Временные методические указания по хроматографическому определению ивина в биологическом материале

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6078-91

(Дополнение к "Методическим указаниям по хроматографическому определению ивина в воде и овощах" N 4327-87 от 08.06.87)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Краткую характеристику препарата ивин см. во Временных методических указаниях.

2. Методика определения ивина в биологическом материале

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на извлечении ивина из проб органическим растворителем, кислотной очистке экстрактов, реэкстракции препарата и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Зоны локализации препарата обнаруживаются: водным раствором крахмала после УФ-облучения и обработки пластинок парами иода, альтернативно реактивом Паули после УФ-облучения.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии близких по области применения и структуре следующих соединений: гидрела, дигидрела, хлорхолинхлорида, морфола, морфонола, алара, гибберелина и некоторых производных пиридина-нитрапирина, 6-хлорпиколиновоЙ кислоты, 2-пиколиновой кислоты, 2,6-дипиколиновой кислоты, 2,6-лутидина.

2.1.3. Метрологическая характеристика методики (n = 20, P = 0,95)

--------------+------------------------------------------------------------
¦Анализируемый¦                   Метрологические параметры               ¦
¦   объект    +------------+-----------+---------+-----------+------------+
¦             ¦   предел   ¦ диапазон  ¦среднее  ¦стандартное¦доверитель- ¦
¦             ¦обнаружения,¦ опреде-х  ¦значение ¦отклонение,¦ный интервал¦
¦             ¦ мкг/г (мл) ¦ концен-й, ¦% опреде-¦     %     ¦среднего, % ¦
¦             ¦            ¦мкг/г (мл) ¦ления    ¦           ¦            ¦
+-------------+------------+-----------+---------+-----------+------------+
¦Печень       ¦0,2         ¦0,2 - 2    ¦84,5     ¦+/- 2,4    ¦+/- 5,2     ¦
¦Почки        ¦0,2         ¦0,2 - 2    ¦81,7     ¦+/- 2,2    ¦+/- 4,7     ¦
¦Легкие       ¦0,2         ¦0,2 - 2    ¦83,8     ¦+/- 2,4    ¦+/- 5,0     ¦
¦Мозг         ¦0,2         ¦0,2 - 2    ¦82,1     ¦+/- 1,9    ¦+/- 4,0     ¦
¦Селезенка    ¦0,2         ¦0,2 - 2    ¦85,7     ¦+/- 2,5    ¦+/- 5,3     ¦
¦Сердце       ¦0,2         ¦0,2 - 2    ¦84,7     ¦+/- 2,1    ¦+/- 4,5     ¦
¦Кровь        ¦0,2         ¦0,2 - 2    ¦86,4     ¦+/- 2,2    ¦+/- 4,7     ¦
¦Моча         ¦0,4         ¦0,4 - 2    ¦78,6     ¦+/- 2,1    ¦+/- 4,5     ¦
¦Кал          ¦0,4         ¦0,4 - 2    ¦77,7     ¦+/- 1,5    ¦+/- 3,2     ¦
--------------+------------+-----------+---------+-----------+-------------

2.2. Реактивы и материалы

Ивин, хч. Стандартный раствор в хлороформе, содержащий 100 мкг/мл действующего вещества, хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Натр едкий, хч, ГОСТ 4328-77, 15-процентный водный раствор.

Кали едкий, хч, ГОСТ 4203-65, 10-процентный водный раствор.

Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77, 1М водный раствор.

Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Пластинки хроматографические "Силуфол" UV-254 (ЧССР).

Бензол, хч, ГОСТ 5955-69.

Уксусная кислота лед., ГОСТ 61-75.

Иод кристаллический, чда, ГОСТ 4139-79.

Крахмал, ГОСТ 10163-76, 1-процентный водный раствор.

Сульфаниловая кислота, чда, ГОСТ 5821-78.

Натрий азотистокислый, хч, ГОСТ 4197-74.

Спирт этиловый, хч, ТУ 6-1710-77.

Диэтиловый эфир, ч, ГОСТ 6265-74.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.

Прибор для отгонки растворителей, ТУ 25-11-917-76, тип ИР-1М.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емк. 50, 100 мл.

Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Фильтры бумажные "синяя лента".

Камера с парами иода (10 - 20 г кристаллического иода помещают на дно герметически закрытой камеры).

2.4. Подготовка к определению

Приготовление проявляющего реактива Паули: к раствору 25 г сульфаниловой кислоты в 125 мл 10-процентного раствора кали едкого добавляют (при охлаждении) 100 мл раствора нитрита натрия, 40 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 20 мл воды. Полученную соль промывают последовательно ледяной водой, этанолом, диэтиловым эфиром и высушивают. При хранении в темной склянке в холодильнике соль устойчива несколько месяцев. Для опрыскивания готовят 0,1 г диазониевой соли в 20 мл 15-процентного раствора едкого натра. Раствор готовят перед употреблением.

2.5. Описание определения

2.5.1. Экстракция и очистка

5 г измельченного биологического материала (мозг, печень, почки, легкие, кал, сердце, селезенка) или 5 мл крови, мочи помещают в плоскодонную колбу и экстрагируют хлороформом трижды по 20 мл. Объединенные экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в колбу для выпаривания. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60 °C. К сухому остатку добавляют 10 мл 1М раствора хлористоводородной кислоты, тщательно смывая остаток со стенок колбы. Раствор фильтруют через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Колбу еще дважды ополаскивают по 5 мл 1М раствором хлористоводородной кислоты и сливают в ту же воронку.

Кислотный экстракт нейтрализуют 15% раствором едкого натра и реэкстрагируют ивин хлороформом 3 x 30 мл. Хлороформный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60 °C.

2.5.2. Хроматографирование и проявление

После отгонки растворителя остаток с помощью хлороформа количественно наносят на пластинку "Силуфол" (ЧССР) на расстоянии 1 см от нижнего края пластины. Сначала хроматографирование проводят в бензоле. При этом ивин остается на старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх. Пластинку высушивают на воздухе и проводят вторичное хроматографирование в том же направлении в смеси бензол - уксусная кислота в соотношении 1:1,5. После хроматографирования пластинку высушивают и выдерживают под ртутно-кварцевой лампой в течение 10 - 15 минут.

    Затем  пластинку  или  помещают  в  камеру  с  парами  иода  и
обрабатывают  раствором крахмала, или сразу обрабатывают реактивом
Паули.  Зоны  локализации  ивина обнаруживаются в виде синих пятен
(пары иода - крахмала) или в  виде розовых пятен (реактив Паули) с
величиной R  0,58 +/- 0,02.
           f

2.6. Обработка результатов анализа

Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски проб и стандартных растворов.

Содержание ивина в пробе определяют по следующей формуле:

                               A x S
                                    2
                           X = ------,
                               P x S
                                    1

    где:
    X - содержание ивина в пробе, мг/г (мл);
    A  -  количество  ивина, содержащегося  в  пятне  стандартного
раствора, мкг (в диапазоне линейности);
    S  - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;
     1
    S  - площадь пятна пробы, кв. мм;
     2
    P - количество анализируемой пробы, г (мл).

3. Требования техники безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР (N 2455-81 от 20.10.81).

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: