Методические указания по определению препарата "Комби" смеси карбофурана с беномилом и ТМТД в растениях сахарной свеклы тонкослойной хроматографией

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6135-91

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Препарат "Комби", или Фурадан-300, содержащий 27,2% карбофурана, 5,22% беномила, 5,22% тирама (ТМТД) и 62,36% инертного наполнителя, используется для предпосевной обработки семян с нормой расхода 30 л/т.

Карбофуран /N-метил-O-2,2-диметилбензо/2,3-дигидрофурил-7/карбамат/.

     // \ ---¬ CH
    ¦   ¦¦   ¦/  3
     \\ / \ / \
       ¦   O   CH
       O   H     3                                 М.м. 221,3.
       ¦  /
     O=C-N
          \
           CH
             3

    Эмпирическая формула C  H  O N.
                          12 15 3

Синонимы: фурадан, куратер.

Белое кристаллическое вещество. Т. пл. 150 - 152 °C. Растворимость в воде 700 мг/л, в ацетоне - 150 г/кг, в ацетонитриле - 140 г/кг, в бензоле - 40 г/кг, в диметилсульфоксиде - 270 г/кг, в циклогексане - 90 г/кг. При нагревании со щелочами и кислотами быстро разлагается. Спиртовыми растворами щелочей разрушается даже при комнатной температуре.

    В  странах  Западной  Европы  МДУ в шампиньонах - 0,8 мг/кг, в
кукурузе  -  0,1  мг/кг.  Токсичен  для  пчел  и  других  полезных
насекомых.  СК    для   рыб  0,28  мг/л  (при  экспозиции  96  ч).
              50
Акарицид, нематоцид, системный инсектицид.
    Беномил               /N-/1-бутилкарбамоилбензимидазолил-2/-O-
метилкарбамат/.

               NCONHC H
     // \ -----      4 9
    ¦   ¦¦      \ --NHCOOCH
    ¦   ¦¦     //          3                       М.м. 290,3.
     \\ / -----

    Эмпирическая формула C  H  O N .
                          14 18 3 4

Синонимы: бенлат, бенлейт, узген, фунгицид 1991, фундазол.

Белое кристаллическое вещество со слабым запахом. Т. пл. 290 °C. Практически нерастворим в воде и в большинстве органических растворителей. Нелетуч.

ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м, в воде 0,5 мг/л. В СССР МДУ в сахарной свекле - 0,1 мг/кг, пшенице - 0,5 мг/кг, фруктах, огурцах, томатах и капусте - 0,5 мг/кг.

Для теплокровных животных и человека малотоксичен. Слаботоксичен для пчел, птиц и рыб.

Основной продукт разложения беномила - N-метил-/бензимидазолил-2/-карбамат (БМК).

БМК также обладает фунгицидным действием.

     // \ -----N
    ¦   ¦¦    ¦
    ¦   ¦¦    ¦-- NHCOOCH                          М.м. 191,2.
     \\ / \  /           3
           NH

    Эмпирическая формула C H O N .
                          9 9 2 3

Кристаллическое вещество от серого или голубого до темно-коричневого цвета. Т. пл. 307 - 312 °C. Плохо растворим в воде и многих органических растворителях, растворим в кислотах.

ПДК в воде 0,1 мг/л.

Беномил и БМК - системные фунгициды.

Тирам (ТМТД) /тетраметилтиурамдисульфид/.

    [(CH ) NCS]                                    М.м. 240,4.
        3 2\\  2
            S

    Эмпирическая формула C H  N S .
                          6 12 2 4

Кристаллическое вещество белого или кремового цвета. Хорошо растворим в хлороформе, ацетоне, хуже в этаноле, диэтиловом эфире, практически нерастворим в воде.

Протравитель семян, используемый для защиты растений от заболеваний, инфекционное начало которых распространяется семенами или находится в почве.

ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м. В СССР остаточные количества в продуктах питания не допускаются.

2. Методика определения смеси

2.1. Основные положения

Метод основан на извлечении смеси пестицидов из исследуемой пробы подкисленной водой с pH 3, очистке перераспределением пестицидов в хлороформ с последующим определением в тонком слое сорбента.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Таблица 1

ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ

-----------------+------------+-----------------------+--------------------
¦    Пестицид    ¦ Проявитель ¦ Диапазон определяемых ¦    Цвет пятен     ¦
¦                ¦            ¦   концентраций, мкг   ¦                   ¦
+----------------+------------+-----------------------+-------------------+
¦Карбофуран      ¦N 1         ¦                       ¦                   ¦
¦                ¦А, Б        ¦0,1 - 3                ¦бордовые           ¦
¦                ¦А, В        ¦0,1 - 3                ¦желтые             ¦
¦                ¦А, Г        ¦0,1 - 3                ¦синие              ¦
¦ТМТД            ¦N 1         ¦                       ¦                   ¦
¦                ¦А, Б        ¦0,5 - 3                ¦бурые              ¦
¦                ¦Г           ¦0,5 - 3                ¦оранжевые          ¦
¦                ¦N 2         ¦0,05 - 10              ¦голубые            ¦
¦Беномил, БМК    ¦N 2         ¦0,5 - 10               ¦голубые            ¦
¦ТМТД            ¦N 3         ¦0,05 - 5               ¦светло-зеленые     ¦
¦Карбофуран      ¦N 4         ¦0,1 - 5                ¦сине-фиолетовые    ¦
¦ТМТД            ¦N 4         ¦0,5 - 10               ¦белые              ¦
¦Беномил, БМК    ¦N 4         ¦1,0 - 10               ¦сине-фиолетовые    ¦
¦Карбофуран      ¦УФ-свет     ¦0,05 - 10              ¦сиреневые          ¦
¦ТМТД            ¦УФ-свет     ¦0,05 - 10              ¦сиреневые          ¦
¦Беномил, БМК    ¦УФ-свет     ¦0,5 - 10               ¦сиреневые          ¦
-----------------+------------+-----------------------+--------------------

Таблица 2

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, N = 5, P = 0,95

---------+----------+------------+------------+-------------+----------------
¦Анализи-¦ Пестицид ¦   Предел   ¦  Среднее   ¦ Стандартное ¦ Доверительный ¦
¦руемая  ¦          ¦обнаружения,¦  значение  ¦отклонение, %¦интервал, +/- %¦
¦проба   ¦          ¦   мг/кг    ¦определения,¦             ¦               ¦
¦        ¦          ¦            ¦     %      ¦             ¦               ¦
+--------+----------+------------+------------+-------------+---------------+
¦Семена  ¦Карбофуран¦0,50        ¦95,0        ¦1,8          ¦2,4            ¦
¦        ¦Беномил   ¦1,00        ¦83,5        ¦4,7          ¦7,1            ¦
¦        ¦БМК       ¦1,00        ¦82,4        ¦4,9          ¦7,5            ¦
¦        ¦ТМТД      ¦0,25        ¦92,0        ¦3,7          ¦3,2            ¦
¦Зеленая ¦Карбофуран¦0,01        ¦81,8        ¦4,9          ¦7,6            ¦
¦масса   ¦Беномил   ¦0,10        ¦79,0        ¦7,6          ¦15,9           ¦
¦        ¦БМК       ¦0,10        ¦79,9        ¦6,5          ¦10,2           ¦
¦        ¦ТМТД      ¦0,01        ¦80,8        ¦5,2          ¦8,1            ¦
¦Корне-  ¦Карбофуран¦0,01        ¦91,8        ¦3,7          ¦5,1            ¦
¦плоды   ¦Беномил   ¦0,10        ¦79,5        ¦6,1          ¦9,7            ¦
¦        ¦БМК       ¦0,10        ¦82,5        ¦5,2          ¦8,0            ¦
¦        ¦ТМТД      ¦0,01        ¦91,5        ¦6,5          ¦9,0            ¦
---------+----------+------------+------------+-------------+----------------

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Этиловый спирт ректификат 96-процентный, ГОСТ 5962-81.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Кислота хлористоводородная, ГОСТ 3118-77.

Кислота уксусная, ГОСТ 22300-76.

Кислота лимонная, осч, ГОСТ 908-79.

Вода дистиллированная.

Натрий сернокислый, безводный, чда, ГОСТ 4266-76.

Кали едкое, хч, ГОСТ 24363-80.

Перманганат калия, чда, ГОСТ 20490-75.

п-Нитроанилин, чда, ТУ 6-09-258-70.

Натрий нитрит, хч, ГОСТ 4197-74.

Хлорная медь, ч, ГОСТ 4967 -48.

Азотнокислое серебро, чда, ГОСТ 1277-81.

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-4530-77.

о-Толидин, хч, ТУ 6-09-2232-75.

Соли диазонил: прочный синий Б, ГОСТ 11632-65; прочный красный Б, ГОСТ 11827-79; прочный голубой Б, ГОСТ 11632-80.

Пластинки "Силуфол" УФ-254.

Бумага фильтровальная.

Карбофуран - 99,5% д.в.

Беномил - 99% д.в.

БМК - 50% д.в.

ТМТД - 80% д.в.

"Комби" - к.э.

Приготовление стандартных растворов

Для сравнения готовят основные растворы: 0,3-процентный препарат "Комби", стандартные растворы карбофурана, беномила, БМК и ТМТД, содержащие 1000 мкг/мл, в ацетоне.

Рабочие стандартные растворы, содержащие 500 мкг/мл и 50 мкг/мл, готовят соответствующим разбавлением ацетоном основных растворов.

Хранят растворы в холодильнике в склянках с притертыми пробками: карбофуран - 6 месяцев, БМК - 30 дней, ТМТД - 10 дней, беномил - 10 дней, 0,3-процентный раствор препарата "Комби" - 10 дней.

Проявляющие реактивы

N 1

Реагент А. 15-процентный KOH в спиртово-водном растворе (15 г KOH растворяют в 60 мл этилового спирта и 40 мл воды).

Реагент Б. Смешивают перед употреблением 0,1-процентный раствор п-нитроанилина в 0,1 н растворе хлористоводородной кислоты и 4-процентный водный раствор нитрита натрия в соотношении 10:1.

Реагент В. 0,0,1-процентный раствор солей диазония в ацетоне.

Реагент Г. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане с последующим нагреванием 3 - 5 мин. при 110 - 140 °C.

Пластинку опрыскивают реагентом А, подсушивают на воздухе и опрыскивают реагентом Б, или В, или Г.

N 2. Бромфеноловый реагент

    Опрыскивают  пластинку  смесью (1:1) 0,05-процентного раствора
бромфенолового   синего   в   50-процентном   этиловом   спирте  с
1-процентным  раствором  AgNO   в  ацетоне.   Через  1 - 2  минуты
                             3
опрыскивают   1-процентным   раствором   лимонной   кислоты    или
10-процентным раствором уксусной кислоты.
    N 3. 1-процентный раствор CuCl  в этиловом спирте.
                                  2

N 4. Галогенирование, о-толидин, йодид калия

Пластинку обрабатывают парами хлора, проветривают и опрыскивают проявляющим реагентом.

Раствор для хлорирования. Смешивают равные объемы 3-процентного раствора перманганата калия и хлористоводородной кислоты.

Проявляющий реагент. 0,2 г о-толидина растворяют в 2 мл уксусной кислоты, 0,8 г йодида калия растворяют в 2 мл дистиллированной воды, смешивают растворы и доводят водой до 200 мл.

2.3. Приборы и посуда

Весы технические.

Весы аналитические 2 класса, ГОСТ 19491-74.

Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74.

Электроплитка, ТУ 92-275-76.

Аппарат для встряхивания, ТУ 6921-1084-78.

Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл.

Пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" (ЧССР).

Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок, ГОСТ 25336-82.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Эксикатор, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные со шлифом, ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл.

Воронка делительная, ГОСТ 25336-82, на 500 мл.

Вакуумный насос, ГОСТ 10696-75.

Хроматоскоп.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Отбор проб

Пробы для анализа отбираются в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР за N 2051-79 21.08.1979.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Растения сахарной свеклы и корнеплоды. 20 - 50 г образца измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 100 - 150 мг подкисленной воды с pH 3. Экстракцию проводят на аппарате для встряхивания в течение часа. Экстракт переносят в делительную воронку и проводят реэкстракцию трижды хлороформом (100, 50, 50 мл) по 5 мин. Полученный экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром и 15 г безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу, отгоняют хлороформ на водяной бане или ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл. Остаток переносят в мерную пробирку, доводят до объема 1 - 1,5 мл хлороформом, делят на две равные части и наносят на пластинку с левой и правой стороны на расстоянии 1,5 см от краев. Рядом наносят стандартные растворы "Комби" или смесей препаратов.

Семена. 0,4 г семян (20 штук) помещают в коническую колбу на 50 мл, заливают 20 мл хлороформа. Встряхивают в течение часа. Фильтруют через безводный сернокислый натрий, отгоняют хлороформ на ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл. Переносят в пробирку, доводят объем до 2 мл, делят на две равные части и проводят анализ, как при определении в растениях.

Семена, обработанные "Комби". Для проверки качества обработки семян берут 0,2 г семян (10 штук), заливают 10 мл хлороформа. Экстрагируют в течение часа. Сливают хлороформ в мерную пробирку, измеряют объем, доводят до 10 мл. Аликвотную часть 0,05 - 0,1 мл наносят в две точки в правой и левой части пластинки. Дальше проводят определение, как в растениях.

2.5.2. Хроматографирование

Пластинку помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой из смеси гексан - ацетон (3:2) или хлороформа. Когда растворитель поднимется на 10 см, пластинку вынимают и сушат на воздухе.

2.5.3. Проявление пластинок

Пластинку просматривают под УФ-светом. Светящиеся пятна карбофурана, ТМТД, беномила и БМК обводят простым карандашом. Для дополнительной идентификации соединений можно использовать проявитель N 4 (см. табл. 1). При использовании других проявителей поступают следующим образом. Правую часть пластинки закрывают фильтровальной бумагой. Левую проявляют, используя проявитель N 1. Затем фильтровальной бумагой закрывают левую, а правую обрабатывают проявителем N 2. Для обнаружения ТМТД можно использовать специфичный проявитель N 3.

    Величина   R    в   подвижной  фазе  гексан  -  ацетон  (3:2);
                f
карбофурана -  0,45;  беномила  - 0,65; БМК - 0,25; ТМТД - 0,50; в
хлороформе:  карбофурана  -  0,25;  беномила  -  0,45; БМК - 0,15;
ТМТД - 0,55.

2.6. Обработка результатов анализа

Количество препаратов на пластинке определяют по площади пятен, сравнивая с пятнами стандартных растворов, по формуле:

                             P  x S
                              1    x
                        P  = ------- мкг,
                         x      S
                                 1

    где:
    P   и  P   -  содержание препарата в исследуемом и стандартном
     x      1
растворе в мкг;
    S  и S  - площади соответствующих пятен, кв. мм.
     x    1
    Количество препаратов в мг/кг рассчитывают по формуле:

                            1000 x P x V
                        X = ------------,
                               A x V
                                    a

    где:
    A - масса анализируемой пробы, г;
    V - объем пробы, мл;
    V  - объем аликвоты, мкг;
     a
    P - количество препарата в хроматографируемой пробе, мкг.

2.7. Требования безопасности

Необходимо выполнять все требования безопасности работы с токсичными веществами, кислотами и щелочами.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: