Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях

Утверждаю
Начальник Главного управления
эпидемиологии и гигиены
Министерства здравоохранения РСФСР
Р.И.ХАЛИТОВ
17 августа 1990 года

--------------------------------

<*> Разработаны специалистами Красноярской краевой санэпидстанции и одобрены Лабораторным Советом при Главном управлении эпидемиологии и гигиены Минздрава РСФСР 28.05.90.

Настоящие Методические рекомендации разработаны на основании нормативно-технических документов:

1. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, утв. МЗ СССР 20 декабря 1973 г. N 1135-73.

2. Методические указания по диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями, утв. МЗ СССР 17 декабря 1984 г. N 04-23/3-84.

3. Письмо ГСЭУ МЗ РСФСР по количественному определению стафилококков в пищевых продуктах, N 08 с/б-3-1310 от 14.06.75.

4. ГОСТ 10444.7-86 "Продукты пищевые. Методы выявления ботулинических токсинов и C. botulinum".

5. ГОСТ 10444.9-88 "Продукты пищевые. Метод определения C. perfringens".

6. ГОСТ 10444.8-88 "Продукты пищевые. Метод определения B. cereus".

Настоящие Методические рекомендации имеют цель при ограниченных возможностях лабораторий выполнить максимальный объем исследований по сокращенной схеме на все потенциально опасные, известные виды микроорганизмов - возбудителей пищевых отравлений (при наличии методик исследований) качественно или количественно. Для эффективного использования результатов бактериологических исследований при пищевых отравлениях необходимо иметь в виду:

1. Не следует направлять на бактериологическое исследование продукты и другие материалы, неблагоприятные по своей природе для развития микроорганизмов (продукты, содержащие высокие концентрации сахара, соли, а также крупы, хлеб, сало, при подозрении на ботулизм - продукты, хорошо аэрируемые и т.п.).

2. В сопроводительном документе к материалам, направляемым на бактериологическое исследование, необходимо указать предполагаемый диагноз (этиологию отравления) и цель исследования (на какие группы возбудителей проводить исследование).

3. Материалы от пострадавших забирают и направляют на бактериологическое исследование в соответствии с клиникой заболевания и его патогенезом: так при подозрении на стафилококковую этиологию от пострадавших нецелесообразно забирать кровь на гемокультуру и серологические исследования; при подозрении на ботулизм - нецелесообразно направлять материалы для исследования на патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и т.д.

4. Определение абсолютных патогенов (шигелл, сальмонелл, возбудителей ботулизма и др.) во всех материалах проводят качественно: определение условно-патогенных возбудителей (энтеробактерии, стафилококк, B. cereus, Cl. perfringens и др.) в некоторых материалах от больных (фекалии, мазки из зева и носа на стафилококковое носительство) и пищевых продуктах - количественно; в смывах - качественно.

5. Исследование проб воды, пищевых продуктов целесообразно проводить на соответствие ГОСТов, др. НТД (при соблюдении правил хранения и реализации) и параллельно на патогенную и условно-патогенную микрофлору в зависимости от цели исследования, указанной в направлении. Суточные пробы пищевых продуктов исследуют только на патогенную микрофлору.

Отбор проб, их доставку и подготовку к исследованию проводят по Инструкции МЗ СССР ... N 1135-73.

6. При выделении однотипных культур из материалов от больных и из внешней среды проводят их углубленное изучение с целью установления идентичности (определяют серо-, био-, фаго-, колициновары, антибиотикорезистентность, термоустойчивость и другие эпид. маркеры).

7. Обращаем внимание, что предлагаемые схемы рассчитаны на проведение бактериологических исследований. Поэтому необходимость проведения серологических исследований устанавливается в каждом конкретном случае по показаниям.

Настоящие Рекомендации включают 2 раздела:

1. Исследование проб пищевых продуктов (Приложение N 1).

2. Исследование материалов от пострадавших (Приложение N 2).

Приложение N 1

ИССЛЕДОВАНИЕ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

    Готовят  исходное разведение продукта 1:10 (для твердых продуктов: 15 г
продукта + 135 мл 0,1-процентной  пептонной  воды  или  физ. раствора,  для
жидких продуктов:  10 мл продукта + 90 мл 0,1-процентной пептонной воды или
физ. раствора) и из него в  9 мл  0,1-процентной  пептонной  воды или  физ.
                                         -3     -5
раствора два дополнительных разведения 10   и 10  .
    При  целенаправленном  исследовании  на   C. perfringens  дополнительно
                     -8    -9    -10
готовят разведения 10  , 10  , 10   .

Посев в среды обогащения проводят в больших объемах: 25 мл/г цельного продукта (для твердых продуктов необходимо предварительно размельчить в ступке) в 100 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации или 25 мл хлористо-магниевой среды двойной концентрации.

5 мл/г - в 25 мл желчного бульона, 30 мл/г - в 120 - 150 мл среды Китт-Тароцци и т.д.

Исследование на C. botulinum и C. perfringens проводят по клинико-эпидемиологическим показаниям.

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят в соответствии с вышеперечисленной НТД.

ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

                 Твердый продукт            Жидкий продукт
                       ¦¦                         ¦¦
-------------   25 гр  ¦¦                         ¦¦ 25 мл  --------------
¦100 мл     ¦<---------+¦                         ¦+------->¦  100 мл ХМ ¦
¦хлористо-  ¦          ¦¦                         ¦¦        ¦   обычн.   ¦
¦магниевой  ¦          ¦¦                         ¦¦        ¦концентрации¦
¦обыч. конц.¦  15 гр продукта + 135 мл  10 мл прод. + 90 мл ¦ или 25 мл  ¦
-------------  0,1-процентного ПВ       0,1-процентного ПВ  ¦  двойной   ¦
               или физ. р-ра            или физ. р-ра       --------------
----------------       ¦¦                         ¦¦ 5 мл  ----------------
¦     5 мл     ¦  5 г𠦦                         ¦+------>¦    25 мл     ¦
¦10-процентного¦<-------¦                         ¦------  ¦10-процентного¦
¦ желч. бульона¦        \/                        \/    ¦  ¦  желч. б-на  ¦
----------------      ------  0,1 мл    0,1 мл  ------  ¦  ----------------
          ------------+  -1+---------+----------+  -1¦  ¦
          ¦           ¦10  ¦         ¦          ¦10  ¦  ¦
          ¦ по 0,1 мл ------         ¦          ------  ¦ по 0,1 мл
          \/                         ¦                  \/
  --T-----+-----T---                 ¦          --T-----+-----T---
    \/    \/    \/                ---+-¬          \/    \/    \/
  ------------------       -------+    ¦        ------------------
  ¦ЭндПлосꦦВСА¦       ¦      +----+        ¦ЭндПлосꦦВСА¦
  ------------------       ¦      ¦  -3¦        ------------------
                по 0,1 мл  ¦      ¦10  ¦
             ---------------      L--T--
             \/                      ¦   9,9 мл 0,1-процентного
--T-----+---T----+----T----          ¦   ПВ или физ. р-ра
  \/    \/  \/   \/   \/             ¦
--------------¬------------          ¦ 0,1 мл
¦ЭндЖСА¦¦КА¦¦МИС¦¦ЖАМПФ¦          ¦
---------------------------          \/
                                  ------   по 0,1 мл
                                  ¦    +-----------------
                                  +----+                \/
                                  ¦  -5¦     --T-----+---T----+----T----
                                  ¦10  ¦       \/    \/  \/   \/   \/
            9,9 мл 0,1-процентного------     --------------¬------------
            ПВ или физ. р-ра                 ¦ЭндЖСА¦¦КА¦¦МИС¦¦ЖАМПФ¦
                                             ---------------------------

Примечание: 1. При отсутствии среды МИС идентификацию энтерококков возможно проводить со среды КР.

2. При отсутствии среды ЖАМПФ (желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным) идентификацию B. cereus возможно проводить со среды ЖСА.

Приложение N 2

ИССЛЕДОВАНИЕ МАТЕРИАЛОВ ОТ ПОСТРАДАВШИХ

1. Кровь засевают в питательную среду (Раппопорт и др.) в соотношении 1:10 (5 мл на 45 мл среды).

Термостатируют 10 дней при 37 °С, делая высевы на среду Эндо через 18 - 24 часа, на 3, 4, 6, 10 сутки. При наличии роста работают по общепринятой методике.

2. Мочу центрифугируют, засевают осадок в 5 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации (или 10 мл мочи на 10 мл среды двойной концентрации), через 18 - 20 часов инкубации при 37 °С делают высев петлей на ВСА (48 часов при 37 °С).

При наличии подозрительного роста идентификацию проводят по общепринятой методике.

3. Желчь засевают в количестве 5 мл на 45 - 50 мл МПБ (1:10), помещают на 7 суток в термостат при 37 °С и делают высевы через 18 - 20 часов и 3, 5, 7 сутки на среду Эндо. При наличии подозрительного роста работают по общепринятой методике.

4. Промывные воды желудка после нейтрализации (1 мл 10-процентной соды на 10 мл пробы) засевают по 0,1 мл на плотные чашечные питательные среды Эндо (Левина), Плоскирева, ЖСА, КА и в среды обогащения (хлористо-магниевая, желчный бульон, солевой бульон, сахарный бульон) в соотношении 1:5 - 1:10 (1 мл на 4 - 5 мл среды).

Дальнейшее исследование проводят в зависимости от характера роста по общепринятой методике.

5. Рвотные массы после нейтрализации, испражнения.

    Готовят на 0,1-процентной пептонной воде или физ.  растворе  10-кратные
                -1      -3      -5
разведения:   10  ,   10  ,   10  ,  для  исследования   на  C. perfringens
                 -8    -9    -10
дополнительно: 10  , 10  , 10    и далее проводят посевы:
    5.1. На шигеллы и сальмонеллы:
                       -1
    по  0,1  мл  из  10   на среды Эндо (Левина), Плоскирева, ВСА и в среды
                                  -1
обогащения:  по 0,3 - 1,0 мл из 10   на 2,5 - 5 мл хлористо-магниевой среды
(селенитовой).
                                      -3     -5
    5.2. На S. aureus: по 0,1 мл из 10   и 10   на ЖСА.
                                            -3     -5
    5.3. На  B. cereus:  по  0,1  мл  из  10   и 10   на желточный  агар  с
маннитом, полимиксином и феноловым  красным  (ЖАМПФ),  при  отсутствии - на
ЖСА.
    5.4. На энтерококки:
                   -3     -5
    по 0,1 мл из 10   и 10   на МИС, при отсутствии - на КА.
                                                               -3     -5
    5.5.  На условно-патогенные энтеробактерии: по 0,1 мл из 10   и 10   на
Эндо.
                                        -8    -9    -10
    5.6. На C. perfringens по 1 мл из 10  , 10  , 10    в пробирки  с 8 - 9
мл среды Вильсон - Блера.
    5.7. На C. botulinum:
                           -1
    по  3  -  5  мл  из  10    в  4  флакона  (пробирки) с 30 - 50 мл среды
Китт-Тароцци  (при  отсутствии среды возможно применение среды для контроля
стерильности).

Примечание: посевы на Cl. perfringens и Cl. botulinum проводят только по клинико-эпидемиологическим показаниям, о чем должна быть сделана запись в направлении.

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят по общепринятой методике.

ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА РВОТНЫХ МАСС И ИСПРАЖНЕНИЙ

     0,1 мл                        ------          0,3 - 1,0 мл
    -------------------------------+  -1+-------------------------
    ¦       0,1 мл                 ¦10  ¦                        ¦
    ¦        ----------------------+    +----------              ¦
    ¦        ¦      0,1 мл         ¦    ¦         ¦              ¦
    ¦        ¦       --------------+-T---         ¦              ¦
    \/       \/      \/   1 г/мл материала 10 мл  ¦              \/
  ------  -------  -----      0,1-процентного     ¦          --------------
  ¦Эндо¦  ¦Плос.¦  ¦ВСА¦      ПВ или физ. р-ра    ¦          ¦2,5 - 5,0 мл¦
  ------  -------  -----             ¦            ¦          ¦хлористо-   ¦
                                     ¦            ¦          ¦магниевой   ¦
                                     ¦            ¦          ¦среды обыч. ¦
                                     ¦            ¦          ¦конц.       ¦
                                     ¦            ¦          --------------
                                     \/           ¦ 0,3 - 1,0 мл
                   по 0,1 мл       ------         ----------------     или
               --------------------+  -3¦                        \/
               \/                  ¦10  ¦                    --------------
  --T-----+---T----+----T----      +----+ 9,9 мл             ¦2,5 - 5,0 мл¦
    \/    \/  \/   \/   \/         ¦    ¦ 0,1-процентного    ¦селенитовой ¦
  --------------¬------------      L-T--- ПВ или физ. р-ра   ¦   среды    ¦
  ¦ЭндЖСА¦¦КА¦¦МИС¦¦ЖАМПФ¦        ¦                       --------------
  ---------------------------        ¦ 0,1 мл
                                     \/
                   по 0,1 мл       ------
               --------------------+  -5¦
               \/                  ¦10  ¦
  --T-----+---T----+----T----      +----+
    \/    \/  \/   \/   \/         ¦    ¦ 9,9 мл 0,1-процентного
  --------------¬------------      ------ ПВ или физ. р-ра
  ¦ЭндЖСА¦¦КА¦¦МИС¦¦ЖАМПФ¦
  ---------------------------

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: