Методические указания по определению эллипса в почве, зерне зерновых культур методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6273-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Действующее вещество - N-(O-хлорфенилсульфонил)-N'-(4-диметиламино-6-(а-метил)пропилидениминоокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевина.

           Cl                   N(CH )
     _____/             N_____/     3 2               C  H  N O S.
    //   \\_SO -NH-C-NH_//   \\N                       16 20 7 4
    \ ___ /   2    ¦¦   \ ___ /      CH
      ---          O    N --- \     /  3              М.м. 441,5.
                               O-N=C
                                    \
                                     C H
                                      2 5

Синонимы: эллипс, хлорсульфоксилеметил.

Химически чистое вещество без запаха. Т. пл. = 173 °C. Препарат плохо растворим в воде, растворим в спирте, ацетоне.

Применяется в качестве регулятора роста растений и гербицида на зерновых культурах.

ПДК в воде - 0,005 мг/л, МДУ в пищевых продуктах не допускается (в зерне хлебных злаков), ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,25 мг/куб. м.

2. Методика определения эллипса в почве, в зерне зерновых культур методом тонкослойной и газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на определении эллипса в почве, зерне зерновых культур способом тонкослойной и газожидкостной хроматографии после экстракции препарата из проб и очистки экстракта.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество эллипса - 0,2 - 0,5 мкг.

Диапазон определяемых концентраций:

почва: ГЖХ - 0,004 - 0,04, ТСХ - 0,01 - 0,1;

зерно зерновых культур: ГЖХ - 0,005 - 0,05, ТСХ - 0,01 - 0,1.

Среднее значение определения 90,0 - 95,0%.

Суммарная погрешность определения - +/- 16 - 20%.

2.2. Реактивы и материалы

Эллипс (ВНИИХСЗР), 97-процентный препарат.

Натрия сульфат, хч, ГОСТ 4328-77.

Азот газообразный, ГОСТ 9283-74, в баллоне с редуктором.

Ацетон, ч, ГОСТ 2603-79.

Хлороформ, ч, ГОСТ 20015-74.

Кислота хлористоводородная, хч, ГОСТ 3118-78, 1 н водный раствор (1:1).

Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ 6-09-1900-77.

Хромосорб-750, 3% OV-17.

Эфирный раствор диазометана.

О-толидин, 0,5-процентный раствор в ацетоне.

Азотнокислое серебро, чда, ГОСТ 1277-81.

Аммиак водный, чда, ГОСТ 3760-79.

Метанол, хч, ТУ 6-09-1709-77.

Калия гидрат окиси, ГОСТ 9285-78.

Гидразин-гидрат, хч, ГОСТ 5832-65.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.

Серебро азотнокислое, ГОСТ 1277-81.

О-толидин, ТУ 6-09-2232-75.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Кислота уксусная, хч, ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.

Кислота лимонная, хч, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-3719-83.

Кальций хлористый, хч, ГОСТ 4460-77.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Пластинки "Силуфол" (Kavalier, ЧССР).

Диэтиловый эфир, хч, ГОСТ 6262-79.

Вата гигроскопическая.

2.3. Приборы, посуда

Лампа ртутно-кварцевая ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.

Весы аналитические ВЛА-200М.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10396-75.

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 50 - 100 мл.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические плоскодонные, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, диаметр 5 - 6 см, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл, 1 л.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1, 5, 10 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2 мл.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Скальпель.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Колба КГУ-2-1-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82.

Колба ОГ-2-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82.

Камера.

Холодильник ХШ-1-200-14/23 ХС, ГОСТ 25336-82.

Воронка ВК-50 ХС, ГОСТ 25336-82 (с байпасом).

Трубка ТХ 45°-14/23, ГОСТ 25336-82.

Капилляр 14/23.

Шланг резиновый.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Стакан полиэтиленовый.

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Отбор и подготовка проб

Отбор проб проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21.08.79 N 2051-79.

2.4.2. Приготовление стандартного, рабочих растворов эллипса

Стандартный раствор эллипса с концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата (10,3 г) в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.

Рабочие растворы эллипса с концентрацией 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие растворы эллипса в холодильнике. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней.

2.4.3. Проявляющий реактив - бромфеноловый реагент

Смесь растворов бромфенолового синего (БМФ) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5% водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней.

После обработки хроматограмм бромфеноловым синим реагентом осветляют фон обработкой пластин 2-процентным водным раствором лимонной кислоты или 5-процентным водным раствором уксусной кислоты.

2.4.4. Проявляющий реактив - раствор о-толидина в ацетоне

Готовят 0,5% раствор о-толидина в ацетоне. После опрыскивания пластинки следует облучать УФ-светом.

2.4.5. Получение диазометана

В круглодонную двугорлую колбу вместимостью 100 мл, снабженную капельной воронкой с байпасом и обратным холодильником, помещают 12 г (0,2 моля) гидрата окиси калия, 6 мл или 6,1 г (0,12 моля) гидразингидрата и 6 мл или 5,3 г (0,17 моля) метанола. Затем, охлаждая колбу до +5 °C смесью воды со льдом, начинают медленно прибавлять из капельной воронки 10 мл или 14,9 г (0,12 моля) хлороформа, постепенно увеличивая скорость, при этом реакционная масса приобретает желтую окраску.

Выделяющийся в ходе реакции диазометан через обратный холодильник, соединенный с капилляром резиновым шлангом, поступает в двугорлую грушевидную колбу вместимостью 100 мл и растворяется в 50 мл осушенного диэтилового эфира. Предварительно эту колбу, заполненную диэтиловым эфиром, укрепляют в полиэтиленовом стакане с водой и помещают в морозильную камеру холодильника (Т. = -12 - 18 °C) на 6 - 8 часов.

По окончании прибавления хлороформа реакционную колбу нагревают до +40 °C на водяной бане для полного удаления диазометана из реакционной массы. Когда реакционная масса и поверхность холодильника обесцветятся, реакцию считают завершенной. Выход диазометана 25% от теоретического.

2.4.6. Подготовка пластин "Силуфол"

Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3 (об./об.). Глубина погружения в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят подготовленные пластинки в эксикаторе.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка

Зерно (30 - 50 г) предварительно измельчают на электрической мельнице. Почву (50 - 100 г) просеивают через сито. Помещают в коническую колбу, прибавляют ацетон или спирт и настаивают в течение 1 часа. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток зерна (почвы) в колбе встряхивают дважды с 50 мл растворителя в течение 10 - 15 мин. В объединенные экстракты приливают 100 мл 1 н HCl, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды хлороформом по 20 - 25 мл. Хлороформный экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха.

2.6.2. Хроматографирование

Метод тонкослойной хроматографии

    Сухой  остаток  в  колбе  растворяют в 1 мл ацетона, закрывают
колбу   герметично  пробкой,  перемешивают  содержимое  и  0,2  мл
полученного   раствора  наносят  микропипеткой  на  подготовленную
пластинку  "Силуфол".  Рядом  с  пробой  наносят по 0,2 мл каждого
рабочего  раствора  эллипса,  что соответствует содержанию в пятне
0,5;   1,0;   2,0;   4,0   мкг  препарата.  Пластинку  помещают  в
хроматографическую   камеру,   куда   за   10   -   15   мин.   до
хроматографирования наливают подвижный растворитель: бензол:ацетон
(4:1)  -  1 или гексан:ацетон (1:1) - 2  в таком количестве, чтобы
глубина  погружения  пластинки  в  растворитель  составила 0,5 см.
После  подъема фронта растворителя от линии старта на высоту 10 см
хроматографирование  прекращают.  Пластинку выдерживают в вытяжном
шкафу  до  испарения  растворителей  и  обрабатывают бромфеноловым
реагентом,  затем  раствором  лимонной  (или  уксусной) кислоты. О
наличии    эллипса   в   пробе   свидетельствует   проявление   на
хроматограмме   серо-синего   пятна  препарата.  Или  обрабатывают
пластинку   раствором  о-толидина.  Сразу  же  после  опрыскивания
пластинку   облучают   УФ-светом.   О   наличии  эллипса  в  пробе
свидельствует  проявление на хроматограмме синего пятна препарата.
Величины  R   эллипса равны при использовании подвижной  фазы  (1)
           f
0,43, при использовании подвижной фазы (2) - 0,63.
    Метод прямого газохроматографического определения
    3  -  5 мкл ацетонового экстракта вводят в испаритель газового
хроматографа   "Цвет-106"   с   детектором   постоянной   скорости
рекомбинации (ДПР).
    Проводят хроматографирование при следующих условиях:
    Колонка стеклянная   - 1000 x 3 мм.
    Твердый носитель     - Хромосорб-750.
    Жидкая фаза          - 5% OV-17.
    Температура термостата колонки - 185 °C;
                           детектора - 250 °C;
                           испарителя - 200 °С.
    Газ-носитель         - азот особой чистоты.
    Скорость движения диаграммной ленты - 240 мм/час.
    Скорость потока азота через колонку - 60 мл/мин.
    Скорость потока азота через детектор - 150 мл/мин.
                                        -12
    Рабочая шкала электрометра - 20 x 10   .
    Время удерживания эллипса - 7 мин. 30 сек.

Метод газохроматографического определения с использованием диазометана

К сухому остатку в грушевидной колбочке приливают 5 мл эфирного раствора диазометана и выдерживают 30 минут. Затем эфир отгоняют на ротационном испарителе досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и 1 - 5 мкл вводят в испаритель газового хроматографа. Проводят хроматографирование при следующих условиях:

    Колонка стеклянная   - 1000 x 3 мм.
    Твердый носитель     - Хромосорб-750.
    Жидкая фаза          - 5% OV-17.
    Температура термостата колонки - 175 °C;
                           детектора - 200 °C;
                           испарителя - 200 °C.
    Газ-носитель         - азот особой чистоты.
    Скорость движения диаграммной ленты - 240 мм/час.
    Скорость потока азота через колонку - 60 мл/час.
    Скорость потока азота через детектор - 150 мл/мин.
                                        -12
    Рабочая шкала электрометра - 20 x 10   .
    Время удерживания эллипса - 5 мин. 40 сек.

2.7. Обработка результатов анализа. Газохроматографический метод

Для количественного анализа измеряют площади пиков проб и стандартных растворов. Содержание эллипса в зерне пшеницы рассчитывают по формуле:

                          S   x G x V x V
                           пр            ст
                      X = -----------------,
                            S   x V  x P
                             ст    a

    где:
    X - содержание препарата "эллипс" в зерне, мг/кг;
    G - содержание эллипса в стандартном растворе, нг;
    S   - площадь пика анализируемой пробы, кв. мм;
     пр
    V - общий объем пробы, мл;
    S   - площадь пика стандартного раствора, кв. мм;
     ст
    V  - объем хроматографируемой пробы, мкл;
     a
    P - навеска пробы, г.
    Тонкослойная хроматография
    Количественная  оценка  проводится  путей сравнения площадей и
интенсивности окраски пятен пробы и рабочих растворов.
    Содержание  эллипса  в  анализируемой  пробе  рассчитывают  по
следующей формуле:

                               A x V
                           X = ------,
                               V  x P
                                1

    где:
    X - содержание эллипса в исследуемой пробе, мг/кг;
    A   -   количество   эллипса,  найденное  путем  сравнения  со
стандартами, мкг;
    V - конечный объем пробы, мл;
    V   -  объем аликвоты, отобранной для хроматографирования, мл.
     1
При нанесении всей пробы V  = V.
                          1
    P - навеска исследуемой пробы, г.

3. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях. При работе с ядовитыми и взрывчатыми веществами реакции следует проводить только в вытяжном шкафу, строго соблюдая правила производственной санитарии и личной гигиены.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: