Методические указания по определению феноксапроп-этила (фуроре-супер) в воде, почве, зеленой массе пшеницы хроматографическими методами

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6172-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Фуроре-супер - пума-супер. Хое 046360.

Химическое название: (D+)-этил-(4-(6-хлор-2-бензоксазолилокси)фенокси)-пропионат.

            N                    CH
      // \ /\\          ---      ¦ 3
     ¦   ¦¦  \\---O---//   \\--O-CH-C-OC H            C  H  ClNO .
     ¦   ¦¦  //       \ ___ /       \\  2 5            18 16    5
     /\\ / \//          ---          O
    Cl     O                                          М.м. 361,8.

    Бесцветное  кристаллическое  вещество,  температура  плавления
84,5  °C,  растворимость  в  воде  0,7  мг/л, растворим в этаноле,
н-гексане,  циклогексане,  легко  растворим  в  ацетоне,  толуоле,
                                                 -9
этилацетате.  Давление  паров  при 20 °C 5,3 x 10   гПа; летучесть
                  -5
при 20 °C 7,8 x 10   мг/куб. м.
    Основной     метаболит     фуроре    -    (D+)-2-(4-(6-хлор-2-
бензоксазолилокси)фенокси)-пропионовая кислота (Хое 088406).

            N                      CH
      // \ /\\          ---        ¦ 3
     ¦   ¦¦  \\---O---//   \\---O--CH-C-OH            C  H  ClN.
     ¦   ¦¦   /       \ ___ /         \\               16 12
     /\\ / \ /          ---            O
    Cl      O                                         М.м. 333,7.

    Продукт  гидролиза фуроре - 6-хлор-2,3-дигидробензоксазол-2-он
(Хое 054014).

            H
            ¦                                         C H ClNO .
            N                                          7 4    2
      // \ /\\
     ¦   ¦¦  \\C=O                                    М.м. 169,6.
     ¦   ¦¦   /
     /\\ / \ /
    Cl      O

    Хроматографируемое  ГЖХ  производное фуроре - 3-ацетил-6-хлор-
2,3-дигидробензоксазол-2-он (Хое 083312).

        H C-C=O
         3  ¦                                         C H ClNO .
            N                                          9 6    3
      // \ /\\
     ¦   ¦¦  \\C=O                                    М.м. 211,6.
     ¦   ¦¦   /
     /\\ / \ /
    Cl      O

2. Методика определения фуроре-супер в окружающей среде

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Определение основано на извлечении препарата органическими растворителями, очистке экстрактов активированным углем и последующем анализе методом реакционной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) на неподвижной фазе XE-60 с детектором по захвату электронов (ДЭЗ или ДПР) или хроматографировании в тонком слое (ТСХ) пластинок "Силуфол" с обнаружением препарата по реакции с 2,6-дибром-N-хлорхинонимином или бромфеноловым синим.

2.1.2. Метрологическая характеристика

Метрологическая характеристика определения фуроре приведена в таблице 2.1.

Таблица 2.1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУРОРЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ И РЕАКЦИОННОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ (P = 0,95, N = 5 - 7)

--------------+-----T------------+------------+-------------+--------------
¦ Исследуемый ¦Метод¦   Предел   ¦  Среднее   ¦  Стандарт.  ¦Доверительный¦
¦   объект    ¦     ¦обнаружения,¦  значение  ¦отклонение, %¦ интервал, % ¦
¦             ¦     ¦мг/л, мг/кг ¦определения,¦             ¦             ¦
¦             ¦     ¦            ¦     %      ¦             ¦             ¦
+-------------+-----+------------+------------+-------------+-------------+
¦Вода         ¦ТСХ  ¦0,0005      ¦90          ¦9,3          ¦14,9         ¦
¦-"-          ¦ГЖХ  ¦0,0025      ¦72          ¦5,4          ¦5,7          ¦
¦Почва        ¦ТСХ  ¦0,05        ¦84          ¦12,6         ¦17,3         ¦
¦-"-          ¦ГЖХ  ¦0,05        ¦75          ¦8,1          ¦13,0         ¦
¦Зеленая масса¦     ¦            ¦            ¦             ¦             ¦
¦растений     ¦ТСХ  ¦0,1         ¦91          ¦17,1         ¦21,4         ¦
¦Пшеница      ¦ТСХ  ¦0,2         ¦84          ¦12,7         ¦8,5          ¦
--------------+-----+------------+------------+-------------+--------------

2.1.3. Избирательность метода

Рекомендуемые в методике условия очистки экстрактов, применение метода ТСХ с избирательным проявляющим реагентом 2,6-дибром-N-хлорхинонимином или метода реакционной ГЖХ дают возможность идентифицировать исследуемое соединение в присутствии хлор-, фосфорсодержащих пестицидов, триазинов, производных фенилмочевины, синтетических пиретроидов.

2.2. Реактивы и растворы

Общие для ТСХ и ГЖХ

Ацетон, чда, ТУ 6-09-3313-86.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Хлороводородная кислота, хч, ГОСТ 3118-77, концентрированная.

Активированный уголь марки ОУ-"А".

Вода дистиллированная.

Натрия сульфат безводный, хч, ГОСТ 4166-81.

Фильтры бумажные беззольные "красная лента", ТУ 6-09-1678-77.

Фильтры бумажные беззольные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.

Фуроре-супер (98%).

Основной стандартный раствор фуроре-супер (ОСР): 10 мг фуроре-супер растворяют в 100 мл ацетона (100 мкг/мл). Хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.

К методу ГЖХ

Неподвижная фаза 3% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS.

Азот газообразный, ГОСТ 9293-74, в баллоне с редуктором.

Трифторуксусный ангидрид, ТУ 6-09-4135-75.

Пиридин, ч, ГОСТ 13647-78.

Рабочие стандартные растворы фуроре-супер 10, 5, 2 мкг/мл готовят разведением ОСР ацетоном. Хранить в холодильнике не более 2-х недель.

Хроматографируемое производное фуроре (Хое 083312), хч.

Основной стандартный раствор Хое 083312 100 мкг/мл в ацетоне.

Рабочие стандартные растворы Хое 083312 2, 1, 0,5 мкг/мл готовят разведением ОСР раствора Хое 083312 ацетоном. (При отсутствии Хое 083312 стандарт хроматографируемого производного фуроре готовят одновременно с анализируемым образцом, гидролизуя и ацилируя рабочие стандартные растворы фуроре.)

К методу ТСХ

Стандартные пластинки "Силуфол" (Хемапол, Чехословакия) или отечественные пластинки "Армсорб".

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-3719-83.

Серебро азотнокислое, ГОСТ 1277-81.

Кислота лимонная, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор (или уксусная ледяная кислота, хч, ГОСТ 18270-72, 10-процентный водный раствор).

2,6-дибром-N-хлорхинонимин, хч, ТУ 6-09-06-951-79.

Едкое кали, ч, ГОСТ 9285-78.

Проявляющие реагенты:

1. Реагент на основе бромфенолового синего (БФС): в 10 мл ацетона растворяют 0,05 г БФС и доводят до 100 мл 1-процентным раствором нитрата серебра в водном ацетоне (ацетон - вода 3:1). Хранят в темной склянке.

Через 5 мин. после опрыскивания хроматограмму обрабатывают 2-процентным раствором лимонной или 10-процентным раствором уксусной кислоты.

2. Реагент на основе 2,6-дибром-N-хлорхинонимина: пластинку после хроматографирования нагревают в течение 10 мин. при 150 °C, a затем опрыскивают свежеприготовленным 0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в н-гексане и сразу же обрабатывают 0,5-процентным водным раствором едкого кали.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Общие для ТСХ и ГЖХ

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Баня водяная электрическая, ТУ 64-1-2850-76.

Весы аналитические лабораторные, ГОСТ 19491-74.

Весы технические ВЛКТ-500 г М.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Колбы грушевидные на шлифах емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы плоскодонные конические емкостью 50, 100, 250 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы мерные емкостью 100, 250 мл, ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Воронки делительные емкостью 250, 500 мл, ГОСТ 8613-81.

Воронки химические, 0,60 мм, ГОСТ 8613-81.

Пипетки емкостью 0,1, 1, ГОСТ 1770-74.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71.

К методу ГЖХ

Газовый хроматограф серии "Цвет" или аналогичный с ДЭЗ (ДПР).

Колбонагреватели для круглодонных колб (50 мл) или электроплита с закрытой спиралью и терморегулятором.

Холодильник Либиха 200 - 400 мм, ГОСТ 9499-70.

Колбы грушевидные емкостью 25, 50 мл, ГОСТ 10394-72.

Пробирки мерные емкостью 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Микрошприцы на 10 мкл МШ-10М, ТУ 2-833-106.

Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр 3,5 см.

Секундомер, ГОСТ 5772-79.

Термометр ртутный на 200 °C, ГОСТ 16590-71.

К методу ТСХ

Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-74, или аналогичная.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.

Камера для опрыскивания - колпак для насосов с кнопкой диаметром 160 - 200 мм, высотой 220 мм, ТУ 25-11-1022-75.

Капиллярные пипетки для нанесения проб.

2.4. Проведение определения

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб производят в соответствии с требованиями, изложенными в "Унифицированных правилах отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача СССР (N 2051-79 от 21.08.79).

2.4.2. Экстракция

2.4.2.1. Вода. 200 мл воды помещают в делительную воронку, подкисляют концентрированной хлористоводородной кислотой до pH = 4 - 5 и экстрагируют фуроре-супер хлороформом, предварительно насыщенным водой, 3 раза по 30 мл, осторожно встряхивая по 3 - 4 минуты. Объединенный хлороформный экстракт отфильтровывают в колбу для отгонки растворителей через обезжиренный ватный тампон (или бумажный фильтр "красная лента") с помещенным на него слоем безводного сульфата натрия (15 г). Отгоняют хлороформ на ротационном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани не более 45 °C до ~= 0,5 мл. Остаток упаривают досуха при комнатной температуре. Далее проводят определение, как описано в п. 2.4.3.

2.4.2.2. Почва. 50 г почвы помещают в коническую колбу, заливают 100 мл ацетона и экстрагируют 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Экстракцию повторяют дважды с 30 мл растворителя в течение 15 мин., экстракты объединяют в делительной воронке.

Для очистки к полученному ацетоновому экстракту приливают дистиллированной воды (по объему примерно в два раза больше, чем объем экстракта) и экстрагируют препарат хлороформом трижды по 50, 30, 30 мл, осторожно встряхивая 3 - 4 мин.

Объединенный хлороформный экстракт отфильтровывают в колбу для отгонки растворителей через обезжиренный ватный тампон (или бумажный фильтр "красная лента") с помещенным на него слоем безводного сульфата натрия (15 г) и концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до 0,5 мл. Остаток упаривают досуха при комнатной температуре. Далее проводят очистку активированным углем, как описано в п. 2.4.2.3.

2.4.2.3. Растительный материал (зеленая масса пшеницы)

Измельченные листья или зеленые колоски пшеницы (20 г) экстрагируют 50 мл смеси гексан - ацетон 9:1 в течение 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют дважды. Экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе и проводят очистку активированным углем.

Для проведения очистки сухой остаток растворяют в 10 мл смеси бензол - ацетон 1:3 и добавляют 0,1 г активированного угля, хорошо перемешивают. Колбу опускают в стакан с горячей водой (60 °C) на 20 мин., затем раствор отфильтровывают через фильтр "красная лента" в колбу для отгонки растворителей. Уголь дважды промывают смесью бензол - ацетон 1:3 по 5 мл, присоединяют смывы к фильтрату. Объединенный фильтрат упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не более 40 °C.

2.4.2.4. Пшеница. Из измельченного до 1 - 2 мм зерна (навеска 25 г) экстрагируют смесью ацетон - вода (1:1) на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Дают отстояться 15 - 20 мин. и сливают растворитель, фильтруя через фильтр "красная лента". Промывают пробу дважды смесью ацетон - вода (1:1) по 20 мл, энергично встряхивая и давая отстояться по 20 мин. Объединяют отфильтрованные экстракт и смывы, переносят в делительную воронку и прибавляют 80 мл воды. Экстрагируют гексаном трижды по 50 мл, сливая верхний (гексановый) слой через безводный сульфат натрия (10 - 15 г на фильтровальной воронке с обезжиренной ватой) в колбу для отгонки. Упаривают растворитель под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C до ~= 0,5 мл, остаток упаривают досуха при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, берут аликвоту (0,1 - 0,2 мл) и проводят определение методом ТСХ, как описано в п. 2.4.3.1.

2.4.3. Хроматографический анализ

2.4.3.1. Определение методом ТСХ

    Полученный  после упаривания сухой остаток растворяют в 1,0 мл
ацетона  или  диэтилового  эфира, аликвоту этого раствора (0,1 мл)
количественно  наносят  на  хроматографическую пластинку. Справа и
слева  от пробы наносят рабочие стандартные растворы фуроре (0,2 -
15  мкг).  Пластинку  помещают в камеру для хроматографирования, в
которую   за   30   мин.  до  хроматографирования  наливают  смесь
растворителей н-гексан - ацетон 3:1. После того как подвижная фаза
поднимется   на   10   см,  пластинку  вынимают  из  камеры,  дают
растворителю  испариться и обрабатывают либо проявляющим реагентом
N   1   (на   основе   БФС),   либо   реагентом  N  2  (на  основе
2,6-дибром-N-хлорхинонимина).  Фуроре  и его кислотное производное
проявляются  обоими реагентами в виде голубых пятен. R  фуроре 0,6
                                                      f
(идет с фронтом), R  кислотного производного фуроре 0,3.
                   f

Реагент N 2 специфичнее и чувствительнее реагента N 1. Предел обнаружения препарата реагентом N 1 - 1 мкг, реагентом N 2 - 0,2 мкг на пластинке.

Количество фуроре в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятна пробы и стандарта. Пропорциональная зависимость между концентрацией и площадью пятна соблюдается в интервале 0,2 - 20 мкг.

Содержание фуроре (X) в пробе вычисляют по формуле:

                               A x V
                           X = ------,
                               P x V
                                    a

    где:
    X - количество фуроре в пробе, мг/кг (мг/л);
    A   -   количество   фуроре,   найденное  путем  сравнения  со
стандартными растворами препарата, мг;
    V - общий объем анализируемой пробы, мл;
    V  - объем аликвоты, мл;
     a
    P - масса пробы, взятой для анализа, кг (л).

2.4.3.2. Определение методом реакционной ГЖХ

Получение производного

Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, отбирают аликвоту <*> (0,1 - 0,5 мл), прибавляют 1 мл трифторуксусного ангидрида, 100 мкл пиридина, присоединяют колбу к обратному холодильнику и нагревают в течение 3 часов на колбонагревателе при температуре 130 °C. Затем отсоединяют колбу от холодильника и после того, как она остынет, отдувают остаток ангидрида током азота. К остатку в колбе прибавляют 1 мл бензола, 9 мл дистиллированной воды и переносят все в мерную пробирку. Для анализа методом ГЖХ отбирают аликвоту (1 - 3 мкл) из верхнего бензольного слоя.

--------------------------------

<*> Примечание: при определении в воде берут всю пробу.

Условия ГЖХ анализа

Измерения проводят на хроматографе с ДЭЗ (ДПР).

Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр 3,5 мм.

Фаза 3% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS.

Температура колонки - 160 °C, испарителя - 200 °C, детектора - 230 °C.

Скорость газа-носителя азота 65 мл/мин.

Скорость продувочного газа (ДПР) азота 150 мл/мин.

                                     -12
    Рабочая шкала электрометра 2 x 10   .

Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.

Объем вводимой пробы 1 - 3 мкл.

Линейный диапазон определения 0,2 - 10 нг.

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте хроматографируемого пика.

Содержание фуроре в пробе рассчитывают по формуле:

                        C   x V   x H   x V
                         ст    ст    пр    пр
                    X = ---------------------,
                            H   x V  x P
                             ст    a

    где:
    X - содержание фуроре в пробе, мг/кг (мг/л);
    C   - содержание вещества в стандарте, мкг/мл;
     ст
    V   - объем стандарта, введенный в хроматограф, мкл;
     ст
    V   - общий объем анализируемой пробы, мл;
     пр
    V  - объем анализируемой пробы, введенный в хроматограф, мкл;
     a
    H   - высота пика стандарта, мм;
     ст
    H   - высота пика анализируемой пробы, мм;
     пр
    P - масса (объем) пробы, взятой для анализа.

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые для работы с органическими растворителями и токсическими веществами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: