Временные методические указания по измерению концентраций диметоморфа (акробата) в воздухе рабочей зоны методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6192-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Диметоморф (акробат) - экспериментальный фунгицид, предназначенный для борьбы с фитофторой.

    CH O       OCH
      3 \ --- /   3
        //   \\
        \ ___ /     O     ---                         C  H  ClNO .
          --- \     \\  /     \                        21 22    4
               \C=CH-C-N       O
               /        \     /                       М.м. 287,9.
          --- /           ---
        //   \\
        \ ___ /
        / ---
       Cl

    Химическое      название       -       (E,Z)-3/3-(4-хлорофенил)-3-(3,4-
диметоксифенил)акрилоил/морфолин.
    Бесцветное   твердое  кристаллическое  вещество,  без  запаха,  реакции
изомеризации  происходят  в  различных  растворителях  под  влиянием света.
Температура плавления 127 - 148 °C. Легко растворим в ацетоне, ацетонитриле
и  метаноле, плохо растворим в гексане - 0,122 г/л  и  воде  -  0,050  г/л.
Препарат малотоксичен. ЛД   для мышей  -  3700  мг/кг,  а  для  крыс - 3900
                         50
мг/кг, не оказывает кожно-раздражающего действия.

2. Характеристика метода

Метод основан на использовании газожидкостной хроматографии с применением детектора по захвату электронов (ДЭЗ) или тонкослойной хроматографии.

Отбор проб производится с концентрированием на бумажном фильтре "синяя лента".

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме - 0,5 нг (ГЖХ), 1 мкг (ТСХ).

Нижний предел измерения в воздухе - 0,001 мг/куб. м (ГЖХ), 0,05 мг/куб. м (ТСХ) при отборе 150 л воздуха.

Диапазон измеряемых концентраций: 0,001 - 0,04 (ГЖХ), 0,05 - 0,25 (ТСХ).

Измерению не мешают другие фунгициды.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20,0% (ГЖХ) и +/- 25% (ТСХ).

3. Реактивы, растворы и материалы

Диметоморф, 95,6-процентный препарат.

Стандартный раствор диметоморфа с концентрацией 100 мг/мл готовят растворением 10,5 мг препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.

Рабочие растворы диметоморфа концентрации 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие растворы диметоморфа в холодильнике. Годен к употреблению в течение 1 - 3 дней.

Натрия сульфат безводный хч, ГОСТ 4166-76.

Ацетон ч, ГОСТ 2603-79.

Гексан ч, ТУ 6-06-3375-78.

Азот газообразный, ГОСТ 9283-74, в баллоне с редуктором.

Аммиак 25-процентный, ГОСТ 3760-74.

Бромфеноловый синий чда, ТУ 6-99-3719-83.

Кислота лимонная хч, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.

Кислота уксусная хч, ГОСТ 18290-75, 5-процентный водный раствор.

Серебро азотнокислое чда, ГОСТ 1277-81.

Проявляющий реагент 1:

смесь растворов бромфенолового синего (БФС) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5% водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней.

Проявляющий реагент 2:

    растворяют  0,5  г AgNO  в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 5 - 7
                           3
мл аммиака и доводят ацетоном до 100 мл. Хранят в темном месте.

Фильтры бумажные обеззоленные "синяя лента", диаметр 5 - 6 см, ТУ 6-09-1678-77.

Хромосорб 750 с 3% OV-17.

4. Приборы и посуда

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов.

Весы аналитические ВЛА-200М.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Холодильник бытовой.

Шкаф электрический сушильный, ТУ 64-1-1411-72.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 50 - 100 мл (для отгонки растворителя).

Холодильник, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.

Воронки лабораторные, диаметр 5 - 6 см, ГОСТ 25336-82.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1; 5; 10 мл.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Скальпель.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Камера для опрыскивания пластинок, ТУ 25-11-430-70.

Колба с тубусом, ГОСТ 25336-82.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-80.

Секундомер, ГОСТ 5072-79.

Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862-77.

Фильтродержатель.

УФ-лампа типа ПРК-4 или аналогичная.

5. Отбор пробы воздуха

Воздух со скоростью 5 л/мин. аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", закрепленный в фильтродержателе. Продолжительность отбора пробы - 30 мин. Длительность хранения проб в стеклянной таре в затемненном от света месте не более 5 суток.

6. Подготовка к измерению

Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетон - 25% аммиак в соотношении 7:3 (об./об.), глубина погружения пластинки в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению.

7. Проведение измерения

Бумажный фильтр, содержащий диметоморф (акробат), из фильтродержателя переносят в делительную воронку и заливают 15 - 20 мл ацетона. Экстрагируют пестицид из фильтра в течение 10 - 15 мин., периодически перемешивая содержимое емкости. Экстракцию повторяют дважды свежими порциями ацетона, экстракты объединяют, отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре бани не выше 55 °C. К сухому остатку пипеткой добавляют 1,5 мл ацетона.

8. Метод ТСХ

0,2 мл полученного раствора наносят микропипеткой на очищенную пластинку "Силуфол". Рядом с пробой наносят по 0,2 мл каждого рабочего раствора диметоморфа, что соответствует содержанию в пятне 0,5; 1,0; 2,0 мкг препарата.

    Пластинку помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15 мин. до
хроматографирования  наливают  смесь растворителей  гексан - ацетон (1:1) в
таком   количестве,  чтобы  глубина  погружения  пластинки  в  растворители
составляла  0,5  см. После  подъема фронта растворителей от линии старта на
высоту  10  см  хроматографирование  прекращают.  Пластинку  выдерживают  в
вытяжном   шкафу   до  испарения  растворителей  и  обрабатывают  одним  из
проявляющих  реагентов.  При  обработке  азотнокислым серебром (проявляющий
реагент  2) пластинку орошают до влажного состояния, выдерживают в вытяжном
шкафу   15  -  20  мин.  (до  исчезновения  запаха  аммиака)  и  подвергают
УФ-облучению в течение 10 - 15 мин. (нефильтрованные УФ-лучи, лампа ПРК-4).
Пластинку  помещают  на расстоянии  20  см  от источника света. При наличии
диметоморфа  на  хроматограмме  проявляются пятна серо-черного цвета. После
обработки   пластинки   бромфеноловым  реагентом  (проявляющий  реагент  2)
пластинку  опрыскивают раствором лимонной (или уксусной) кислоты. О наличии
диметоморфа в пробе свидетельствует появление в этом случае синего пятна на
желтом фоне. Величина R  = 0,5 +/- 0,2.
                       f

9. Метод ГЖХ

Детектор постоянной скорости рекомбинации.

Колонка стеклянная - 1000 x 3 мм.

Твердый носитель - Хромосорб-750.

Жидкая фаза - 3% OV-17.

    Температура термостата колонки - 185 °C,
                           детектора - 250 °C,
                           испарителя - 200 °C.

Газ-носитель - азот особой чистоты.

Скорость движения диаграммной ленты - 60 мм/мин.

Скорость потока азота через колонку - 60 мл/мин.

Скорость потока через детектор - 150 мл/мин.

                                        -12
    Рабочая шкала электрометра - 20 x 10   .

Время удерживания - 7 мин. 30 сек.

Объем вводимой пробы - 3 - 5 мкл.

Линейность детектирования 0,5 - 20,0 мкг.

10. Расчет концентрации

Концентрацию диметоморфа в мг/куб. м в воздухе вычисляют по формуле:

Тонкослойная хроматография:

                                    G x V
                              X = ---------,
                                  0,2 x V
                                         20

    где:
    G  - количество диметоморфа в пятне пробы, найденное путем сравнения со
стандартами, мкг;
    V - окончательный объем экстракта пробы, мл;
    0,2 - объем экстракта пробы, нанесенный на пластинку, мл;
    V    -  объем  пробы  воздуха,  отобранный  для анализа и приведенный к
     20
нормальным условиям, л.
    Газожидкостное хроматографирование:

                             C   x S   x V  x V
                              ст    пр    1    ст
                         X = --------------------,
                                S   x V   x V
                                 ст    пр    20

    где:
    S   - площадь пика анализируемой пробы, кв. мм;
     пр
    S   - площадь пика стандарта, кв. мм;
     ст
    C - содержание диметоморфа в стандарте, мкг/мл;
    V   - объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;
     ст
    V   - объем хроматографируемой пробы, введенной в хроматограф, мкл;
     пр
    V  - общий объем пробы, мл;
     1
    V   - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным
     20
условиям, л.

11. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделах, отделениях) санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: