОВ

1. Консерванты

    Глицериновая  смесь. К 1 л  физиологического  раствора  добавляют 0,5 л
химически  чистого  нейтрального глицерина и устанавливают pH среды, равный
8,0, добавляя 20% фосфорнокислого натрия (Na HPO ).
                                            2   4

Стерилизуют при температуре 112° в течение 15 минут. После стерилизации pH должен быть равен 7,6 - 7,8.

Желчный бульон. К 800 мл бульона добавляют 200 мл нативной бычьей желчи; pH готового консерванта равен 7,6.

Стерилизуют текучим паром 2 раза по 30 минут.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: