МУК 4.1.2778-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Цимоксанила в луке-перо и луке-репке методом газожидкостной хроматографии. Методические указания

Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
24 ноября 2010 года

Дата введения:
с момента утверждения

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Общие положения

Свидетельство об аттестации методики N 0029.28.05.10 от 31.05.2010.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Цимоксанила в луке-перо и луке-репке в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг.

Название по ИЮПАК: 1-(2-циано-2-метоксииминоацетил)-3-этил-мочевина.

Структурная формула:

                                   O   O
                                   ||  ||
                                   C   C    NOCH
                                  / \ / \ //    3
                          CH CH NH   N   C
                            3  2     H   |
                                         CN

    Эмпирическая формула: C H  N O .
                           7 10 4 3

Молекулярная масса: 198,2.

Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.

Цвет, запах: бесцветное вещество без запаха.

Температура плавления: 160 - 161 °С.

Давление паров: 0,15 мПа (при 20 °С).

Растворимость в воде, мг/куб. дм (при 20 °С и pH 5): 890.

Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °С): в гексане - 0,037; в толуоле - 5,29; в ацетонитриле - 57; в этилацетате - 28; в н-октаноле - 1,43; в метаноле - 22,9; в ацетоне - 62,4; в хлороформе - 103; в дихлорметане - 133,0.

    Коэффициент  распределения  октанол - вода  при 25 °С: K   log P = 0,59
                                                            ow
(pH 5) и 0,67 (pH 7).
    Цимоксанил  стабилен  к  гидролизу в интервале pH от 2 до 5; в щелочной
среде быстро гидролизуется (ДТ   - 148 дней при pH 5, 34 часа при pH 7 и 31
                              50
минута при pH 9). В воде водоемов период полураспада составляет 1,8 дня.

В почве Цимоксанил быстро разрушается под действием микроорганизмов. В тепличных условиях период полураспада составляет около трех дней, в полевых условиях от 7 до 14 дней. Миграция по почвенному профилю слабая.

В растениях соединение быстро разрушается до нетоксичных метаболитов. Остатки Цимоксанила в клубнях картофеля не обнаруживаются. В ягодах винограда, по данным фирмы Дюпон, остатки составляли ниже 0,2 мг/кг при обработке за несколько дней до уборки.

    Краткая   токсикологическая   характеристика:  Цимоксанил  относится  к
веществам  умеренно опасным по острой оральной (ЛД   для крыс - 960 мг/кг),
                                                  50
малоопасным  по  дермальной  токсичности (ЛД   для крыс более 2000 мг/кг) и
                                            50
умеренно  опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК   (4 часа) для
                                                            50
крыс  5060  мг/куб.  м  воздуха).  Не  вызывает  раздражения  глаз  и слабо
раздражает кожу.

Область применения: Цимоксанил - контактный фунгицид с местным системным эффектом, обладающий защитным и лечащим действием. Высокоактивен против грибов, вызывающих фитофтороз и пероноспороз, не действует на возбудителей настоящей мучнистой росы. Длительность защитного действия составляет 4 - 6 дней, поэтому рекомендуется его использование в смеси с другими фунгицидами системного и защитного контактного действия.

Применяется в России в качестве фунгицида в составе смесевых препаратов на картофеле, томатах, виноградниках и подсолнечнике с нормой расхода 0,15 кг д.в./га, трехкратная обработка за сезон.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0,02 мг/кг массы человека;

МДУ в продукции: картофель - 0,05 мг/кг, томаты и виноград - 0,1 мг/кг, подсолнечник (семена и масло) - 0,2 мг/кг, лук-репка - 0,5 мг/кг.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

----------+----------------+-------------+-----------+--------+-----------
¦Анализи- ¦    Диапазон    ¦ Показатель  ¦Стандартное¦Предел  ¦Предел    ¦
¦руемый   ¦  определяемых  ¦  точности   ¦отклонение ¦повторя-¦воспроиз- ¦
¦объект   ¦ концентраций,  ¦  (граница   ¦повторяе-  ¦емости, ¦водимости,¦
¦         ¦     мг/кг      ¦относительной¦мости,     ¦r, %    ¦R, %      ¦
¦         ¦                ¦погрешности),¦сигма , %  ¦        ¦          ¦
¦         ¦                ¦ +/- дельта, ¦     r     ¦        ¦          ¦
¦         ¦                ¦ %, P = 0,95 ¦           ¦        ¦          ¦
+---------+----------------+-------------+-----------+--------+----------+
¦Лук-репка¦0,10 - 0,50 вкл.¦25           ¦2,8        ¦8       ¦10        ¦
¦         +----------------+-------------+-----------+--------+----------+
¦         ¦0,05 - 0,10 вкл.¦50           ¦4,1        ¦12      ¦14        ¦
+---------+----------------+-------------+-----------+--------+----------+
¦Лук-перо ¦0,10 - 0,50 вкл.¦25           ¦2,6        ¦7       ¦8         ¦
¦         +----------------+-------------+-----------+--------+----------+
¦         ¦0,05 - 0,10 вкл.¦50           ¦2,9        ¦8       ¦10        ¦
----------+----------------+-------------+-----------+--------+-----------

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ, ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ЦИМОКСАНИЛА

----------+---------------------------------------------------------------
¦Анализи- ¦         Метрологические параметры, P = 0,95; n = 20          ¦
¦руемый   +-------+-------------+----------+-----------+-----------------+
¦объект   ¦предел ¦  диапазон   ¦ полнота  ¦стандартное¦  доверительный  ¦
¦         ¦обнару-¦определяемых ¦извлечения¦отклонение,¦интервал среднего¦
¦         ¦жения, ¦концентраций,¦вещества, ¦   S, %    ¦результата, +/-, ¦
¦         ¦мг/кг  ¦    мг/кг    ¦    %     ¦           ¦        %        ¦
+---------+-------+-------------+----------+-----------+-----------------+
¦Лук-репка¦0,05   ¦0,05 - 0,50  ¦86,0      ¦0,75       ¦1,35             ¦
+---------+-------+-------------+----------+-----------+-----------------+
¦Лук-перо ¦0,05   ¦0,05 - 0,50  ¦87,0      ¦0,62       ¦1,12             ¦
----------+-------+-------------+----------+-----------+------------------

2. Метод измерений

Метод основан на определении Цимоксанила с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с использованием капиллярной колонки и термоионного детектора после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен и может применяться для определения остатков Цимоксанила в присутствии Фамоксадона. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий программирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические "OHAUS", ЕР 114 с
наибольшим пределом взвешивания до 110 г и
дискретностью 0,0001 г, класс точности по

ГОСТ 24104-1 - специальный (I)

Весы лабораторные общего назначения с
наибольшим пределом взвешивания до 600 г и
пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г
"ACCULAB" V600, соответствуют классу
точности по ГОСТ 24104-1 - средний (III)
Колбы мерные на 25, 50, 100, 500 и 1000
куб. см                                         ГОСТ 1770-74
Микрошприц "Hamilton" многократного
применения, объем 10 куб. мм
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см         ГОСТ 29227-91
Хроматограф газовый "Кристалл 5000.1" с
термоионным детектором (ТИД) с пределом
детектирования по фосфору в Паратион-метиле
      -14
3 х 10    г/куб. см и приспособлениями для
капиллярной колонки                             N в государственном реестре
                                                средств измерений
                                                14516-95
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см          ГОСТ 1770-74.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Цимоксанил, аналитический стандарт с содержанием
действующего вещества не менее 99,7%, чист.         ГСО 7734
Азот, осч                                           ГОСТ 9293-74
Ацетон, осч                                         ТУ 6-09-3513-86
Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм                         ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят),
деионизированная или перегнанная над KMnO           ГОСТ 6709-72
                                         4
Гелий очищенный марки "А"                           ТУ 51-940-80
n-Гексан, хч                                        ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, хч                          ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч                                ТУ 6-09-4711-81
Кислота соляная, хч                                 ГОСТ 857-95
Концентрирующие патроны Диапак С и
Диапак С16 (0,6 г), фирма "БиоХимМак СТ"            ТУ 4215-002-05451931-94
Метилен хлористый, хч                               ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый безводный, хч                    ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый, кислый, хч                       ГОСТ 4201-79
Натрий хлористый, хч                                ГОСТ 4233-77
Этилацетат, чда                                     ГОСТ 22300-76.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аппарат для встряхивания проб "SKLO UNION TYP LT1"
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см,
полипропилен, кат. N 3120-0250, фирма "NALGENE"
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая
нестерильная                                               ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 куб. см                         ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные                            ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной
баней В-480, фирма "Buchi"
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000
куб. см                                                    ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100,
250 куб. см и 4000 куб. см ТС                              ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5,
длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки
0,25 мкм, фирма "J&W Scientific"
Насос диафрагменный FT.19, фирма "KNF Neu Laboport"
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 - 2000
куб. см                                                    ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной
колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической
колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные "красная лента"                           ТУ 6-09-1678-86
Шприц инъекционный однократного применения объемом
10 куб. см                                                 ГОСТ 24861-91
                                                           (ИСО 7886-84).

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К подготовке проб допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16, построение калибровочной кривой.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 часов. Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление подкисленного ацетонитрила.

К ацетонитрилу пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до pH ~= 1. При приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой.

7.2.1.2. Приготовление 2%-ного раствора сульфата натрия.

20 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 - 300 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Цимоксанила 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Цимоксанила в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой. Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Цимоксанила 10,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Цимоксанила 5,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Цимоксанила 2,5 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Цимоксанила 1,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Цимоксанила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 10,0; 5,0; 2,5 и 1,0 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика (мВ) от концентрации Цимоксанила в растворе (мкг/куб. см).

7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Цимоксанила на них

7.4.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.

Патрон Диапак С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Льюер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см ацетона, затем 10 куб. см гексана. Элюаты отбрасывают.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С

Из стандартного раствора Цимоксанила в ацетоне, содержащего 10,0 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:4, затем четырьмя порциями смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1 объемом 5 куб. см каждая, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие Цимоксанил, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Цимоксанила на них

7.5.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.

Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см ацетонитрила, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С16

Из стандартного раствора Цимоксанила в ацетоне, содержащего 10,0 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 10 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно четырьмя порциями смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 объемом 5 куб. см каждая, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие Цимоксанил, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Цимоксанила на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.1979, а также в соответствии с ГОСТ Р 51783-2001 "Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ".

Пробы целого растения лука и репки лука хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °С до 2-х лет.

9. Выполнение определения

9.1. Лук-перо и лук-репка

9.1.1. Экстракция

Образец измельченного зеленого лука (или лука-репки) массой 20 г помещают в банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют туда 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещают на механический встряхиватель на 30 минут. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещая на 15 минут на механический встряхиватель. Экстракты фильтруют и объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. Объединенный экстракт выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К водному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 50 куб. см 2%-ного раствора сульфата натрия, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят смыв в делительную воронку объемом 250 куб. см. Затем концентратор обмывают еще 50 куб. см 2%-ного раствора сульфата натрия и все смывы объединяют в делительной воронке.

Цимоксанил экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 40, 30 и 30 куб. см, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 куб. см хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку пробы на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16.

9.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 1 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 9 куб. см гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак С, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:4, элюат отбрасывают. Цимоксанил элюируют 15 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.4. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.3, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 10 куб. см воды, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак С16, элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают 15 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

9.2. Условия хроматографирования

    Хроматограф "Кристалл 5000.1" с термоионным детектором (ТИД) с пределом
                                                         -14
детектирования  по  фосфору  в  Паратион-метиле  3  х  10     г/куб.  см  и
приспособлениями  для  капиллярной колонки. Номер в государственном реестре
средств измерений 14516-95.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 (5% дифенил и 95% диметилполисилоксан), длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,7 мкм, фирма "НР".

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 100 °С, выдержка 1 минута, нагрев колонки по 20 градусов в минуту до температуры 170 °С, а затем по 25 градусов в минуту до 200 °С.

Температура испарителя - 200 °С, температура детектора - 300 °С.

Газ 1 - гелий (газ-носитель), давление на входе - 6 кПа, линейная скорость - 22,984 см/с, давление на выходе - 101,3 кПа; поток через колонку - 2,504 куб. см/мин.; мертвое время - 0,73 мин.

Газ 2 - гелий, режим - Split less, деление потока - 1:30 (сброс пробы), начало сброса - 30 секунд, длительность сброса - 2 минуты, расход во время анализа - 10 куб. см/мин.

Регулятор давления гелия - РРГ-10; регулятор расхода гелия - РРГ-11.

Газ 4 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 30 куб. см/мин.

Газ 5 - водород, расход во время анализа - 12 куб. см/мин.

Газ 6 - воздух, расход - 200 куб. см/мин.

Продувка детектора и испарителя азотом после анализа - по 50 куб. см/мин. в течение 3 минут при температуре колонки 250 °С. Расход газов: Г1 - 50; Г2 - 40; Г4 - 40 куб. см/мин.

Абсолютное время удерживания Цимоксанила: 6,01 мин. +/- 2%.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 1,0 - 10,0 нг.

10. Обработка результатов

Содержание Цимоксанила в пробах пера и репки лука рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                               S   х А х V
                                пр
                          Х = ------------- х P,
                              100 х S   х m
                                     ст

    где:
    Х - содержание Цимоксанила в пробе, мг/кг;
    S   - высота (площадь) пика стандарта, мВ;
     ст
    S   - высота (площадь) пика образца, мВ;
     пр
    А - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
    m - масса анализируемого образца, г (куб. см);
    P - содержание Цимоксанила в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                          2 |Х  - Х | х 100
                              1    2
                          ----------------- <= r,                       (1)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты параллельных определений, мг/кг;
     1   2
    r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма .
                                                                        r

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

              _
             (Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,

    где:
    _
    Х   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных
приемлемыми, мг/кг;
    ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                          _
                        ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

    где дельта - граница  относительной  погрешности  методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,05 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

    Величина добавки С  должна удовлетворять условию:
                      д

                       С  = ДЕЛЬТА  _ + ДЕЛЬТА  _ ,
                        д         л,Х         л,Х'

    где   +/-  ДЕЛЬТА  _  (+/-  ДЕЛЬТА  _ )  -  характеристика  погрешности
                     л,Х              л,Х'
(абсолютная  погрешность)  результатов  анализа, соответствующая содержанию
компонента  в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

                        ДЕЛЬТА  = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
                              л

    где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

                                          _
                        ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

    где дельта - граница  относительной  погрешности  методики  (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
    Результат контроля процедуры К  рассчитывают по формуле:
                                  к

                                  _    _
                             К  = Х' - Х - С ,
                              к             д

         _    _
    где  Х',  Х,  С   -  среднее  арифметическое  результатов  параллельных
                   д
определений  (признанных  приемлемыми  по  п.  11)  содержания компонента в
образце   с   добавкой,   испытуемом   образце   и   концентрация   добавки
соответственно, мг/кг.
    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                              _____________________
                             /     2            2
                       К = \/ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                   л,Х'         л,Х

    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
                                                            к
контроля (К).
    Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

                                |К | <= К,                              (2)
                                  к

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

                          2 |Х  - Х | х 100
                              1    2
                          ----------------- <= R,                       (3)
                              (Х  + Х )
                                1    2

    где:
    Х , Х  - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
     1   2
    R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,

табл. 1), %.

Приложение 1

ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ И ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИМОКСАНИЛА В ЛУКЕ-РЕПКЕ И ЛУКЕ-ПЕРО

---------+--------------+-----------------+-----------------------
¦ Среда  ¦Внесено, мг/кг¦Обнаружено, мг/кг¦Полнота определения, %¦
+--------+--------------+-----------------+----------------------+
¦Лук-    ¦0,5           ¦0,423            ¦84,6                  ¦
¦репка   +--------------+-----------------+----------------------+
¦        ¦0,25          ¦0,217            ¦86,6                  ¦
¦        +--------------+-----------------+----------------------+
¦        ¦0,125         ¦0,109            ¦87,5                  ¦
¦        +--------------+-----------------+----------------------+
¦        ¦0,05          ¦0,043            ¦85,3                  ¦
+--------+--------------+-----------------+----------------------+
¦Лук-перо¦0,5           ¦0,432            ¦86,3                  ¦
¦        +--------------+-----------------+----------------------+
¦        ¦0,25          ¦0,217            ¦86,8                  ¦
¦        +--------------+-----------------+----------------------+
¦        ¦0,125         ¦0,110            ¦88,0                  ¦
¦        +--------------+-----------------+----------------------+
¦        ¦0,05          ¦0,043            ¦86,6                  ¦
---------+--------------+-----------------+-----------------------

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: