- Законы
- Кодексы
- Форум
МУК 4.1.2771-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовых концентраций формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в желчи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
22 ноября 2010 года
Дата введения -
с момента утверждения
1. Разработаны Федеральным государственным учреждением науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Роспотребнадзора.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 N 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 22 ноября 2010 г.
4. Введены впервые.
1. Общие положения и область применения
Свидетельство о метрологической аттестации N 223.1.11.11.95/2009.
1.1. Методические указания по определению массовых концентраций альдегидов (формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида) и ацетона в желчи предназначены для использования территориальными органами и подведомственными организациями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, осуществляющими деятельность в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.
1.2. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием альдегидов и ацетона в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.
1.3. Формальдегид (HCHO), молекулярная масса 30,03.
Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) - бесцветный газ с резким раздражающим запахом. Температура кипения: -19,2 °C, плотность: 0,8153 г/куб. см. Хорошо растворим в воде, спиртах и других полярных растворителях. При низких температурах смешивается с неполярными растворителями (толуолом, диэтиловым эфиром, этилацетатом) [пункт 5 Приложения к настоящему МУК] <*>. Обладает раздражающим, сенсибилизирующим и кожно-резорбтивным действием, оказывает гепатотропный эффект, относится к веществам, обуславливающим канцерогенную опасность [3].
--------------------------------
<*> Далее по тексту ссылка на номер пункта Приложения указывается одним номером в квадратных скобках.
1.4. Ацетальдегид (CH CHO), молекулярная масса 44,05.
3
Ацетальдегид (уксусный альдегид) - бесцветная жидкость с удушающим запахом. Температура кипения: 20,16 °C, плотность: 0,778 г/куб. см. Смешивается во всех соотношениях с водой и большинством органических растворителей [1]. Оказывает наркотическое, раздражающее, мутагенное и канцерогенное действие [3].
1.5. Пропионовый альдегид (CH CH CHO), молекулярная масса 58,08.
3 2
Пропионовый альдегид (пропаналь) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 48,8 °C, плотность: 0,8058 г/куб. см. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями [4]. Оказывает наркотическое действие, вызывает изменения со стороны дыхательной системы, паренхиматозных органов, угнетает гемопоэз [3].
1.6. Масляный альдегид (CH (CH ) CHO), молекулярная масса 72,11.
3 2 2
Масляный альдегид (бутаналь) - бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом. Температура кипения: 75,7 °C, плотность: 0,817 г/куб. см [2]. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями. Оказывает наркотическое, раздражающее и кожно-резорбтивное действие [3].
1.7. Ацетон (CH COCH ), молекулярная масса 58,08.
3 3
Ацетон (диметилкетон) - летучая бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 56,1 °C, плотность: 0,792 г/куб. см [1]. Смешивается с водой и органическими растворителями (эфиром, хлороформом, бензолом, четыреххлористым углеродом). Обладает наркотическим и кожно-резорбтивным действием, угнетает репродуктивную функцию. Преимущественно действует на центральную нервную систему [3].
1.8. Диапазон измерений массовых концентраций альдегидов и ацетона приведен в табл. 1.
Таблица 1
НАЗВАНИЕ ОПРЕДЕЛЯЕМОГО ВЕЩЕСТВА И ДИАПАЗОНЫ ИЗМЕРЕНИЙ
-------------------------------------+------------------------------------- ¦ Название определяемого вещества ¦ Диапазон измерений, мкг/куб. см ¦ +------------------------------------+------------------------------------+ ¦Формальдегид ¦От 0,001 до 0,1 включ. ¦ +------------------------------------+------------------------------------+ ¦Ацетальдегид ¦-"- 0,001 -"- 0,1 -"- ¦ +------------------------------------+------------------------------------+ ¦Пропионовый альдегид ¦-"- 0,001 -"- 0,1 -"- ¦ +------------------------------------+------------------------------------+ ¦Масляный альдегид ¦-"- 0,001 -"- 0,1 -"- ¦ +------------------------------------+------------------------------------+ ¦Ацетон ¦-"- 0,01 -"- 2,0 -"- ¦ -------------------------------------+-------------------------------------
2. Приписанные характеристики погрешности измерений
Методика обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2.
Таблица 2
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ, ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ ПРЕЦИЗИОННОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
---------------+-------------+----------------+--------------+------------- ¦ Диапазон ¦Показатель ¦Показатель вну- ¦Показатель во-¦Показатель ¦ ¦ измерений, ¦повторяемости¦трилабораторной ¦спроизводимо- ¦точности <*>¦ ¦ мкг/куб. см ¦(относитель- ¦прецизионности ¦сти (относи- ¦(границы ¦ ¦ ¦ное значение ¦(относительное ¦тельное значе-¦относитель- ¦ ¦ ¦среднеквадра-¦значение средне-¦ние среднеква-¦ной погреш- ¦ ¦ ¦тического от-¦квадратического ¦дратического ¦ности при ¦ ¦ ¦клонения пов-¦отклонения внут-¦отклонения во-¦вероятности ¦ ¦ ¦торяемости), ¦рилабораторной ¦спроизводимо- ¦P = 0,95), ¦ ¦ ¦сигма , % ¦прецизионности),¦сти), сигма , ¦+/- дельта, ¦ ¦ ¦ r ¦сигма , % ¦ R ¦% ¦ ¦ ¦ ¦ Rл ¦% ¦ ¦ +--------------+-------------+----------------+--------------+------------+ ¦От 0,001 ¦6 ¦ 12 ¦15 ¦ 30 ¦ ¦до 0,01 включ.¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +--------------+-------------+----------------+--------------+------------+ ¦Св. 0,01 ¦5 ¦ 8 ¦10,5 ¦ 21 ¦ ¦-"- 0,1 -"- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +--------------+-------------+----------------+--------------+------------+ ¦-"- 0,1 ¦4 ¦ 5 ¦6 ¦ 12 ¦ ¦-"- 2 -"- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +--------------+-------------+----------------+--------------+------------+ ¦ <*> Соответствует относительной расширенной неопределенности¦ ¦измерений при коэффициенте охвата 2 ¦ ---------------------------------------------------------------------------
3. Сущность метода
Методика основана на предварительном переводе альдегидов и ацетона в производные 2,4-динитрофенилгидразина, концентрировании продуктов дериватизации из биологического материала экстракцией гексаном и количественном определении полученных гидразонов альдегидов и ацетона на жидкостном хроматографе с УФ-детектором.
Измерению не мешают спирты, органические кислоты, кетоны и другие альдегиды.
4. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, растворы и реактивы
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы:
4.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с УФ-детектором Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-01
Гири Г -210 ГОСТ 7328-01 2 Термометр стеклянный ГОСТ 28498-90 Микрошприцы МШ-1, МШ-10 ТУ 2.833.106-00 Цилиндр мерный вместимостью 50 куб. см ГОСТ 1770-74 Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 куб. см ГОСТ 29227-91 Пипетка градуированная вместимостью 0,1 куб. см ГОСТ 20292-74 Колбы мерные вместимостью 100, 200, 500, 1000, 2000 куб. см Термостойкий стакан вместимостью 2000 куб. см Пробирки мерные вместимостью 10 куб. см ГОСТ 1770-74 Редуктор кислородный ТУ 26-05-236-73 Стандартные образцы: Формальдегид в воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см ГСО 7347-96 Ацетон в воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см ГСО 8460-2003
4.2. Вспомогательные устройства
Колонка хроматографическая металлическая
(длина 80 мм, внутренний диаметр 2 мм)
с сорбентом Диасорб С зернением 5 - 6 - 7 мкм
16
Предколонка металлическая 12 x 1,5 мм,
заполненная сорбентом Диасорб С
16
Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон" ТУ 9443-001-245.23530-97
Дистиллятор ТУ 61-1-721-79
Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2 ТУ 16.531.743-83
Дефлегматор длиной 300 мм ГОСТ 25336-82
Холодильник шариковый ХШ-300 (6 шар.) ГОСТ 1770-74
Холодильник прямой ХПТ-3-300 ГОСТ 1770-74
Воронка Шотта (пор 16) ГОСТ 25336-82
Воронки делительные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 23932-90
Бюксы СВ 19/9 ТУ 92-891.029-91
Колбы для перегонки круглодонные вместимостью
1,0; 2,0 куб. дм ГОСТ 25336-82
Стакан термостойкий вместимостью 2 куб. дм ГОСТ 25336-82
Пробирки центрифужные пропиленовые
с завинчивающейся крышкой вместимостью
15 куб. см
Фильтры обеззоленные "Синяя лента" ТУ 2642-001-42624157-98
Универсальная индикаторная бумага pH 1,0 - 10,0 ПНД 50-975-84
4.3. Реактивы
Гексан для хроматографии, ос.ч. ТУ 6-09-4521-77 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ос.ч. ТУ 6-09-14-2167-84 Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72 Ацетальдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5% Пропионовый альдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5% Масляный альдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5% 2,4-динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ), ч. ТУ-6-09-2394-77 Кислота хлористоводородная (плотность 1,19), х.ч. ГОСТ 3118-77 Перманганат калия, ч. ГОСТ 20490-75 Спирт этиловый, ректификованный, из пищевого сырья ГОСТ Р 51652-2000 Калий двухромовокислый, ч.д.а. ГОСТ 4220-75 Серная кислота ГОСТ 4204-77 Уксусная кислота, х.ч. ГОСТ 61-75 Диэтиламин, ч., перегнанный для хроматографии ТУ 6-09-68-89
4.4. Материалы
Гелий газообразный ТУ 51-940-80
Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования, химических реактивов и материалов по метрологическим и техническим характеристикам, не уступающим перечисленным.
5. Требования безопасности
5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-76 [6] и ГОСТ 12.1.005-88 [7].
5.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают меры безопасности, указанные в "Руководстве по правилам эксплуатации прибора", правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 [8], противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 [9] и имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83 [10].
5.3. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.
5.4. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 от 01.05.2008 [11].
5.5. При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в Руководстве по правилам эксплуатации жидкостного хроматографа.
6. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоившие метод анализа и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности анализа.
7. Условия измерений
7.1. При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:
- температура воздуха 15 - 25 °C;
- атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.;
- влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °C.
7.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
8. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды и растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
8.1. Подготовка посуды
Используемую посуду замочить на 1 ч в хромовой смеси, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температуре 120 °C.
8.2. Подготовка растворителей
8.2.1. Очистка ацетонитрила от примесей. В колбу вместимостью 2 куб. дм
помещают 1 куб. дм ацетонитрила и 20 г KMnO , кипятят с шариковым
4
холодильником в течение 1 ч, затем перегоняют с дефлегматором при
температуре 81,6 °C, отбирая фракции по 200 куб. см. Когда в колбе
останется около 200 куб. см продукта, перегонку прекращают. Остаток можно
смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию (200 куб. см)
отбрасывают, а остальные проверяют на поглощение в УФ-области (оптическая
плотность при 200 нм не должна превышать 0,05 о.е./см).
8.2.2. Очистка диэтиламина от примесей. В колбу вместимостью 1,0 куб. дм помещают 0,5 куб. дм диэтиламина и перегоняют с прямым холодильником. Первые и последние порции (50 куб. см) отбрасывают, оставляют среднюю порцию. Перегнанный раствор должен быть бесцветным.
8.2.3. Очистка этилового спирта от альдегидов и кетонов. К 1 куб. дм 96%-ного спирта добавляют 2 г 2,4-динитрофенилгидразина, 0,5 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты и кипятят с шариковым холодильником 1 ч. Перегоняют с дефлегматором в приборе со стеклянными шлифами, отбрасывая первые и последние 100 куб. см, после этого отгоняют вторично.
8.3. Приготовление растворов
8.3.1. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 куб. дм насыпают 50 г хромовокислого калия, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 куб. дм концентрированной серной кислоты.
8.3.2. Элюент для хроматографии. 600 куб. см ацетонитрила смешивают с 400 куб. см дистиллированной воды. Смесь фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированием гелия в течение 5 мин. со скоростью 50 - 60 куб. см/мин. Добавляют 25 куб. см уксусной кислоты и 10 куб. см диэтиламина и перемешивают содержимое колбы. Срок хранения элюента 5 дней в стеклянной посуде с притертой пробкой в темном месте.
8.3.3. Хлористоводородная кислота, 2 моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 1 куб. дм, наполненную до половины объема дистиллированной водой, прибавляют 61,0 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,19 г/куб. см), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
8.3.4. 2,4-динитрофенилгидразин, 0,2%-ный раствор в 2 М растворе хлористоводородной кислоты. 0,2 г 2,4-динитрофенилгидразина вносят в мерную колбу на 100 куб. см и доводят до метки 2 М раствором хлористоводородной кислоты.
8.3.5. Исходный раствор альдегидов для градуировки (раствор A).
В мерную колбу объемом 500 куб. см, содержащую 450 куб. см дистиллированной воды, добавляют 5 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 4 куб. см ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/куб. см (4,0 мг) и реактивы по п. 4.3 в количестве 5,0 куб. мм (3,9 мг) ацетальдегида, 5,0 куб. мм (4,03 мг) пропионового альдегида, 5,0 куб. мм (4,08 мг) масляного альдегида и доводят дистиллированной водой до метки.
Градуировочные растворы готовят с предварительным охлаждением альдегидов и дистиллированной воды, которые выдерживают при температуре (-10 +/- 2) °C в течение 20 мин. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание альдегидов в растворе A составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): формальдегида - 8,0 мкг/куб. см; ацетальдегида - 7,8 мкг/куб. см; пропионового альдегида - 8,1 мкг/куб. см; масляного альдегида - 8,2 мкг/куб. см.
Исходный раствор ацетона для градуировки (раствор B). В мерную колбу объемом 200 куб. см, содержащую 180 куб. см дистиллированной воды, добавляют 5 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 5,0 куб. см (3,96 мг) ГСО ацетона и доводят водой до метки. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание ацетона в растворе B составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества) 19,8 мкг/куб. см.
8.3.6. Получение 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона. В колбу с притертой пробкой вместимостью 500 куб. см вносят 300 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, прибавляют 0,17 г формальдегида (для получения 2,4-ДНФгидразона ацетальдегида прибавляют 0,24 г ацетальдегида, пропионового альдегида - 0,38 г, масляного альдегида - 0,46 г, ацетона - 0,32 г), перемешивают и оставляют смесь на 12 часов. После выпадения окрашенного осадка 2,4-динитрофенилгидразона соответствующего альдегида или ацетона его отфильтровывают через фильтр "Синяя лента", промывают 100 куб. см 2 М раствора хлористоводородной кислоты, дистиллированной водой до нейтральной реакции среды, которую проверяют по индикаторной бумаге, высушивают на воздухе. Проверяют качество производного методом ВЭЖХ, приемлемый уровень чистоты 99,0% и выше. Если уровень чистоты неудовлетворительный, перекристаллизовывают гидразон из этилового спирта и повторяют проверку качества.
8.4. Подготовка хроматографической колонки
Колонку устанавливают на хроматограф и подают элюент, приготовленный в соответствии с п. 8.3.2, со скоростью 100 куб. мм/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.
8.5. Установление градуировочной характеристики
8.5.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от концентрации альдегидов и ацетона в желчи в диапазонах 0,001 - 0,020 мкг/куб. см и 0,02 - 0,50 мкг/куб. см - для альдегидов; 0,005 - 0,10 мкг/куб. см и 0,1 - 2,0 мкг/куб. см - для ацетона. Градуировочные характеристики устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из трех растворов, готовят из растворов A и B.
8.5.2. Для приготовления градуировочных смесей отбирается проба желчи объемом 125 куб. см (при сборе желчь хранится при температуре не выше 0 °C). В соответствии с п. 9 проводят анализ пробы желчи на содержание альдегидов. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их фоновое содержание при построении калибровки.
8.5.3. Градуировочные растворы готовят в мерных пробирках вместимостью 10 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят микрошприцем или микропипеткой растворы A и B в соответствии с табл. 3 и 4, доводят объем до 5 куб. см желчью и перемешивают. Анализируют свежеприготовленные растворы.
Таблица 3
РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В ЖЕЛЧИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,001 - 0,020 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 - 0,10 МКГ/КУБ. СМ
--------------------------------------------+-----T-----+-----T-----+------ ¦ Номер раствора ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ +-------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+-----+ ¦Объем раствора A, куб. мм ¦0,6 ¦1,2 ¦2,6 ¦6,0 ¦12,0 ¦ +-------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация формальдегида, ¦0,001¦0,002¦0,004¦0,010¦0,020¦ ¦мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация ацетальдегида, ¦0,001¦0,002¦0,004¦0,010¦0,020¦ ¦мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация пропионового ¦0,001¦0,002¦0,004¦0,010¦0,020¦ ¦альдегида, мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация масляного альдегида, ¦0,001¦0,002¦0,004¦0,010¦0,020¦ ¦мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +-------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+-----+ ¦Объем раствора B, куб. мм ¦2,6 ¦5,0 ¦12,6 ¦20,0 ¦25,0 ¦ +-------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см ¦0,01 ¦0,02 ¦0,05 ¦0,08 ¦0,10 ¦ --------------------------------------------+-----+-----+-----+-----+------
Таблица 4
РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В ЖЕЛЧИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,02 - 0,1 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,1 - 2,0 МКГ/КУБ. СМ
----------------------------------------------+----T----+-----T-----+------ ¦ Номер раствора ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ +---------------------------------------------+----+----+-----+-----+-----+ ¦Объем раствора A, куб. мм ¦12,0¦24,0¦36,0 ¦48,0 ¦60,0 ¦ +---------------------------------------------+----+----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация формальдегида, ¦0,02¦0,04¦0,06 ¦0,08 ¦0,10 ¦ ¦мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------------------------------------+----+----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация ацетальдегида, ¦0,02¦0,04¦0,06 ¦0,08 ¦0,09 ¦ ¦мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------------------------------------+----+----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация пропионового альдегида,¦0,02¦0,04¦0,06 ¦0,08 ¦0,10 ¦ ¦мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------------------------------------+----+----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация масляного альдегида, ¦0,02¦0,04¦0,06 ¦0,08 ¦0,10 ¦ ¦мкг/куб. см ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------------------------------------+----+----+-----+-----+-----+ ¦Объем раствора B, куб. мм ¦25,0¦50,0¦125,0¦250,0¦500,0¦ +---------------------------------------------+----+----+-----+-----+-----+ ¦Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см ¦0,1 ¦0,2 ¦0,5 ¦1,0 ¦2,0 ¦ ----------------------------------------------+----+----+-----+-----+------
В делительную воронку объемом 100 куб. см помещают 2,0 куб. см градуировочного раствора, разводят дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М растворе хлористоводородной кислоты, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения жидкостей верхний слой переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 5 мин. со скоростью 2800 об./мин., затем 2 куб. см гексана переносят в бюкс и высушивают в потоке воздуха до сухого остатка. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента и анализируют аликвотную часть (10 куб. мм) в условиях:
элюент - раствор, приготовленный по п. 8.3.2;
скорость движения элюента 100 куб. мм/мин.;
длина волны УФ-детектора 358 нм;
время удерживания:
2,4-динитрофенилгидразона формальдегида 4,1 +/- 0,2 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона ацетальдегида 5,0 +/- 0,2 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона ацетона 6,2 +/- 0,2 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона пропионового альдегида 7,5 +/- 0,2 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона масляного альдегида 8,5 +/- 0,2 мин.
Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:
n
SUM C / S
i=1 i i
K = -----------,
n
где:
C - концентрация вещества в градуировочном растворе, мкг/куб. см;
i
S - среднее значение пяти измерений площади пика i-ой концентрации,
i
расхождение между минимальным и максимальным значением которых не должно
превышать 4% относительно среднего значения S ;
i
n - количество градуировочных смесей (n = 5).
8.5.4. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация альдегида (ацетона) соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:
|X - C| <= 0,10 x C,
где:
C - заданная концентрация альдегида (ацетона) в градуировочном растворе;
X - результат измерения массовой концентрации альдегида (ацетона) в градуировочном растворе.
При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.
8.6. Отбор проб
Отбор проб желчи в объеме не менее 4 куб. см проводят в чистую пробирку с притертой пробкой. Срок хранения пробы в холодильнике 2 дня.
9. Выполнение измерений
9.1. Выполняют два параллельных измерения образца желчи. В делительную воронку 100 куб. см помещают 2,0 куб. см желчи, разбавляют дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М растворе хлористоводородной кислоты, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После отстаивания верхний слой переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 5 мин. со скоростью 2800 об./мин. После расслоения жидкостей 2 куб. см гексанового экстракта переносят в бюкс и высушивают в потоке воздуха до сухого остатка. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента, вводят в хроматограф аликвотную часть (10 куб. мм) и анализируют в условиях, указанных в п. 8.5.3.
9.2. Идентификацию хроматографических пиков 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и в растворах 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона, полученных согласно п. 8.3.6.
10. Обработка (вычисление) результатов измерений
10.1. Массовые концентрации альдегидов и ацетона в желчи (мкг/куб. см) вычисляют по формуле:
X = S x K,
l
где:
X - массовая концентрация вещества в анализируемой пробе, мкг/куб. см;
S - площадь пика соответствующего 2,4-динитрофенилгидразона альдегида
l
(или ацетона) на хроматограмме, е.о.п.;
K - градуировочный коэффициент.
_
10.2. За результат измерения X принимают среднее арифметическое
значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости
X , X (параллельных определений), для которых выполняется условие:
1 2
X + X
1 2
|X - X | <= 0,01 x r x -------, (1)
1 2 2
где r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл. 5.
Таблица 5
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ И КРИТИЧЕСКОГО ДИАПАЗОНА ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95
----------------+------------------+---------------------+----------------- ¦ Диапазон ¦Предел повторяемо-¦Критический диапазон ¦Предел воспроиз-¦ ¦ измерений, ¦сти (относительное¦(относительное значе-¦водимости (отно-¦ ¦ мкг/куб. см ¦значение допускае-¦ние допускаемого рас-¦сительное значе-¦ ¦ ¦мого расхождения ¦хождения между наи- ¦ние допускаемого¦ ¦ ¦между двумя резу- ¦большим и наименьшим ¦расхождения меж-¦ ¦ ¦льтатами измере- ¦четырех результатов ¦ду двумя резуль-¦ ¦ ¦ний, полученными в¦измерений, полученных¦татами измере- ¦ ¦ ¦одной лаборатории ¦в одной лаборатории в¦ний, полученными¦ ¦ ¦в условиях повто- ¦условиях повторяемо- ¦в разных лабора-¦ ¦ ¦ряемости), r, % ¦сти), CR (4), % ¦ториях), R, % ¦ ¦ ¦ ¦ 0,95 ¦ ¦ +---------------+------------------+---------------------+----------------+ ¦От 0,001 ¦17 ¦34 ¦42 ¦ ¦до 0,01 включ.¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+------------------+---------------------+----------------+ ¦Св. 0,01 ¦14 ¦22 ¦29 ¦ ¦-"- 0,1 -"- ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+------------------+---------------------+----------------+ ¦-"- 0,1 ¦11 ¦14 ¦17 ¦ ¦-"- 2 -"- ¦ ¦ ¦ ¦ ----------------+------------------+---------------------+-----------------
При невыполнении условия (1) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:
X + X + X + X
1 2 3 4
|X - X | <= 0,01 x CR (4) x -----------------, (2)
max,4 min,4 0,95 4
где CR (4) - критический диапазон. Значения критического диапазона
0,95
приведены в табл. 5.
При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1).
10.3. Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости:
_ _
X + X
_ _ 1 2
|X - X | <= 0,01 x R x -------, (3)
1 2 2
_ _
где X и X - результаты измерений массовых концентраций альдегидов и
1 2
ацетона, полученные в разных лабораториях, - средние арифметические двух
результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых
выполняется условие (1).
При выполнении условия (3) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости приведены в табл. 5.
11. Оформление результатов измерений
_
Результат измерения представляют в виде (X + ДЕЛЬТА), мкг/куб. см, где
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при P = 0,95, значение
ДЕЛЬТА рассчитывают по формуле:
_
дельта x X
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где значение дельта приведено в табл. 2.
В случае, если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание альдегида < 0,001 мкг/куб. см, содержание ацетона < 0,01 мкг/куб. см".
12. Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории
Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории организуют и проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 [12] и РМГ 76-2004 ГСИ [13].
Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
13. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок
Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения
результата отдельно взятой контрольной процедуры K с нормативом контроля
к
K.
Результат контрольной процедуры K рассчитывают по формуле:
к
_ _
K = |X' - X - C |,
к д
где:
_
X' - результат измерений массовой концентрации альдегида (или ацетона)
в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов
измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1);
_
X - результат измерений массовой концентрации альдегида (или ацетона) в
исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений,
полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1).
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_________________________
/ 2 2
K = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА ,
л,X' л,X
ср ср
2 2
где ДЕЛЬТА , ДЕЛЬТА - значения характеристики погрешности
л,X' л,X
ср ср
результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации
методики, соответствующие массовой концентрации альдегида (или ацетона) в
пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно.
Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений
при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения:
ДЕЛЬТА = 0,84 x ДЕЛЬТА, с последующим уточнением по мере накопления
л
информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.
Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:
K <= K. (4)
к
При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
14. Алгоритм проведения контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности
Контрольные процедуры при контроле промежуточной прецизионности получают с использованием рабочих проб желчи.
При реализации контрольной процедуры получают два результата
_ _
контрольных измерений (первичного X и повторного X ) массовой концентрации
1 2
альдегида (или ацетона) в условиях внутрилабораторной прецизионности.
Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия:
_ _
X + X
_ _ 1 2
|X - X | <= 0,01 x R x -------. (5)
1 2 л 2
Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 6.
Таблица 6
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛА ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ ПРЕЦИЗИОННОСТИ ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95
------------------------+-------------------------------------------------- ¦ Диапазон ¦ Предел внутрилабораторной прецизионности ¦ ¦измерений, мкг/куб. см ¦(относительное значение допускаемого расхождения ¦ ¦ ¦между двумя результатами измерений, полученными в¦ ¦ ¦ одной лаборатории в условиях внутрилабораторной ¦ ¦ ¦ прецизионности), R , % ¦ ¦ ¦ л ¦ +-----------------------+-------------------------------------------------+ ¦От 0,001 до 0,01 включ.¦34 ¦ +-----------------------+-------------------------------------------------+ ¦Св. 0,01 -"- 0,1 -"- ¦22 ¦ +-----------------------+-------------------------------------------------+ ¦-"- 0,1 -"- 2 -"- ¦14 ¦ ------------------------+--------------------------------------------------
Приложение
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Химическая энциклопедия/ Под. ред. И.Л. Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1988. Т. 1.
2. Химическая энциклопедия/ Под. ред. И.Л. Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1990. Т. 2.
3. Филов В.А., Тиунов Л.А. Справ.: Вредные химические вещества. Галоген- и кислородсодержащие органические соединения. С.-П.: "Химия", 1994.
4. Химическая энциклопедия/ Под. ред. Н.С. Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4.
5. Химическая энциклопедия/ Под. ред. Н.С. Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1999. Т. 5.
6. ГОСТ 12.1.007-76 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".
7. ГОСТ 12.1.005-88 "Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".
8. ГОСТ 12.1.019-79 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
9. ГОСТ 12.1.004-91 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".
10. ГОСТ 12.4.009-90 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".
11. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08 от 01.05.2008 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".
12. ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
13. РМГ 76-2004 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте:
Федеральное