- Законы
- Кодексы
- Форум
МУК 4.1.2678-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Пеноксулама в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
2 августа 2010 года
Дата введения:
1 октября 2010 года
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
3. Введены впервые.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Пеноксулама в воде в диапазоне 0,0025 - 0,025 мг/куб. дм и в почве в диапазоне 0,1 - 1,0 мг/кг, а также уровня остаточных количеств в зерне риса в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг и в соломе риса в диапазоне 0,5 - 5,0 мг/кг.
Название действующего вещества по ИЮПАК:
2-N-[2-(2,2-дифторэтокси)-6-(трифторметил)бензолсульфонил]-2-амино-5,8 диметокси[1,2,4]триазоло[1,5-c]пиримидин.
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H F N O S.
16 14 5 5 5
Мол. масса: 483,37.
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет, запах: бледно-розовый со слегка затхлым запахом.
-14 -14
Давление паров: 9,55 x 10 Па (при 25 °C); 2,49 x 10 Па (при
20 °C).
Коэффициент распределения октанол-вода: K log P = -0,354 (без
ow
буфера), K log P = 1,137 (pH 5), K log P = -0,602 (pH 7), K log P =
ow ow ow
-1,418 (pH 9).
Температура плавления: 212 °C.
Растворимость в воде мг/куб. дм (19 °C): Без буфера - 4,91; pH 5 - 5,66; pH 7 - 408; pH 9 - 1460.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 19 °C): ксилол 0,017; 1,2-дихлороэтан - 1,99; метанол - 1,48; ацетон - 20,3; этилацетат - 3,23; н-октанол - 0,035; N,N-диметилформамид - 39,8; диметилсульфоксид - 78,4; ацетонитрил - 15,3.
Устойчив к гидролизу.
Пеноксулам - слабая кислота: pKa - 5,1 (при 20 °C).
Подвергается фотолизу, DT в воде составляет 2 дня, в почве 19 дней.
50
Основной путь разложения в почве - микробиологический.
Краткая токсикологическая характеристика
Пеноксулам относится к веществам мало опасным по острой пероральной и
дермальной токсичности (ЛД для крыс более 5000 мг/кг), но умеренно
50
опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК для крыс (4 ч) более
50
3500 мг/куб. м). Вызывает легкое покраснение кожных покровов и глаз
кроликов, не вызывает покраснения кожных покровов морских свинок.
Область применения
Пеноксулам - гербицид системного действия, который проникает через листья и корни, хорошо передвигается по ксилеме и флоэме. Подавляет развитие злаковых однолетних сорняков, а также некоторых двудольных: сыть круглая, клубнекамыш при довсходовом, послевсходовом применении и внесении в воду в посевах риса при норме расхода 10 - 50 г д.в./га.
Предлагается в России для применения в посевах риса.
В России для Пеноксулама установлены следующие гигиенические нормативы: ПДК в воде - 0,003 мг/куб. дм, ПДК в почве - 0,9 мг/кг; МДУ в зерне риса - 0,5 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ПЕНОКСУЛАМА
---------+-----------------+-------------+-----------+---------+----------- ¦Анализи-¦ Диапазон ¦ Показатель ¦Стандартное¦Предел ¦Предел ¦ ¦руемый ¦ определяемых ¦ точности ¦отклонение ¦повторяе-¦воспроиз- ¦ ¦объект ¦ концентраций, ¦ (граница ¦повторяе- ¦мости, ¦водимости,¦ ¦ ¦ мг/кг ¦относительной¦мости, ¦r, % ¦R, % ¦ ¦ ¦ ¦погрешности),¦сигма , % ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦+/- дельта, %¦ r ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ P = 0,95 ¦ ¦ ¦ ¦ +--------+-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦Вода ¦Менее 0,005 ¦150 ¦3,8 ¦10,7 ¦12,7 ¦ ¦ +-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦ ¦0,005 - 0,01 вкл.¦100 ¦3,5 ¦9,8 ¦11,7 ¦ ¦ +-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦ ¦0,01 - 0,025 вкл.¦50 ¦4,0 ¦11,2 ¦13,4 ¦ +--------+-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦Почва ¦0,1 - 1,0 вкл. ¦25 ¦5,0 ¦14,0 ¦20,0 ¦ +--------+-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦Зерно ¦0,02 - 0,1 вкл. ¦50 ¦4,5 ¦12,6 ¦15,0 ¦ ¦риса +-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦ ¦0,1 - 0,2 вкл. ¦25 ¦4,5 ¦12,6 ¦15,0 ¦ +--------+-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦Солома ¦0,5 - 1,0 вкл. ¦25 ¦4,5 ¦12,6 ¦15,0 ¦ ¦риса +-----------------+-------------+-----------+---------+----------+ ¦ ¦1,0 - 5,0 вкл. ¦25 ¦5,0 ¦14,0 ¦20,0 ¦ ---------+-----------------+-------------+-----------+---------+-----------
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
Таблица 2
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ, ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ПЕНОКСУЛАМА
------------+-------------------------------------------------------------- ¦Анализиру- ¦ Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 ¦ ¦емый объект+-------+-------------+----------+-----------+----------------+ ¦ ¦Предел ¦ Диапазон ¦ Полнота ¦Стандартное¦Доверительный ¦ ¦ ¦обнару-¦определяемых ¦извлечения¦отклонение,¦интервал сред- ¦ ¦ ¦жения, ¦концентраций,¦вещества, ¦ S, % ¦него результата,¦ ¦ ¦мг/кг ¦ мг/кг ¦ % ¦ ¦+/-, % ¦ +-----------+-------+-------------+----------+-----------+----------------+ ¦Вода ¦0,005 ¦0,005 - 0,05 ¦95,7 ¦2,6 ¦0,6 ¦ +-----------+-------+-------------+----------+-----------+----------------+ ¦Почва ¦0,1 ¦0,1 - 1,0 ¦79,8 ¦2,4 ¦0,53 ¦ +-----------+-------+-------------+----------+-----------+----------------+ ¦Зерно риса ¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦72,3 ¦1,5 ¦0,5 ¦ +-----------+-------+-------------+----------+-----------+----------------+ ¦Солома риса¦0,5 ¦0,5 - 5,0 ¦74,4 ¦3,4 ¦0,8 ¦ ------------+-------+-------------+----------+-----------+-----------------
2. Метод измерений
Метод основан на определении Пеноксулама с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов водно-органической смесью растворителей, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах Диапак C16.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические "OHAUS", ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 - специальный (I) Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г "ACCULAB" V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 - средний (III) Колбы мерные на 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74 Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91 Хроматограф жидкостной Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу номер госрегистрации N 15311-02 Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Пеноксулам, CAS 219714-96-2, аналитический
стандарт с содержанием д.в. не менее 98,0%,
Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованный по
ИСО-9001-2000
Алюминий окись для хроматографии, ч. ТУ 6-09-3916-75
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86
Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят),
деионизированная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709-72
4
Гелий, очищенный марки "А" ТУ-51-940-80
Калий марганцевокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 857-95
Кислота уксусная, ледяная, х.ч. ГОСТ 61-75
Концентрирующие патроны Диапак С 16 (0,6 г),
фирма "БиоХимМак СТ" ТУ 4215-002-05451931-94
Натрий углекислый, кислый, х.ч. ГОСТ 4201-79
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Эфир диэтиловый, ФС 42-3643-98
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для
работы с концентрирующими патронами Диапак C16 ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб "SKLO UNION TYP LT1"
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см,
полипропилен, кат. N 3120-0250, фирма "NALGENE"
Ванна ультразвуковая "UNITRA" UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные, стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной
баней В-480, фирма "Buchi"
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100,
250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм,
с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18,
зернение 5 мкм, фирма "Waters"
Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport
Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry C 8,
длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение
5 мкм, фирма "Waters"
Сито лабораторное с полотном из латуни или
нержавеющей стали с размером ячеек 1 мм ГОСТ 3826-82
и ГОСТ 6613-86
Стаканы стеклянные, термостойкие объемом
100 - 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной
колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой
объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные, "красная лента" ТУ 6-09-1678-86
Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм
с отверстиями пор 20 мкм, фирма "Waters"
Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок
емкостью 200 куб. см
Шприц инъекционный однократного применения объемом
10 куб. см ГОСТ 24861-91
(ИСО 7886-84)
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия, концентрирующих патронов Диапак C16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C16, построение калибровочной кривой.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1. Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2. Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и очищенную воду, а также ледяную уксусную кислоту.
В плоскодонную колбу объемом 1000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, 500 куб. см очищенной воды и 1,0 куб. см ледяной уксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.
7.2.2. Приготовление рабочих растворов
7.2.2.1. Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 246 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 куб. см, куда предварительно наливают около 100 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.2.2. Приготовление 0,1 М раствора соляной кислоты.
Мерной пипеткой отбирают 4,1 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 куб. см, куда предварительно наливают около 100 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.2.3. Приготовление 5% раствора гидрокарбоната натрия.
50 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 - 300 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.3. Приготовление градуировочных растворов
7.2.3.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Пеноксулама 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Пеноксулама в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой.
7.2.3.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Пеноксулама 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой.
7.2.3.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Пироксулама 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 3 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.3.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Пеноксулама 0,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 4 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.3.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Пеноксулама 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 5 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.3.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией Пеноксулама 0,1 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 6 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.3.7. Стандартные растворы Пеноксулама с концентрацией 25,0; 10,0; 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; и 0,2 мкг/куб. см для внесения в образцы.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 25,0; 10,0; 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; и 0,2 мкг/куб. см и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.
7.3. Установление градуированной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Пеноксулама в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.
7.4. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта
7.4.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 куб. см ацетонитрила.
7.4.1. Проверка хроматографического поведения Пеноксулама на колонке с окисью алюминия
В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора Пеноксулама в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см смеси ацетонитрил-ледяная уксусная кислота в соотношении 99:1, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
Исходную колбу обмывают еще двумя порциями смеси ацетонитрил-ледяная уксусная кислота в соотношении 99:1 объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Пеноксулам, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Пеноксулама на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.
7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак C16 для очистки экстракта
7.5.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак C16 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
Патрон Диапак C16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.5.2. Проверка хроматографического поведения Пеноксулама на концентрирующих патронах Диапак C16
Из стандартного раствора Пеноксулама в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Пеноксулам, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Пеноксулама на концентрирующих патронах Диапак C16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry C8 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 - 4 часа.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна" и ГОСТ 27262 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб".
Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы - в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.
Отобранные пробы зерна и соломки подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
9. Проведение определений
Анализ образцов должен быть выполнен в течение одного дня.
9.1. Вода
9.1.1. Экстракция
Пробу воды объемом 200 куб. см помещают в делительную воронку объемом 500 куб. см, прибавляют туда 20 г хлористого натрия, 2 куб. см 6 М соляной кислоты (до pH 1) и перемешивают до полного растворения соли. Пеноксулам экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 50 куб. см, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (диэтиловый эфир) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.2. Очистка на концентрирующих патронах Диапак C16
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.1, растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак C16. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат объединяют с предыдущим и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Почва
9.2.1. Экстракция
Пробу почвы весом 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют туда 10 куб. см 0,1 М соляной кислоты и выдерживают 5 мин. при комнатной температуре. Пеноксулам экстрагируют 50 куб. см ацетона в течение 10 мин. в ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин. на механическом встряхивателе. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 250 куб. см с 10 куб. см 5% раствора гидрокарбоната натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетона и помещая каждый раз на 10 мин. на механический встряхиватель. Пробы центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 оборотов в минуту, супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 10 куб. см 5% раствора гидрокарбоната натрия и перемешивают. Затем объединенный экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см, остаток в колбе промывают 10 куб. см ацетона, фильтруют и объединяют с основным экстрактом. Экстракт упаривают до водного остатка (осторожно, вспенивание!) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К водному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.2.1, прибавляют 50 куб. см дистиллированной воды, 1 куб. см 6 М соляной кислоты (до pH 1), перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Туда же прибавляют 10 г сухого хлорида натрия и интенсивно перемешивают до полного растворения соли. Пеноксулам экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 25 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой диэтилового эфира объединяют в химическом стакане объемом 100 куб. см, нижний водный слой отбрасывают. Эфирный слой возвращают в делительную воронку и экстрагируют Пеноксулам тремя порциями 5% раствора гидрокарбоната натрия объемом по 20 куб. см, интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой с эмульсией объединяют в химическом стакане объемом 100 куб. см. Эфир отбрасывают.
Водный слой с эмульсией возвращают в делительную воронку и выдерживают до прозрачности нижнего водного слоя. Водный слой помещают в химический стакан объемом 100 куб. см, выделившийся эфир отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку, прибавляют туда 5 г сухого хлорида натрия и перемешивают до полного растворения соли. Затем содержимое воронки подкисляют 6 М соляной кислотой до pH 1 и дегазируют.
Пеноксулам экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой диэтилового эфира объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C16
Сухой остаток, полученный в п. 9.2.2, растворяют в 10 куб. см смеси ацетонитрил-ледяная уксусная кислота в соотношении 99:1, тщательно обмывают стенки концентратора, наносят на подготовленную колонку, элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил-уксусная кислота в соотношении 99:1 и вносят на колонку. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток подвергают дальнейшей очистке на концентрирующих патронах Диапак C16, как указано в п. 9.1.2.
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 5 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Зерно риса
9.3.1. Экстракция
Образец измельченного зерна риса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см смеси ацетон - 0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1 и помещают на 10 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 10 мин. на механический встряхиватель. Пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 оборотов в минуту и экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 куб. см с 10 куб. см 5% раствора гидрокарбоната натрия через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 куб. см смеси ацетон-0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1, помещая на 10 мин. на механический встряхиватель. Пробы центрифугируют в течение 5 минут при скорости 4000 оборотов в минуту, супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 10 куб. см 5% раствора гидрокарбоната натрия. Затем объединенный экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см, остаток в колбе промывают 10 см ацетона, фильтруют и объединяют с основным экстрактом. Экстракт упаривают до водного остатка (осторожно, вспенивание!) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C16.
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.4. Солома риса
9.4.1. Экстракция
Образец измельченной соломы риса массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 100 куб. см смеси ацетон-0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1 и помещают на 10 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 10 мин. на механический встряхиватель. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 500 куб. см с 20 куб. см 5% раствора гидрокарбоната натрия через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 70 куб. см смеси ацетон-0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1 и помещая на 10 мин. на механический встряхиватель. Экстракты фильтруют объединяют в конической колбе объемом 500 куб. см с 20 куб. см 5% раствора гидрокарбоната натрия. Затем объединенный экстракт фильтруют в колбу объемом 500 см, остаток в колбе промывают 15 куб. см ацетона, фильтруют и объединяют с основным экстрактом (общий объем экстрагента составляет при этом 275 куб. см; для работы берут аликвоту объемом 55 куб. см - 20% от объема). Экстракт упаривают до водного остатка (осторожно, вспенивание!) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C16.
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 5 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.5. Условия хроматографирования
Хроматограф жидкостной Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу, номер госрегистрации N 15311-02 или другой с аналогичными характеристиками.
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм x 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".
Предколонка стальная Symmetry C8, 20 мм x 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".
Температура колонки: 30 °C.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-ледяная уксусная кислота в соотношении 500:500:1.
Длина волны: 290 нм.
Время удерживания Пеноксулама: 8,563 мин. +/- 2%.
Чувствительность не менее 0,0025 AUFS (единиц абсорбции на шкалу).
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Пеноксулама рассчитывают по формуле:
S x A x V
пр
X = ------------- P,
100 x S x m
ст
где:
X - содержание Пеноксулама в пробе, мг/кг;
S - высота (площадь) пика стандарта, мм;
ст
S - высота (площадь) пика образца, мм;
пр
A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см;
m - масса анализируемого образца, г (куб. см);
P - содержание Пеноксулама в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом
r = 2,8 x сигма .
r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг, при вероятности Р = 0,95,
где:
_
X - среднее арифметическое значение результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
X
ДЕЛЬТА = дельта ---,
100
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
"содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>
--------------------------------
<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию:
д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ ,
д л,X л,X'
где +/- ДЕЛЬТА _, (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности
л,X л,X'
(абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:
ДЕЛЬТА = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
л
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
X
ДЕЛЬТА = дельта ---,
100
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле:
к
_ _
К = X' - X - C ),
к д
_ _
где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в
образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки,
соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2
К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _.
л,X' л,X
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
|К | <= К, (2)
к
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".
Комментарии
Комментирование через социальные сервисы Facebook и Вконтакте:
Федеральное