МУК 4.2.2661-10. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Методы санитарно-паразитологических исследований. Методические указания

Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
23 июля 2010 года

1. Подготовлены: ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского ММА им. И.М. Сеченова; кафедра паразитологии, паразитарных и тропических болезней МПФ ППО ММА им. И.М. Сеченова; Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора; Центр паразитологии Института проблем экологии и эволюции имени А.Н. Северцова РАН; Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора; ФГУЗ ЦГиЭ в г. Москве; ВИГИС; Курский государственный университет; ФГУЗ ЦГиЭ в Ханты-Мансийском автономном округе; ФГУЗ ЦГиЭ в Тульской области.

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 23 июля 2010 г.

3. Введены взамен методических указаний "Методы санитарно-паразитологических исследований" МУК 4.2.796-99.

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы лабораторного контроля за объектами окружающей среды (почва, вода, бытовые и ливневые стоки, их осадки, навоз и навозные стоки, предметы обихода и другие), а также для проведения сертификационных испытаний приборов, установок отечественного и импортного производства (например, биотуалеты, водоочистные устройства индивидуального и коллективного пользования и другие) по паразитологическим показателям и определения эффективности средств и методов дезинвазии.

Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих санитарно-паразитологический контроль факторов внешней среды, а также могут быть использованы лабораториями организаций, осуществляющих производственный контроль, и научных учреждений, занимающихся изучением особенностей эпидемиологии паразитарных болезней и научно обосновывающих мероприятия по охране окружающей среды от загрязнения и защите здоровья населения.

2. Нормативные ссылки

2.1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 24 июля 2000 г. N 554 "Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании".

2.3. Постановление Правительства Российской Федерации от 30 июня 2004 г. N 322 "Об утверждении Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека".

2.4. СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней" и дополнение СП 1.3.2518-09.

2.5. СанПиН 3.2.1333-03 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".

2.6. СанПиН 2.1.7.573-96 "Гигиенические требования к использованию сточных вод и их осадков для орошения и удобрения".

2.7. СанПиН 2.1.7.1287-03 "Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы".

2.8. МУ 3.2.1756-03 "Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями".

2.9. МУ 2.1.7.730-99 "Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест".

2.10. ГОСТ Р 17.4.3-01.83 "Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб".

2.11. ГОСТ Р 17.4.4.02-84 "Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического и гельминтологического анализов".

2.12. ГОСТ Р 17.4.3.07-2001 "Охрана природы. Почвы. Требования к свойствам осадков сточных вод при использовании их в качестве удобрений".

3. Оборудование, расходные материалы, лабораторная посуда, реактивы

3.1. Оборудование

Шкаф вытяжной универсальный, обеспечивающий
биологическую и химическую защиту
Холодильник электрический бытовой
Термостат электрический (ТС-80 или аналогичный)
Центрифуги для исследования почвы, иловых осадков,
сточных вод, смывов напольные и (или) настольные
Световые микроскопы современного поколения со сменными
объективами (в том числе для иммерсионного
микроскопирования - x90, x100) и окулярами
Стереоскопический микроскоп (типа МБС)
Люминесцентный микроскоп "ЛЮМАМ" или его аналог
Осветитель к микроскопу ОИ-19 или другой аналогичный
Столик нагревательный к микроскопу
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса
точности, максимальный предел взвешивания 200 г
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса
точности, максимальный предел взвешивания 1 кг
Аппарат для встряхивания
Денсиметры (ареометры типа I (A1) с пределами
измерения от 1,000 до 1,600 кг/куб. м                          ГОСТ 1300-74
Приборы вакуумного фильтрования ПВФ-142/Э
или ПВФ-142/ЭМ, отборник флотанта
фильтрующий "ОФФ-25" или эквиваленты
Пробоотборник-концентратор "ПробоКонГ-СЭС"
или эквивалент
Пылесос, электрощетка
Моющий пылесос
Аппарат Бермана
Термовлагобарометр БМ-2
Часы песочные на 3 и 5 мин. или часы сигнальные
Дозаторы пипеточные П 1-0,1; П 1-0,5; П-1,0 мл
или аналогичные со сменными наконечниками                      ТУ 64-339-81

3.2. Расходные материалы

Пинцеты анатомические
Кисти жесткие (из щетины)
и мягкие (из волоса белки, колонка или соболя)
для живописи N 12 - 18
Штативы лабораторные для пробирок                            ТУ 61-1-707-80
Иглы препаровальные
Совки, шпатели, ложки, лопаты, бур Некрасова
Пластиковые мешки и пакеты
Мембранные фильтры с размером пор 1 - 4 мкм
и диаметром мембранного диска, соответствующим
размерам фильтродержателя фильтровального устройства
Трековые мембраны с размером пор от 0,5 до 5 мкм
Ситечки с металлической или капроновой сеткой
(размер ячеек 0,25 - 0,3 мм)
Резиновые груши разных размеров
Скальпели анатомические
Ножницы анатомические разных размеров
Счетная камера (для количественного учета
яиц гельминтов)
Маркер (карандаш) по стеклу
Лейкопластырь
Скотч
Клеенка и фартук клеенчатый
Перчатки резиновые
Весы для уравновешивания центрифужных пробирок
Кюветы эмалированные разных размеров
и почкообразные
Корнцанги
Пинцеты глазные
Штатив Бунзена
Треножник
Горелки газовые
Трубки резиновые
Сложная петля
Поплин, перкаль, сатин
Ножи почвенные
Сита почвенные с сеткой 0,25; 0,5; 1; 3 мм
Шпатели металлические
Шпатели пластмассовые

Калька и пергамент
Коробки картонные
Другие расходные материалы, в том числе перевязочные
(вата, марля, разовые полотенца, салфетки и пр.)

3.3. Лабораторная посуда

3.3.1. Стаканы стеклянные высокие с носиком
(ВН) номинальной вместимостью 50 - 100 мл                     ГОСТ 10394-63
Пробирки центрифужные градуированные
(ПЦГ) емкостью 10, 50, 100 и 250 мл                           ГОСТ 1770-64
Стекла предметные размером 25 x 75 мм; 60 x 120 мм
Стекла покровные размером 18 x 18; 24 x 24 мм                 ГОСТ 6672-99
Чашки биологические (Петри)                                   ГОСТ 25336-82
Емкости для отбора проб воды, осадков, навоза
и навозных стоков из нейтрального материала,
пригодные для обеззараживания принятыми методами:
канистры пластмассовые емкостью 1; 2; 5; 20 и 25 л;
стеклянные бутылки; фляги металлические
емкостью 30 - 35 л; эмалированные бидоны;
ведра 8 - 10 л; тазы, пластмассовые фляги
емкостью 20 - 40 л или пластмассовые баки
емкостью 50 л с диаметром более 40 см
Цилиндры измерительные с носиком 1-00, 1-25, 1-500            ГОСТ 1770-74
Колбы 2-50-2, 2-100-2, 1-1000                                 ГОСТ 1770-74
Капельница для многократной дозировки по Манну                ГОСТ 9876-61
Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы
емкостью 100; 500; 1000; 2000 мл с притертыми
или завинчивающимися крышками
Спиртовки лабораторные стеклянные
Цилиндры градуированные с носиком на 1,5 - 2,0 л
Стеклянные воронки разных размеров
Часовые стекла разных размеров
Стеклянные палочки
Пипетки градуированные от 1 до 10 мл
Банки стеклянные с притертыми или резиновыми
пробками разных размеров до 500 мл
Банки стеклянные широкогорлые до 2 л
Банки фарфоровые без крышек 500 мл
Бутыли (1 - 5 л) с тубусом для дезинфицирующих растворов
Пробирки химические
Кружки фарфоровые с ручками разных размеров
Ступки и пестики фарфоровые разных размеров
Мензурки на 100; 250; 500; 1000 мл
Кристаллизаторы стеклянные

3.4. Химические реактивы

Натрий едкий
Нитрат натрия, ч.д.а.
Нитрат калия (калиевая селитра)
Нитрат аммония или гранулированная селитра (аммиачная)
Хлорид цинка
Нитрат свинца
Формальдегид 40%-ный
Кислота соляная с массовой долей 3%
Масло касторовое
Сульфат железа
Сульфат меди
Спирт этиловый ректифицированный технический
Сульфат цинка семиводный, х.ч.
Сахароза, ч.д.а.
Сульфат магния, ч.д.а.
Тиосульфат натрия
Вода дистиллированная
Натрий хлористый, х.ч.
Изотонический раствор натрия хлористого
с массовой долей 0,85% (физиологический раствор,
жидкость Барбагалло)
Йод кристаллический, х.ч.
Калий йодистый, х.ч.
Эозин сухой, х.ч.
Метиленовый синий сухой, х.ч.
Кислота молочная, х.ч.
Панкреатин
Пепсин (возможен искусственный)
Трипсин
Натрий двууглекислый, ч.д.а.
Сульфат алюминия
Хлорное железо
Хлористоводородная кислота
Глицерин
Раствор Люголя
Ацетон
Бензол
Ксилол
Бриллианткрезилблау синий (1:10000)
Известь хлорная
Серная кислота
Калий двуххромовокислый
Иммерсионное масло
Хромпик
Метиленовый синий
Молочная кислота
Раствор йода спиртовой 5%-ный
Толуидиновый синий (1:1000)
Сафранин (1:10000 спирта 10 °C)
Индигокармин
Раствор пирогалловой кислоты 50%-ный
Нейтральрот (1:1000)
Акридиновый оранжевый
Корифосфин

Примулин
Аурамин
Сульфат берлерина
Трипафлавин
Риванол
Акрихин
Мертиолят

3.5. Насыщенные растворы

3.5.1. Для методов флотации используют насыщенные растворы с заданной плотностью, которые следует готовить непосредственно перед применением (табл. 1). Количество солей на 1 л воды для различных насыщенных растворов приводится в табл. 3. В случае хранения готовых насыщенных растворов перед проведением исследований необходимо проверять их плотность ареометром (денсиметром). Насыщенные растворы с плотностью ниже требуемой не использовать.

Таблица 1

НАСЫЩЕННЫЕ РАСТВОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ МЕТОДОВ ФЛОТАЦИИ

--------------------------+-------------------+----------------------------
¦   Насыщенный раствор    ¦     Плотность     ¦      Состав раствора      ¦
¦                         ¦                   +----------------+----------+
¦                         ¦                   ¦количество солей¦количество¦
¦                         ¦                   ¦                ¦   воды   ¦
+-------------------------+-------------------+----------------+----------+
¦Раствор нитрата натрия   ¦1,38 - 1,40        ¦нитрат натрия   ¦1 л       ¦
¦                         ¦                   ¦1000 г          ¦          ¦
+-------------------------+-------------------+----------------+----------+
¦Раствор нитрата аммония  ¦1,3                ¦нитрат аммония  ¦1 л       ¦
¦или гранулированной      ¦                   ¦1500 г          ¦          ¦
¦аммиачной селитры        ¦                   ¦                ¦          ¦
+-------------------------+-------------------+----------------+----------+
¦Раствор Брудастова       ¦в свежем растворе: ¦натриевая       ¦1 л       ¦
¦                         ¦1,47 - 1,48;       ¦селитра - 900 г,¦          ¦
¦                         ¦через 24 часа      ¦калиевая        ¦          ¦
¦                         ¦снижается до 1,40  ¦селитра - 400 г ¦          ¦
+-------------------------+-------------------+----------------+----------+
¦Раствор тиосульфата      ¦1,4                ¦1750 г          ¦1 л       ¦
¦натрия (гипосульфита     ¦                   ¦Na S O  x 5H O  ¦          ¦
¦натрия)                  ¦                   ¦  2 2 3     2   ¦          ¦
--------------------------+-------------------+----------------+-----------

3.5.2. Для приготовления насыщенных растворов насыпают соль в эмалированное ведро с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения. Раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка. Приготовленный раствор после остывания переливают в другие крупные емкости (бутыли). О насыщенности раствора судят по наличию на дне сосудов кристаллов соли и (или) измеряют ареометром его плотность. Образующийся на дне сосуда осадок используют при следующем приготовлении насыщенного раствора.

4. Методы исследования почвы

4.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

Периодичность (частота) санитарно-паразитологического исследования почвы зависит от цели лабораторного контроля.

Количество и размер пробных площадок на обследуемой территории закладывается с учетом эпидемиологической значимости объекта и его общей площади.

Отбор проб почвы для паразитологических анализов с целью оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения проводят не менее 1 раза в год.

Отбор проб почвы на территории детских, лечебно-профилактических учреждений и зон отдыха проводят не менее 2 раз в год - весной и осенью.

При изучении динамики самоочищения почвы от яиц гельминтов, цист кишечных простейших отбор проб проводят в течение первого месяца наблюдений еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.

Так, на территории расположения детских и лечебно-профилактических учреждений, игровых площадок, выгребов, мусорных ящиков и других объектов, занимающих небольшие площади, размер пробной площадки должен быть не более 5 x 5 м. При оценке качества почв сельскохозяйственных угодий учитываются характер источника загрязнения, возделываемой культуры и рельефа местности: на каждые 0,5 - 20,0 га территории закладывают не менее 1 пробной площадки размером 10 x 10 м.

С каждой пробной площадки отбирается 1 объединенная проба весом 200 г, состоящая из 10 точечных проб массой 20 г каждая. Точечные пробы отбирают на пробной площадке методом конверта, по диагонали или любым другим способом с таким расчетом, чтобы каждая проба представляла собой часть почвы, типичной для генетических горизонтов или слоев данного типа. Точечные пробы отбирают ножом, совком или шпателем из прикопок или почвенным буром Некрасова послойно с поверхности и глубины 10 - 20 см. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40 - 60 см) слоев почвы послойно. Объединенную пробу составляют путем смешивания 10 точечных проб, отобранных на одной пробной площадке.

Пробы помещают в банки с крышками или пакеты из клеенки, пластика, этикетируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.). В этикетке обязательно разборчиво указывается фамилия и должность отборщика пробы и представителя учреждения, на территории которого отбирались пробы. Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале, пронумерованы. В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по исключению возможности их загрязнения.

Паразитологический анализ проб почвы проводят в день доставки их в лабораторию. При невозможности немедленного проведения исследований пробы почвы хранят в холодильнике при температуре около 5 °C. Для исследования на цисты кишечных патогенных простейших почву без обработки хранят не более 2 суток; на яйца биогельминтов - до 7 суток, а на яйца геогельминтов - не более 1 месяца. Для предотвращения высыхания и развития личинок в яйцах геогельминтов почву увлажняют и аэрируют один раз в неделю, для чего пробы вынимают из холодильника и оставляют на 3 ч при комнатной температуре, увлажняют водой по мере потери влаги и снова помещают для хранения в холодильник. При необходимости хранения проб почвы более месяца применяют консервирующие средства: почву пересыпают в кристаллизатор, заливают жидкостью Барбагалло или 3%-ным раствором соляной кислоты, а затем ставят в холодильник.

Перед исследованием объединенную пробу почвы рассыпают на бумаге или кальке, разминают пестиком крупные комки, выбирают из нее корни растений, камни, насекомых, стекло, уголь, кости животных и др. Затем почву переносят в ступку, растирают пестиком и просеивают через сито с ячейками диаметром 1 мм. Этот материал исследуют на яйца гельминтов и на цисты простейших.

4.1.1. При обнаружении возбудителей гельминтозов определяют:

- вид возбудителя;

- жизнеспособность;

- экстенсивный показатель загрязнения (отношение числа положительных проб к числу исследованных проб);

- интенсивный показатель загрязнения (общее количество возбудителей в 1 кг или 100 г почвы);

- категория загрязнения почв (чистая, умеренно опасная, опасная, чрезвычайно опасная) в соответствии с СанПиН 2.1.7.1287-03.

4.2. Исследование почвы на яйца гельминтов. Метод Романенко (1996)

Ход исследования. Из объединенной пробы берут на исследование 4 порции по 25 г почвы, помещают их в центрифужные пробирки объемом 250 мл (в случае отсутствия таковых можно пользоваться пробирками объемом 80 - 100 мл, но помещать в них следует не более 15 г почвы) и заливают 3%-ным раствором натриевой или калиевой щелочи (в соотношении 1:1). После этого содержимое пробирок тщательно размешивают, отстаивают в течение 20 - 30 мин. и центрифугируют 5 мин. при 800 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, а почву промывают водой (1 - 5 раз, в зависимости от типа почвы: для песчаных и супесчаных - достаточно одной промывки, для глинистых, суглинистых, черноземных - от 2 до 5) до получения прозрачной надосадочной жидкости. После добавления очередной порции промывочной воды осадок на дне центирифужной пробирки тщательно перемешивают при каждом промывании. После промывки к почве добавляют насыщенный (плотность 1,38 - 1,40) раствор нитрата натрия. Объем насыщенного раствора зависит от величины стакана (пробирки): в 250 мл стаканы добавляют по 150 мл насыщенного раствора, в более мелкие пробирки, например объемом 80 - 100 мл соответственно 45 - 50 мл насыщенного раствора. Почву тщательно размешивают, полученную смесь центрифугируют. Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же насыщенным раствором соли до уровня на 2 - 3 мм ниже краев пробирок и накрывают предметными стеклами. Яйца гельминтов всплывают и концентрируются в поверхностной пленке насыщенного раствора. Очень важно исключить какую-либо потерю поверхностной пленки. Для этого между краем пробирки и предметным стеклом оставляют пространство шириной не более 10 мм, куда с помощью пипетки вносят насыщенный раствор соли до его соприкосновения с нижней стороной стекла, которое осторожно передвигают до полного покрытия центрифужной пробирки. Через 20 - 25 мин. отстаивания стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх, а на их место ставят другие (при необходимости и третьи). На предметные стекла с поверхностной пленкой наносят 1 - 2 капли 30%-ного раствора глицерина, накрывают их покровными стеклами, а затем микроскопируют. Для обнаружения яиц гельминтов препарат просматривают при увеличении в 80, а для определения степени их развития или деформации - в 400 раз.

При необходимости приготовленные препараты можно хранить в холодильнике до 5 - 7 суток, не допуская подсыхания. При подсыхании препаратов по краям покровных стекол добавляют несколько капель 30%-ного раствора глицерина.

Для оценки результатов число яиц, обнаруженных в 4-х порциях пробы, умножают на 10, получая показатель содержания яиц в 1 кг исследуемой почвы.

Эффективность метода колеблется от 59,6 - 83,1%, в среднем - 73,0%.

Для определения истинной обсемененности почвы яйцами аскарид и власоглава необходимо использовать поправочные коэффициенты для различных типов почв (табл. 2), для чего необходимо определить тип почвы, а затем умножить число обнаруженных яиц гельминтов одного вида на коэффициент для этого типа почвы и для данного вида гельминта. Тип почвы должен быть определен при отборе проб и указан в сопроводительных документах.

Таблица 2

ПОПРАВОЧНЫЕ КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИСТИННОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ПОЧВ ЯЙЦАМИ АСКАРИД И ВЛАСОГЛАВОВ

--------------------------------------------+------------------------------
¦                 Тип почвы                 ¦     Яйца геогельминтов      ¦
¦                                           +--------------+--------------+
¦                                           ¦   аскарид    ¦ власоглавов  ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Дерново-подзолистая (супесь)               ¦1,23          ¦1,43          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Дерново-подзолистая (суглинок)             ¦1,45          ¦1,50          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Торфяно-глоевые                            ¦1,84          ¦2,40          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Чернозем обыкновенный                      ¦1,60          ¦1,85          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Чернозем типичный                          ¦1,70          ¦2,30          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Чернозем выщелоченный                      ¦1,43          ¦2,10          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Чернозем каштановый (супесь)               ¦1,28          ¦1,95          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Чернозем каштановый (суглинок)             ¦1,64          ¦2,15          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Аллювиально-лугово-лесная                  ¦1,37          ¦1,65          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Сероземы                                   ¦1,39          ¦1,60          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Черноземная лесная коричневая              ¦1,49          ¦1,71          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Горная лесная бурая                        ¦1,54          ¦1,72          ¦
+-------------------------------------------+--------------+--------------+
¦Желтоземы                                  ¦1,79          ¦1,94          ¦
--------------------------------------------+--------------+---------------

Для обнаружения в почве яиц гельминтов, имеющих более высокую плотность (яйца описторхов, клонорхов), чем яйца аскарид и власоглавов, следует использовать насыщенный раствор хлорида цинка (плотность 1,78); яйца токсокар лучше выявляются при обработке почвы насыщенным раствором сульфата цинка или сульфата магния в смеси с 5%-ным раствором йодата калия.

Примечание.

При работе по данной методике необходимо строго соблюдать следующие требования:

1. Обязательность применения обезжиренных предметных стекол.

2. Обязательность контроля плотности насыщенного раствора с помощью ареометра (плотность должна быть не ниже 1,38 - 1,40).

В случае нарушения указанных требований, поверхностная пленка с яйцами гельминтов не прилипнет к стеклу, а скорость всплывания яиц гельминтов замедлится, и в указанные сроки они не достигнут поверхностной пленки.

Для эффективного использования рабочего времени исследователя рекомендуется: во время первого отстаивания смеси "почва с щелочью" проводить подготовку предметных и покровных стекол, запись в журнале; во время второго - "почвы с насыщенным раствором соли" - подготовку рабочего места для микроскопирования, уборку центрифуги и другого лабораторного оборудования.

После окончания проведения анализов использованную посуду (центрифужные пробирки, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки) замачивают в стиральном порошке и кипятят 15 - 20 мин., затем моют в чистой воде.

Стекла протирают хлопчатобумажной тканью и помещают для обеззараживания в смесь Никифорова (из расчета 1 мл смеси на 1 стекло), где они могут храниться длительное время.

Извлеченные из смеси Никифорова стекла протирают хлопчатобумажной тканью, заворачивают в бумагу небольшими партиями и стерилизуют.

4.3. Исследование почвы на яйца гельминтов. Метод Васильковой и Гефтер (1955)

Ход исследования. Из объединенной пробы берут навеску 50 г почвы, помещают в центрифужную пробирку емкостью 250 мл. Одновременно ведется обработка почвы из 4-х проб. Отобранные навески заливают 3%-ным раствором щелочи (NaOH, KOH) или 1%-ным раствором стирального порошка "Лотос" (или другим СМС) в соотношении 1:2 на 60 мин. для размягчения почвы. Содержимое пробирок тщательно перемешивают стеклянными палочками или электромешалкой в течение 5 мин., а затем центрифугируют 5 мин. при 800 - 1000 об./мин., надосадочную жидкость сливают (при обработке черноземной, торфяной почвы или илового осадка обработку щелочью повторяют и промывают от 1 до 5 раз в зависимости от типа почвы до получения прозрачной надосадочной жидкости). К осадку добавляют насыщенный раствор азотнокислого натрия (удельный вес 1,38 - 1,40) в соотношении 1:2, тщательно перемешивают стеклянной палочкой 5 мин., уравновешивают и центрифугируют 5 мин. при 800 - 1000 об./мин.

Эта процедура повторяется 3 раза. После каждого центрифугирования раствор над уплотненным осадком сливают в отдельную емкость для дальнейшего фильтрования.

Раствор фильтруют через мембранные фильтры "Владипор" типа МФАС-СПА диаметром 35 мм фильтровальной установкой ПВФ-35/2. С фильтра делают соскоб осадка покровным стеклом в каплю 50%-ного раствора глицерина и микроскопируют.

4.4. Исследование почвы на личинки гельминтов. Метод Бермана (1942)

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 20 г почвы и помещают на металлическую сетку (или ситечко для молока), которую устанавливают в аппарат Бермана. Последний представляет собой стеклянную воронку (диаметром 10 - 15 см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой пробиркой. Систему устанавливают в штатив, наполняют теплой (температура 45 - 50 °C) водой, а затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой.

Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 °C. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки. Через 3 - 4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Но лучше содержимое пробирки центрифугировать, а после этого исследовать осадок.

4.5. Исследование почвы на личинки гельминтов. Метод Супряга

Ход исследования. В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40 °C) физиологическим раствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 мин. жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под стереоскопическим бинокулярным микроскопом. По эффективности метод Супряга не уступает методу Бермана.

4.6. Дифференциальная диагностика личинок свободноживущих и паразитических нематод. Метод Корта

Принцип метода Корта заключается в воздействии на личинок нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду в чашку Петри или на часовое стекло. При добавлении 40%-ного раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5 - 8 мин., а паразитические остаются живыми в течение 15 - 20 мин., но подвижность их замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1:25 первые гибнут через 12 мин., тогда как вторые в 95% случаев остаются нормально подвижными.

4.7. Исследование почвы на цисты кишечных простейших. Метод Падченко (1992)

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 25 г почвы, помещают в фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема чистой водой. Смесь размешивают стеклянной палочкой и отстаивают в течение 15 мин. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей, а жидкую часть ее отсасывают сифоном в чистый цилиндр. Осадок повторно промывают (не менее 3-х раз), собирая промывные воды в одном цилиндре. Промывные воды отстаивают, через 24 ч надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в окрашенных раствором Люголя препаратах. С этой целью осадок тщательно встряхивают и одну каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом. Микроскопируют не менее 1 мл осадка с последующим пересчетом на его общий объем. Анализ осадка проводят в течение первых 2 - 3 суток после его получения.

Для того чтобы осадок длительное время оставался пригодным к исследованию (до 2-х месяцев), к нему добавляют консервант, содержащий мертиолят 0,0016 - 0,0018 г, 40%-ный раствор формалина, 10,4 - 0,9 г 96%-ного этилового спирта и физиологический раствор до 100 мл. Консервант добавляют к осадку в соотношении 1:2 и хранят в холодильнике.

Для приготовления мазков каплю исследуемой смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывают число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. При изучении исследуемого материала под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а дегенерирующие и мертвые цисты окрашиваются в желтый цвет. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом полностью прокрашиваются и имеют красный цвет. Жизнеспособные накапливают краску на поверхности цисты и имеют вид светящихся колец красного цвета.

5. Исследование воды

5.1. Исследование воды питьевого и хозяйственно-бытового назначения, в том числе воды плавательных бассейнов и аквапарков

Исследование воды регламентируется методическими указаниями МУК 4.2.1884-04 "Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов" и МУК 4.2.2314-08 "Методы санитарно-паразитологического анализа воды".

6. Исследование бытовых и ливневых стоков

6.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

Пробы сточных вод отбирают на входе и выходе с очистных сооружений (механическая очистка, аэро- и биостанции, компактные установки, биологические пруды, поля фильтрации), на полях орошения и в местах сброса их в поверхностные водоемы.

Количество сточных вод на одну пробу должно быть не менее: неочищенной (до поступления на очистные сооружения) - 1 л, после сооружений механической очистки - 3 л, в остальных случаях - 10 л.

Отбор проб сточных вод проводят в резиновых перчатках при помощи емкостей 200 - 500 мл. Отдельные порции сточных вод сливают в широкогорлые пластиковые или стеклянные емкости соответствующего объема.

При определении эффективности работы очистных сооружений по паразитологическим показателям следует строго соблюдать следующее правило: после отбора проб входящей на очистные сооружения сточной воды, последующие пробы отбирают с учетом времени ее нахождения на каждом этапе очистки, т.е. после первичных отстойников - через 2,5 ч, аэротенков - 8,5 ч, вторичных отстойников - 10,5 ч, хлораторной - через 11 ч.

При определении роли дождевого или паводкового стоков в обсеменении поверхностных водоемов яйцами гельминтов и цистами кишечных простейших пробы их отбирают из естественных водотоков во время дождей по окраинам населенных пунктов или в местах перед их попаданием в водоемы. Пробы воды отбирают отдельными порциями (кружками или банками) по 0,5 л из движущегося потока в широкогорлую стеклянную или пластиковую посуду с крышкой. Объем пробы - 1 л.

Можно отбирать пробы поверхностного стока и другим способом. По основным водотокам устраивают так называемые "ловушки" - ямы размером 0,5 x 0,5 x 0,1 м. Во время дождя в них происходит накопление воды поверхностного стока, из которой и отбирают пробы. При этом отбирают как воду - во флаконы, так и поверхностный слой почвы (0,1 - 1,0 см) - в пластиковые пакеты (200 г на пробу).

Пробы этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию, где их хранят в прохладном месте не более суток. В этикетке обязательно разборчиво указывается фамилия и должность отборщика пробы и представителя учреждения, на территории которого отбирались пробы.

6.2. Исследование сточной воды на яйца гельминтов. Метод Романенко (1996)

Ход исследования. В каждую пробу сточных вод добавляют один из следующих коагулянтов: сульфат алюминия, сульфат железа, сульфат меди в дозе 0,5 - 0,6 г/л и тщательно размешивают. Полное осветление стоков наступает через 40 - 50 мин.

После слива надосадочной жидкости осадок помещают (равномерно распределяя) в пробирки объемом 100 - 250 мл и центрифугируют в течение 3 мин. при 1000 об./мин. Воду сливают, а к осадку добавляют 2 - 4 мл 3%-ного раствора соляной кислоты для растворения хлопьев коагулянта.

Смесь размешивают и центрифугируют, жидкость сливают, а осадок обрабатывают по методике Романенко для исследования почвы.

Для облегчения доставки проб сточных вод и сокращения времени на ее первичную обработку внесение коагулянта можно производить сразу после доставки сточной воды в лабораторию. Коагулянт можно добавлять в сосуд для сбора проб до отбора проб, коагуляция начинается сразу же после заполнения посуды водой. В этом случае в лабораторию доставляют только осадок сточных вод, который и обрабатывают. Эффективность метода составляет 82 - 91%, в среднем - 86%.

6.3. Исследование сточной воды на цисты кишечных простейших. Метод Падченко (1992)

Ход исследования. Пробы сточной воды отстаивают в течение 12 - 16 ч, затем надосадочную жидкость сливают, осадок переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 5 мин. при 1000 об./мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок переносят на предметное стекло, добавляют консервант (п. 4.7) и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом.

Жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются в составе этих консервантов неокрашенными. Дегенерирующие цисты окрашиваются красителем в фиолетовый цвет. Эффективность метода в среднем 90%.

7. Исследование донных отложений и осадка сточных вод

7.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

Пробы донных отложений отбирают в поверхностных водоемах выше, ниже и непосредственно в месте сброса в них сточных вод, их осадков, навозных стоков, а также в местах водозабора и попадания стоков с поверхности территорий населенных пунктов, индивидуальных и фермерских хозяйств.

Для отбора проб применяют различные системы пробоотборников: дночерпатели, драги и трубки различных конструкций. Отбор проб донных отложений ручным или механизированным способом проводят с берега или с различных плавсредств. Пробы объемом 200 г помещают в широкогорлые стеклянные или пластиковые емкости с крышками, этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию, где их хранят в холодильнике. Требования к этикетированию такие же, как и к пробам почвы и воды (см. выше).

Пробы "сырых" (97 - 98% влажности) осадков сточных вод из первичных и вторичных отстойников, а также с иловых площадок очистных сооружений берут с помощью черпака или кружки отдельными порциями по 100 - 200 мл и сливают в широкогорлые стеклянные или пластиковые сосуды объемом 1 л с притертыми или завинчивающимися крышками.

Пробы обезвоженных (до 70% влажности) осадков сточных вод берут совком или лопатой навесками по 50 г с 4 - 5 мест иловых площадок (2 - 3-летнего выдерживания осадка), компостных буртов, объединяют в одну пробу массой 200 г. Пробы помещают в пластиковые пакеты или баночки с крышками, этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию. Хранение доставленных в лабораторию проб донных отложений или осадка сточных вод возможно не более 2 суток.

7.2. Исследование осадков сточных вод и донных отложений на яйца гельминтов. Метод Романенко (1996)

Ход исследования. Из объединенной пробы осадка сточных вод берут 4 навески по 25 г (можно использовать мерную ложку) и помещают в центрифужные пробирки объемом 250 мл, добавляют 150 мл чистой воды и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Смесь центрифугируют 5 мин. при 1000 об./мин., затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку вновь доливают 150 мл чистой воды. Промывку проводят 3 - 5 раз, до получения чистой надосадочной жидкости. Промытый осадок исследуют методом Романенко для исследования почвы на яйца гельминтов.

"Сырой" осадок сточных вод обезвоживают: 100 - 150 мл осадка помещают в центрифужные пробирки объемом 250 мл (в пробирки объемом 100 мл по 30 - 45 мл материала) и центрифугируют в течение 5 мин. при 1000 об./мин. Воду сливают, а к осадку доливают такую же порцию чистой воды и размешивают стеклянной палочкой в течение 1 - 2 мин., снова центрифугируют. Промывку осадка проводят 2 - 3 раза.

Промывку обезвоженных (влажность 70% и ниже) осадков сточных вод проводят аналогичным способом при тех же технологических режимах, помещая в центрифужные пробирки объемом 250 мл по 25 г осадка и 150 мл чистой воды.

После промывки к полученному осадку в каждую центрифужную пробирку добавляют по 3 - 5 г чистого песка, тщательно размешивают и исследуют на яйца гельминтов по методике Романенко Н.А. "Исследование почвы на яйца гельминтов" (п. 4.2).

7.3. Исследование осадков сточных вод и донных отложений на цисты кишечных простейших. Метод Падченко (1992)

Ход исследования. Пробу осадка сточных вод 98% влажности объемом 1 л или 0,2 кг при плотной его консистенции (70% влажности) тщательно растирают пестиком в большой фарфоровой ступке, постепенно добавляя к нему водопроводную воду до общего объема 1,5 л. Полученную взвесь выливают в цилиндр емкостью 2,0 л и отстаивают. Через 15 мин. надосадочную жидкость переливают в цилиндр емкостью 5,0 л, а осадок повторно отмывают (2 - 3 раза) чистой водой путем встряхивания в цилиндре емкостью 2,0 л. Полученную при отмывании и собранную в большом цилиндре жидкую часть отстаивают 24 ч, надосадочную жидкость удаляют, а осадок исследуют, окрашивая раствором Люголя или акридиновым оранжевым (п. 4.7).

8. Исследование навоза и навозных стоков

8.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

Точечные пробы жидкого навоза и навозных стоков берут из навозосборников, навозоотстойников отдельными порциями по 0,1 - 0,2 л из 5 - 10 точек. Объединенную пробу жидкого навоза или навозных стоков объемом 1 л помещают в широкогорлый стеклянный или пластиковый сосуд с притертой пробкой или завинчивающейся крышкой. Обезвоженную твердую фракцию (влажность до 70%) навоза массой 200 г помещают в полиэтиленовые пакеты или баночки. Пробы этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию.

При невозможности исследования проб навоза в день доставки в лабораторию, допускается их хранение в холодильнике или в другом месте при температуре от 0 до 20 °C в течение 2 суток. Чтобы не допустить развития в навозе и навозных стоках гнилостных процессов в пробы добавляют 3 - 5 капель толуола.

8.2. Исследование навоза и навозных стоков на яйца гельминтов. Метод Романенко и Черепанова

Ход исследования. В фарфоровую ступку помещают 100 г твердой фракции навоза, добавляют 900 мл воды и перемешивают. Полученную смесь навоза, так же как и пробу навозных стоков, фильтруют через двойной слой марли, уложенный на металлический каркас. Фильтрат переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 3 мин. при 1500 об./мин. Надосадочный слой сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор нитрата натрия и снова центрифугируют. После этого в пробирки добавляют тот же флотационный раствор (до образования мениска), покрывают обезжиренными предметными стеклами, а через 20 мин. их снимают и микроскопируют поверхностную пленку.

9. Исследование снега

9.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

Пробы снега отбирают в специальные мешочки-фильтры. Они представляют собой устройство в виде мешочка-кисета круглой формы радиусом 30 - 50 см, сшитых из сатина, репса, перкали, бязи с ячейками диаметром 0,08 - 0,04 x 0,04 - 0,012 мм. По краю мешочки подогнуты и прошиты для шнура, затягивающего их. Мешочки со снегом выдерживают при комнатной температуре в подвешенном состоянии над тазами. После таяния снега на дне мешочков остается осадок. Дно мешочков смачивают глицерином, мешочки складывают, упаковывают в полиэтиленовые пакеты, доставляют в лабораторию, где до их исследования хранят в холодильнике. Требования к этикетированию проб снега такие же, как и к этикетированию другого материала (воды, почвы и пр.)

9.2. Исследование снега. Метод Чернышовой (1996)

Ход исследования. В лаборатории осадок из мешочков смывают небольшим (0,5 л) количеством воды. Смывные воды разливают в пробирки объемом 250 мл и центрифугируют 15 мин. при 1500 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок переносят на предметные стекла и микроскопируют.

10. Исследование смывов с поверхностей

10.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

При определении обсемененности возбудителями паразитарных болезней предметов обихода смывы берут с посуды, скатертей или клеенок, мебели, ковров, нательного и постельного белья, халатов, спецодежды, ночных горшков, игрушек, дверей, парт, спортивного инвентаря, поручней, а также с рук детей, персонала детских учреждений, работников пищеблока, официантов, поливальщиков на оросительных системах с использованием сточных вод, их осадков, животноводческих стоков, персонала водоочистных и канализационных очистных сооружений.

Смывы берут в столовых, магазинах, детских дошкольных и школьных учреждениях, оздоровительных и спортивных лагерях, детских домах, лечебно-профилактических учреждениях, общежитиях, парикмахерских, плавательных бассейнах, спортивных залах, банях, фермах, теплицах, маслозаводах, мясокомбинатах, мастерских по выделке шкур и пошиву меховых изделий.

При взятии проб нужно соблюдать определенную очередность. Например, в детских учреждениях пробы вначале берут в пищеблоке, а затем в столовой, игровой комнате, спальне, умывальной и, в заключение, в санузле.

Для отбора смывов применяют кисточки из щетины, беличьи кисточки, смоченные в 1%-ном растворе едкого натра, или в 10%-ном растворе глицерина, или 1%-ном растворе стирального порошка. В центрифужные пробирки наливают до половины объема 10%-ный раствор глицерина. Для каждой группы предметов берут отдельную пробирку и кисточку, которые нумеруются (номер кисточки и пробирки должны совпадать). В одну пробу, то есть в пробирку, можно собирать смывы с нескольких однородных предметов.

Смывы с рук персонала берут у каждого отдельно, чтобы при обнаружении яиц гельминтов или (и) цист кишечных простейших можно было знать, какой именно сотрудник нарушает правила гигиены.

Для снятия яиц гельминтов с рук рекомендуется мыть их раствором питьевой соды или 1%-ным раствором едкого натра; смывные воды центрифугируют, осадок можно также профильтровать в аппарате Гольдмана и затем исследовать фильтры.

При взятии смывов с поверхностей кисточкой, смоченной в растворе, многократно и с нажимом проводят по поверхности однородных предметов обследуемого объекта (стулья, столы, подоконники, ручки дверей и др.). Причем кисточку в процессе отбора часто и тщательно ополаскивают в пробирке, и вновь делают смывы с поверхности предметов. Площадь исследуемой поверхности для одной пробы смывов составляет не менее 0,25 кв. м (0,5 x 0,5 м); для одной пробы смывов с однородных предметов обрабатывают не менее 10 тарелок, кукол, ручек дверей и пр.

После отбора проб пробирки с вложенными в них кисточками в штативах доставляются в лабораторию. Этикетирование целесообразно проводить не для каждой отдельной пробирки, а списком для штатива.

10.2. Исследование смывов на яйца гельминтов. Метод центрифугирования

Ход исследования. Кисточки со смывами ополаскивают в жидкости пробирки. Центрифугируют полученные пробы в этих же пробирках, надосадочную жидкость сливают. Осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют. Плотный осадок делят на несколько предметных стекол.

10.3. Исследование смывов на яйца гельминтов

Ход исследования. В пробирку со смывом добавляют 5 - 6 мл флотационного раствора, в котором тщательно и многократно промывают кисточку в течение 3 - 5 мин. вертикальными и круговыми движениями, после чего кисточку сразу удаляют из пробирки.

В пробирку доливают флотационный раствор до образования выпуклого мениска, накрывают ее обезжиренным покровным стеклом до полного соприкосновения с поверхностной пленкой раствора. Время экспозиции 12 - 15 мин. При использовании флотационного раствора хлорида натрия - 20 - 25 мин. Затем покровное стекло снимают пинцетом и полученную висячую каплю на покровном стекле аккуратно переносят на предметное стекло в каплю 50% глицерина. Полученный препарат микроскопируют при 80 - 150-кратном увеличении.

Готовить пробы к исследованию одновременно следует партиями не более 5 - 6 пробирок, так как при большом количестве пробирок увеличивается время экспозиции, и яйца, поднявшиеся в поверхностную пленку, покрываются кристаллами соли, что затрудняет их обнаружение.

10.4. Исследование смывов на цисты простейших. Метод Романенко

Ход исследования. Кисточки со смывом ополаскивают в жидкости пробирки, затем сливают эту жидкость в высокий цилиндр емкостью 0,5 - 1,0 л с чистой водой, которую наливают с таким расчетом, чтобы при добавлении смыва не превысить общую емкость цилиндра. Всплывшие на поверхность жидкости кусочки бумаги, ткани и другие крупные частицы удаляют петлей с сеткой, а оставшуюся жидкость отстаивают в течение 12 - 16 ч, надосадочную жидкость удаляют, а осадок микроскопируют, окрашивая раствором Люголя или акридиновым оранжевым (п. 4.7).

11. Исследование смывов с поверхностей инструментальным методом. Метод Гузеевой (2008)

Метод предназначен и эффективен для исследования санитарно-паразитологического состояния больших площадей объектов санитарного надзора, перечисленных в п. 10.1 (больших площадей полов, дверей, предметов обихода, большого числа людей, например персонала или детей и т.п.), когда он дает значительное снижение трудоемкости по сравнению с методом тампонов и кисточек. Кроме того, возможность исследования больших площадей повышает надежность обнаружения возбудителей паразитарных заболеваний. Целесообразность применения именно этого метода определяет исполнитель исходя из вышеуказанных конкретных условий.

11.1. Инструментальное исследование паразитарной обсемененности помещений, мебели, полов, перил, постельных принадлежностей и спецодежды

Необходимое оборудование и материалы.

Пробоотборник-концентратор гидробиологический типа "ПробоКонГ-СЭС", или аналог, пластмассовая емкость для выполнения фильтрования 20 - 50 л, диаметр дна 35 - 40 см, например пластмассовый (для большей электробезопасности) таз круглый с ручками емкостью 32 литра, ГОСТ Р 50962-96, арт. 202, производства ОАО "Полимербыт", или аналог, моющий пылесос (типа Thomas Bravo 20S Aquafilter, Thomas Twin TT Aquafilter, Philips FC 6844 Triatlon), моющее средство для посуды типа "Ферри", вода питьевая, ткань фильтровальная типа мельничного газа.

Ход отбора пробы.

Тщательно промытый моющий пылесос заправляют питьевой водой, добавляют в нее моющее средство из расчета 5 - 10 капель средства на каждые 10 литров воды и пылесосят исследуемые объекты или по группам, или подряд в режиме влажной уборки, а объекты, не допускающие влажной уборки, - в режиме сухой уборки (отключив распыление воды). Всасываемый воздух или воздушно-водяная смесь с захваченными с объекта частицами поступают в аквафильтр, где задерживаются водой. Моющий раствор из пылесоса процеживают от грубых загрязнений через капроновую ткань (типа мельничного газа) в тщательно вымытую емкость. Пылесос перед отбором следующей пробы тщательно моют. В пластмассовую емкость (20 - 50 л) набирают примерно 10 - 20 литров питьевой воды с добавкой 5 - 10 капель "Ферри" на каждые 10 литров, надевают на головку насоса "ПробоКонГа" защитный предфильтр (обычно входит в комплект "ПробоКонГа" или запрашивается в фирме-производителе прибора), помещают его на дно емкости с питьевой водой, присоединяют подающий шланг к прибору через его собственный (входящий в комплект) входной предфильтр. Направляют выходной и сбросовый шланги прибора в емкость с насосом и запускают фильтрование питьевой воды по инструкции к "ПробоКонГу" по схеме рециркуляции. Затем выливают моющий раствор пылесоса в фильтровальную емкость с раствором "Ферри" в питьевой воде и записывают показания счетчика прибора. Поддерживают рабочее давление фильтрации по инструкции к прибору 3 - 4 атмосферы. Фильтрование заканчивают по инструкции к прибору, когда через счетчик прибора пройдет не менее 3-х объемов смеси моющего раствора пылесоса и раствора "Ферри" в питьевой воде, находящейся в емкости для фильтрования.

Паразитарные объекты при этом улавливаются порошковым фильтром прибора. Концентрат ПробоКонГа обрабатывают и исследуют на наличие паразитарных объектов как концентрат питьевой воды по МУК 4.2.2314-08.

11.2. Исследование паразитарной обсемененности пластмассовых и резиновых игрушек инструментальным методом

Необходимое оборудование и материалы.

ПробоКонГ-СЭС, или эквивалент, пластмассовый (для большей электробезопасности) таз круглый, с ручками, емкостью 32 литра, ГОСТ Р 50962-96, арт. 202, производства ОАО "Полимербыт", или эквивалент емкостью 25 - 40 л, с диаметром дна 35 - 40 см (для размещения насоса ПробоКонГа), моющее средство для посуды "Ферри" ("FAIRY" или эквивалент), вода питьевая.

Ход отбора пробы.

На дно емкости кладут насос "ПробоКонГа", заливают примерно 20 л питьевой воды, добавив к ней средство для мытья посуды "Ферри" из расчета 5 - 10 капель на каждые 10 литров воды, выходной и сбросовый шланги ПробоКонГа направляют в емкость так, чтобы потоки воды могли омывать сверху игрушки. Запускают по инструкции к прибору фильтрование моющего раствора по схеме рециркуляции. Устанавливают по манометру давление 2 - 3 атмосферы и бросают в емкость исследуемые игрушки в таком количестве, чтобы они не препятствовали интенсивному перемешиванию раствора. Моют игрушки 5 - 10 мин., вылавливают их и помещают в емкость новую партию. Повторяют эту операцию по мере необходимости. После этого устанавливают давление фильтрации 3 - 4 атмосферы, профильтровывают по счетчику примерно 60 литров моющего раствора и прекращают операцию по инструкции к прибору. При этих процедурах за счет вибрации насоса и интенсивных потоков воды паразитарные объекты смываются с игрушек и улавливаются порошковым фильтром ПробоКонГа. Концентрат далее обрабатывают и исследуют на наличие паразитарных объектов, как концентрат питьевой воды по МУК 4.2.2314-08.

11.3. Исследование групповой паразитарной обсемененности рук персонала и детей

Необходимое оборудование и материалы.

"ПробоКонГ-СЭС", или аналог, емкость на 10 л и более для сбора смыва, моющее средство, пластмассовая (для большей электробезопасности) емкость для выполнения фильтрования (20 - 50 л) предпочтительно с диаметром дна 35 - 40 см (для удобного размещения насоса ПробоКонГа), вода питьевая.

Ход отбора пробы.

Персонал по очереди моет руки питьевой водой с моющим средством для мытья посуды "Ферри" (нельзя применять мыло - оно забивает фильтр прибора) над тазом для сбора смывов. В тщательно вымытую пластмассовую емкость для проведения фильтрования набирают питьевой воды примерно 20 литров и запускают ее фильтрование по схеме рециркуляции при 2 - 3 атмосферах. Затем помывочные воды из таза выливают в емкость для фильтрования и записывают показания счетчика прибора. Фильтрование заканчивают, когда через счетчик пройдет не менее чем тройной объем (примерно 60 - 80 л) смеси питьевой воды и помывочного раствора. Концентрат смыва обрабатывают и исследуют на наличие паразитарных объектов, как пробу питьевой воды по МУК 4.2.2314-08. При обнаружении паразитарных объектов проводят обследование для выявления индивидуальных носителей по п. 10.1. После выполнения смыва по п. 11 емкость промывают и заполняют питьевой водой с добавкой 5 - 10 капель моющего средства на каждые 10 литров. Помещают в нее насос прибора, выходной и сбросовый шланги направляют в слив, включают насос, кранами прибора устанавливают "на глаз" примерно равные потоки через выходной и сбросовый шланги и откачивают моющий раствор из емкости до уровня, чтобы насос оставался покрытым водой, выключают насос, достают его из емкости и освобождают от раствора, остатки моющего раствора выливают из емкости. Промывают элемент Крапухина по инструкции к прибору. Прибор и емкость для выполнения смыва готовы к следующему отбору пробы.

12. Исследование твердых бытовых отходов

12.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

Пробы твердых бытовых отходов берут в коммунальных и индивидуальных домовладениях, детских дошкольных и школьных учреждениях, больницах (инфекционные отделения), мусоросортировочных и мусороперерабатывающих заводах.

Используют два способа отбора проб:

а) из недробленых твердых бытовых отходов отбирают крупные предметы, в т.ч. бумагу, тряпки, кости, не имеющие признаков фекального загрязнения, а из оставшейся массы отбросов для исследования отбирают 200 - 250 г;

б) из дробленых твердых бытовых отходов, предназначенных и для химического исследования, пробы берут также в количестве 200 - 250 г.

Пробы твердых бытовых отходов помещают в целлофановые пакеты, этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию.

12.2. Исследование твердых бытовых отходов на яйца гельминтов

Ход исследования. Пробу недробленых твердых бытовых отходов помещают в большой кювет с 1,0 - 1,5 л воды. Тщательно отмывают и ополаскивают наиболее крупные части отходов и удаляют их. Шероховатые и сильно загрязненные объекты обмывают кисточкой в той же воде и также удаляют. Промывные воды переливают в 2 - 3-литровую банку с широким горлом и с притертой, резиновой или корковой, покрытой полиэтиленовой пленкой, пробкой.

Пробу дробленых твердых бытовых отходов помещают в 2 - 3-литровую банку с 1,0 - 1,5 л воды и замачивают в течение 1 ч.

Банки со смывными водами или дроблеными бытовыми отходами встряхивают в аппарате для встряхивания или вручную в течение 15 - 20 мин. и оставляют на 1 ч для отстаивания. Затем верхний слой жидкости сливают, стараясь удалить все, что всплыло на поверхность. Остаток жидкости разливают в крупные центрифужные пробирки объемом от 60 до 250 мл (в зависимости от типа центрифуги), банку ополаскивают небольшим количеством воды, последнюю разливают по тем же пробиркам. Пробирки уравновешивают и центрифугируют в течение 3 - 5 мин. при 600 об./мин.; воду из пробирок сливают, а осадок обрабатывают, как почву по методу Романенко на яйца гельминтов (п. 4.2) и по методу Падченко (п. 4.7) на цисты кишечных простейших.

13. Исследование пыли и воздуха

13.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию

Для сбора пыли используют камеру, представляющую металлический цилиндр длиной 110 - 120 мм с внутренним диаметром 27 мм (по ширине стандартного предметного стекла). В стенке цилиндра имеется всасывающее отверстие размером 2 x 25 мм. Внутри цилиндра укреплены 2 стержня, фиксирующие предметное стекло в диаметральной плоскости и продольном направлении. С одного конца цилиндр закрывают съемной крышкой, а открытым концом присоединяют к патрубку пылесоса или другого всасывающего устройства (аспиратор, воздуходувка и т.п.).

На одну сторону чистого предметного стекла наносят тонкий слой 50%-ного раствора глицерина в виде полоски шириной 1,5 - 2,0 см и длиной 4 - 5 см. Стекло вставляют в камеру так, чтобы смазанная глицерином поверхность была обращена к всасывающему отверстию камеры. Камеру закрывают крышкой. Затем включают пылесос или другое всасывающее устройство и производят отбор пыли.

При отборе проб всасывающее отверстие камеры должно быть обращено к исследуемой поверхности на расстоянии 2 - 3 мм. Перемещать всасывающее устройство во время работы над поверхностью следует равномерно. На одну пробу собирают пыль с площади не менее 0,25 кв. м в течение 20 сек., воздуха - 60 сек. После отбора пробы пылесос или другое всасывающее устройство выключают, открывают камеру и извлекают предметное стекло. На смазанной стороне стекла будет отчетливо виден пылевой след, представляющий собой готовый препарат, который микроскопируют (при увеличении x56 - 80). Если препарат получился плотным, его просветляют 1 - 2 каплями воды или 50%-ного раствора глицерина. Под микроскопом среди пылевых частиц хорошо видны яйца гельминтов. Микроскопирование препаратов может производиться на обследуемом объекте сразу после отбора проб или в лаборатории.

Сбор проб пыли и воздуха непосредственно на предметное стекло, покрытое клейкой смазкой, исключает использование фильтров, центрифугирование, приготовление мазков и другие действия, во время которых могут быть потери яиц гельминтов или нарушение их целостности. Кроме того, использование клейких стекол ускоряет время отбора проб и позволяет, что особенно важно, при обследовании детских учреждений, просматривать предметные стекла на местах обследования. Последнее дает возможность на местах составлять план мероприятий по предупреждению загрязнения и дегельминтизации внешней среды.

13.2. Исследование пыли и воздуха на яйца гельминтов. Метод Каледина и Романенко (1982)

Для отбора и исследования проб пыли используют липкую прозрачную целлофановую ленту (скотч) со слоем клея до 3 мм. Ленты шириной 20 мм и длиной 7 - 8 см приклеивают липким слоем к разным участкам исследуемой поверхности 6 - 8 раз, в зависимости от запыленности объекта, а затем ее помещают на предметное стекло. Липкой лентой нельзя делать отбор проб пыли с бумажных поверхностей (книги), мягких игрушек и очень загрязненных предметов (половики, коврики).

В лаборатории ленту отклеивают на участках микроскопирования и вносят под нее несколько капель касторового или вазелинового масла (для устранения пузырьков воздуха), исследуют при малом увеличении микроскопа. Препарат может храниться несколько дней.

14. Методы исследования компонентов экосистемы при санитарно-паразитологической оценке природных очагов

14.1. Исследование травы и водных растений на наличие адолескариев

Отбор проб. Материал для исследования растений на наличие адолескариев отбирают в биотопах моллюсков, осуществляя целенаправленный поиск. Для отбора проб водных растений с адолескариями желательно пользоваться лупой, хотя адолескарий можно заметить даже невооруженным глазом на листьях и стеблях растений. Адолескарии встречаются одиночно и группами. Их обнаруживают преимущественно на нижней и реже верхней поверхности листьев, черешках листьев и стеблях растений. Адолескарий фасциолы внешне представляет округлое образование диаметром около 0,3 мм, прикрепившееся к растению. Адолескарии парамфистомат сходны с таковыми фасциол, замечаются в виде блестящих черных или коричневых точек.

Для получения достоверных данных, характеризующих исследуемую экосистему, объем пробы околоводной и (или) водной растительности должен составлять не менее 300 г.

Ход исследования. В лаборатории собранный материал внимательно изучают с помощью лупы. Обнаруженные адолескарии освобождают с помощью иглы и скальпеля и помещают на предметное стекло в каплю физиологического раствора. Если адолескарий живой, то внутри цисты личинка может свободно двигаться. Это чаще наблюдается, если адолескарий поместить в каплю теплой воды (37 - 38 °C). Детальное изучение морфологии и диагностических признаков проводится при микроскопировании.

Морфология адолескариев. Описание личинок фасциол и парамфистомат представлено в табл. 3.

Таблица 3

МОРФОЛОГИЯ СВОБОДНОЖИВУЩИХ ЛИЧИНОК (АДОЛЕСКАРИЕВ) ТРЕМАТОД

------------------+-----------------+------------------+-------------------
¦ Морфологические ¦Fasciola hepatica¦Fasciola gigantica¦  Paramphistomae  ¦
¦    признаки     ¦                 ¦                  ¦                  ¦
+-----------------+-----------------+------------------+------------------+
¦Форма            ¦округлая         ¦округлая          ¦полусферическая   ¦
+-----------------+-----------------+------------------+------------------+
¦Размер (диаметр) ¦0,3 мм           ¦0,3 мм            ¦0,23 - 0,26 мм    ¦
+-----------------+-----------------+------------------+------------------+
¦Оболочка         ¦двойная          ¦двойная           ¦слоистая светлая  ¦
+-----------------+-----------------+------------------+------------------+
¦Цвет             ¦молодые адолескарии молочно-белого  ¦черные,           ¦
¦                 ¦цвета, позднее желтеют, затем       ¦коричневые,       ¦
¦                 ¦темнеют до буро-коричневого цвета   ¦блестящие         ¦
+-----------------+------------------------------------+------------------+
¦Присоски         ¦почти одинаковые по размеру ротовая ¦брюшная присоска  ¦
¦                 ¦и брюшная присоски                  ¦очень крупная,    ¦
¦                 ¦                                    ¦ротовая, наоборот,¦
¦                 ¦                                    ¦рудиментарная или ¦
¦                 ¦                                    ¦слабо развита     ¦
+-----------------+------------------------------------+------------------+
¦Органы,          ¦глотка, два кишечных ствола,        ¦глазки, глотка,   ¦
¦различимые при   ¦продолжающиеся до конца тела,       ¦экскреторные      ¦
¦микроскопировании¦экскреторный пузырь                 ¦сосуды и пузырь   ¦
+-----------------+-----------------+------------------+------------------+
¦Активность живой ¦подвижная        ¦подвижная         ¦подвижная         ¦
¦личинки          ¦                 ¦                  ¦                  ¦
------------------+-----------------+------------------+-------------------

14.2. Обнаружение и сбор адолескариев. Метод Горохова

Для обнаружения и сбора адолескариев фасциолы в небольших водоемах (мочажинах, временных водоемах, где обитают малые прудовики) используют стекла размером 18 x 13 см, толщиной 1,5 мм (можно использовать куски плексигласа размером 16 x 7 см, толщиной 1,2 мм). Стекла ставят вертикально, закрепляют нижнюю часть на 2 - 3 см в грунт водоема. Плоскости стекол должны быть обращены с востока на запад. Установленные в водоеме стекла оставляют на 7 суток. Церкарии, встречая на своем пути стекла, прикрепляются к ним и инцистируются, превращаясь в адолескарии. При проверке стекол их исследуют невооруженным глазом и при необходимости заменяют другими. При наличии белых точек (возможно адолескариев) их исследуют под лупой.

Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте: