Методические указания по определению байфидана в зерновых и лекарственных культурах, в воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6131-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Байфидан (триадименол) - 1-4-(хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1-H-1,2,4-триазол-1-ил)бутанол-2.

                      OH
        _____         ¦
    Cl_//   \\_O__CH__CH__C(CH )                     C  H  ClN O .
       \ ___ /     ¦          3 3                     14 18   3 2
         ---       N
                  /\                                 М.м. 295,8.
                 /  \N
                ¦¦__¦¦
                 N

    Химически   чистый   байфидан   -  бесцветный  кристаллический
порошок, устойчив в кислых, нейтральных и щелочных средах.
    ЛД   для крыс 700 - 1200 мг/кг.
      50

Байфидан - высокоэффективный фунгицид с системными свойствами из группы действующих веществ, относящихся к азоловым соединениям. Продукт отличается очень хорошим действием против настоящих мучнисто-росяных грибов и против различных ржавчинных болезней. Наряду с хорошим защитным действием байфидан обладает также лечебным и искореняющим действием. Байфидан применяется при воздействии зерновых культур, в овощеводстве, виноградарстве, при выращивании огурцов и дынь, а также в декоративном цветоводстве. Норма расхода - 125 г д.в. на га, то есть 0,5 л препарата на га.

Байфидан выпускается в виде эмульгирующего концентрата с 250 г триадеменола на 1 л (250 к.э.).

2. Методика определения байфидана

2.1. Основные положения

Метод основан на извлечении байфидана из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта на колонке окиси алюминия с последующим определением методами газожидкостной хроматографии с термоионным (ТИД) детектором и тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол".

2.1.2. Метрологическая характеристика метода (см. табл. 1)

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАЙФИДАНА

---------+--------+-------+-------+-----------+--------+--------+--------------
¦Препарат¦ Объект ¦Мини-  ¦Нижний ¦Размах     ¦Среднее ¦Стан-   ¦Доверительный¦
¦        ¦        ¦мальное¦предел ¦варьирова- ¦значение¦дартное ¦  интервал   ¦
¦        ¦        ¦детек- ¦опреде-¦ния, %     ¦опреде- ¦отклоне-¦  среднего   ¦
¦        ¦        ¦тируе- ¦ления, ¦           ¦ления,  ¦ние,    ¦ при n = 5,  ¦
¦        ¦        ¦мое    ¦мг/л,  ¦           ¦%       ¦%       ¦   P = 0,95  ¦
¦        ¦        ¦количе-¦мг/кг  ¦           ¦        ¦        ¦             ¦
¦        ¦        ¦ство,  ¦       ¦           ¦        ¦        ¦             ¦
¦        ¦        ¦мкг    ¦       ¦           ¦        ¦        ¦             ¦
+--------+--------+-------+-------+-----------+--------+--------+-------------+
¦Байфидан¦зерно   ¦       ¦0,020  ¦70,0 - 90,0¦83,3    ¦+/- 2,67¦83,5 +/- 5,6 ¦
¦        ¦почва   ¦0,004  ¦0,012  ¦72,0 - 95,0¦90,8    ¦+/- 2,84¦90,8 +/- 6,8 ¦
¦        ¦вода    ¦       ¦0,007  ¦95,0 - 100 ¦98,3    ¦+/- 3,99¦98,3 +/- 7,7 ¦
¦ТСХ     ¦лекарст-¦1,0    ¦0,1    ¦70 - 88    ¦78,9    ¦+/- 4,77¦+/- 5,99     ¦
¦        ¦венные  ¦       ¦       ¦           ¦        ¦        ¦             ¦
¦        ¦культуры¦       ¦       ¦           ¦        ¦        ¦             ¦
---------+--------+-------+-------+-----------+--------+--------+--------------

2.1.3. Избирательность метода

Другие препараты по сфере применения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-76.

Хлористый кальций, ГОСТ 4161-77.

Хлороформ медицинский, фармакопея, ГОСТ 20015-74.

Спирт этиловый, ГОСТ 5962-67.

Окись алюминия II ст. активности, ГОСТ 8136-85.

Натрий сернокислый, безводный, хч, ГОСТ 4166-77.

Лимонная кислота, чда, ГОСТ 908-79.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород из баллона, ГОСТ 3022-80, или получаемый из генератора водорода.

Воздух из баллона, ГОСТ 9-01-80, или нагнетаемый компрессором.

3% OV-17 на газохроме (0,16 - 0,20 мм).

5% E-301 на хроматоне N-AW-DMCS.

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77.

Азотнокислое серебро, ГОСТ 1277-75.

Стандартный раствор байфидана в спирте или ацетоне 1 мг/мл (I), из него готовится серия растворов с концентрацией 25 мкг/мл (II), 10 мкг/мг (III).

Проявляющие реактивы:

1. 0,4% ацетоновый раствор бромфенолового синего с 2% водным раствором азотнокислого серебра в равных объемах.

2. 2% водный раствор лимонной кислоты.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300 мл.

Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 или 0,2 мл.

Воронки конические, ГОСТ 25336-82.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емк. 50 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74.

Микрошприц МШ N 10, ТУ 2-833-024.

Делительные воронки, ГОСТ 25336-82.

Хроматограф "Цвет-106", "Цвет-500" или аналогичный с ТИД.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб" N 2051-79 от 21.08.79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Вода. 200 мл воды в делительной воронке экстрагируют дважды по 100 - 200 мл этилацетата в течение 3 - 5 минут. Осушенный и объединенный экстракт концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, аликвоту вводят в хроматограф.

Почва, зерно. 100 г почвы или 10 - 20 г измельченного зерна экстрагируют 100 - 200 мл этилацетата на встряхивателе в течение 1 часа. Затем экстракцию повторяют, встряхивая анализируемую пробу в течение 30 минут со 100 мл этилацетата. Осушенный и объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе до объема 2 - 3 мл и проводят очистку.

Лекарственное сырье. Измельченную навеску лекарственного сырья (30 г сырого и 5 г сухого) заливают ацетоном (100 и 30 мл). Остаток промывают на фильтре дважды ацетоном. Ацетон отгоняют до 5 - 10 мл.

2.5.2. Очистка экстракта

Почва, зерно. Сконцентрированный экстракт переносят в бюкс, заполненный 5 - 10 г окиси алюминия. Колбу дважды смывают этилацетатом по 1 мл и также переносят в бюкс. Затем ставят бюкс на песочную баню (60 °C) и выдерживают до полного улетучивания этилацетата. Стеклянной палочкой тщательно перемешивают сорбент в бюксе и переносят в делительную воронку, в узкий конец которой помещают тампон из гигроскопической ваты. Для элюирования байфидана через колонку пропускают 400 мл воды. Скорость вытекания 120 кап./мин. Водный раствор экстрагируют хлороформом (3 раза по 50 мл), встряхивая каждый раз в течение 2 мин. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр и безводный сернокислый натрий в грушевидную колбу и выпаривают на ротационном испарителе до 0,2 мл, а затем остаток высушивают током воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона.

    Лекарственное  сырье.  К  ацетоновому экстракту добавляют 5 мл
0,05 н и  CaCl   и  ставят  в  морозильную  камеру на 1 час. Затем
              2
экстракт  фильтруют  через  фильтр  "синяя лента", добавляют 25 мл
воды  и  экстрагируют  байфидан  этилацетатом  (3  раза по 25 мл).
Объединенный   этилацетатный  экстракт  упаривают  на  ротационном
испарителе  до объема 5 мл. Далее поступают, как при очистке почвы
и зерна. Остаток растворяют в 0,5 мл ацетона или спирта.
    2.5.3. Условия газожидкостной хроматографии
    Определение  проводят  на  хроматографе  "Цвет"  с термоионным
детектором. Используют стеклянную  колонку длиной 1 м, диаметром 3
мм, носитель - газохром  (0,16  - 0,20 мм с 3% OV-17), температура
колонки - 230 °C, испарителя - 290 °C. Время удерживания  - 1 мин.
30 сек. Линейность детектирования сохраняется в пределах 1 - 6 нг.
                        -10
Рабочая  шкала  2  x  10   .  Для  колонки  с 5% E-301 температура
испарителя 230 °C, температура колонки 210 °C, рабочая шкала ИМТ -
        -10
2  x  10   .  Время удерживания - 1 мин. 15 сек. Для обеих колонок
расход  азота  75  мл/мин.,  воздуха  - 150 мл/мин., водорода - 27
мл/мин. Скорость движения ленты самописца - 600 мм/час.

2.5.4. Условия хроматографирования в тонком слое

Определение байфидана проводят методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол". С помощью микропипетки наносят на пластинку 0,1 мл экстракта. На расстоянии 2 - 3 см наносят 3 - 4 пятна стандартного раствора байфидана (1 мкг, 3 мкг, 5 мкг, 10 мкг). Пластинку хроматографируют в системе гексан:ацетон (3:2).

    После  того   как  фронт  растворителя  поднимается  на 10 см,
пластинку  вынимают  из  камеры,  сушат  на  воздухе и опрыскивают
последовательно проявляющими реактивами 1 и 2. При наличии в пробе
байфидана появляется синее пятно. R  препарата - 0,72.
                                   f

2.6. Обработка результатов анализа

Газожидкостное определение

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пика.

Для количественного определения измеряют высоту пиков проб и стандартных растворов. Содержание в пробе рассчитывают по формуле:

                           M   x H   x V
                            ст    пр    k
                       X = --------------,
                            H   x V  x M
                             ст    x

    где:
    X - содержание в пробе, мг/кг или мг/л;
    M   - содержание в стандартном растворе, нг;
     ст
    H   - высота пика стандартного раствора, мм;
     ст
    H   - высота пика пробы, мм;
     пр
    V  - объем конечного экстракта, мл;
     k
    V  - объем экстракта пробы, введенного в испаритель, мкл;
     x
    M - навеска или объем пробы в г или мл.

Тонкослойная хроматография

Количественное определение содержания байфидана в пробах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартных растворов.

Содержание препарата в пробе рассчитывается по формуле:

                               A x V
                                    1
                           X = ------,
                               V  x P
                                2

    где:
    X - содержание байфидана в пробе, мг/кг;
    A   -   количество   препарата,  найденное  путем  визуального
сравнения со стандартным раствором, в мкг;
    V  - объем пробы перед нанесением на пластинку в мл;
     1
    V  - объем раствора, нанесенного на пластинку, в мл;
     2
    P - навеска в г.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: